岛津液相色谱维护课件

岛津液相色谱维护培训岛津国际贸易（上海）有限公司岛津液相色谱维护岛津液相色谱维护岛津液相色谱维护第一部分液相色谱故障排除经验液相色谱常见问题岛津液相色谱维护LC10Avp岛津液相色谱维护岛津液相色谱维护LC-20A

Prominence岛津液相色谱维护液相色谱简易流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器溶剂数据处理岛津液相色谱维护1.（简单）等度系统储液瓶脱气机泵单元手动进样器色谱柱检测器废液瓶1234567岛津液相色谱维护储液瓶脱气机泵单元自动进样器色谱柱检测器废液瓶低压梯度单元混合器2.低压梯度系统123456789岛津液相色谱维护储液瓶脱气机泵单元自动进样器色谱柱检测器废液瓶混合器3.高压梯度系统12345678岛津液相色谱维护液相色谱故障排除经验故障的确定—至少要重复出现两次以上初步判断故障引起的原因—方法或硬件由经验或平时的积累确定故障原因—平时做好观察和记录当不能确认故障原因时—采用排除法逐一考察可能引起故障的因素确定故障能否自行处理—不要贸然拆卸不熟悉的部件岛津液相色谱维护常见故障因素仪器环境：—实验室的温度、湿度、酸度等

—实验室震动、灰尘等问题

—电源及地线问题使用条件：—流动相（pH值、均匀度、气泡等）—样品（样品分解、氧化、样品溶剂等）—色谱柱（污染、堵塞、塌陷等）硬件问题：—输液泵—进样器—检测器岛津液相色谱维护平常保养-做好平常的保养可以有效的降低故障的发生率-做好平常的保养可以延长仪器的使用寿命常做的保养—保持仪器的环境（经常清洁仪器，尤其是灰尘）—泵的保养（使用缓冲盐时要清洗柱塞，水和盐不长期保存在泵里）—进样器要经常清洗，避免污染物吸附或堵塞管路—尽量进行样品前处理—色谱柱要定期清洗，保证柱效及使用寿命—系统中不要长期保存水和盐，长时间不用时应将仪器所有部分全部更换为70％以上的甲醇，避免细菌的滋生及盐的析出。岛津液相色谱维护液相色谱常见问题

压力异常（偏高、波动）

漏液保留时间漂移

基线问题（漂移、噪声）

峰形异常岛津液相色谱维护压力压力是液相色谱中最重要的指标，要经常关注压力的变化。保留时间的变化经常是由于压力问题引起的。不同溶剂即使在相同流速和温度的情况下压力也是不同的。记下仪器正常状态时，在一定条件下（流速、温度）的压力显示值。岛津液相色谱维护压力高时首先要确认是色谱柱堵塞还是系统堵塞色谱柱堵时：确认可能造成堵塞的样品的性质，相应选择合适的清洗溶剂。系统堵塞，首先应确认是那一部份堵塞，依据情况排除。岛津液相色谱维护容易发生堵塞的部件保护柱及色谱柱线路过滤器管路连接处进样器检测器流通池岛津液相色谱维护压力低如果压力为零：泵头中没有液体，而是充满了气泡单向阀完全堵死柱塞杆折断压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)如果有压力但是压力比正常时低：漏液

单向阀堵塞岛津液相色谱维护压力波动压力在短时间内剧烈波动。泵头中有气泡单向阀脏柱塞密封圈漏液岛津液相色谱维护经常漏液的部件泵：柱塞密封圈排液阀手动进样器：转子密封圈磨损检测器：流通池窗口（垫片损坏、透镜破碎）接头处漏液：（接头松动，接头脏，接头磨损，部件不匹配）岛津液相色谱维护保留时间不稳定吸滤头脏泵输液不正常（压力波动、气泡等）流动相组分变化流动相缓冲能力不够色谱柱平衡时间不够柱温的变化柱子问题岛津液相色谱维护噪音大流动相污染、变质或由低质溶剂配成有地方漏液流动相、泵、检测器流通池内有气泡流动相各溶剂不相溶或混和不均匀检测池能量不足流通池被污染温度影响（检测器和柱温差别太大）其他电子设备的影响岛津液相色谱维护基线漂移流动相污染，变质或由低品质溶剂配成流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂)温度波动柱子平衡时间不够流通池被污染或有气泡流通池窗口破裂岛津液相色谱维护峰形问题死体积太大柱子被污染或堵塞色谱柱塌陷色谱柱化学或次级保留（硅羟基效应）色谱柱被重金属污染流动相缓冲不足或不合适样品溶剂选择不当，与流动相之间极性差异太大样品过载（浓度或体积）柱温过低岛津液相色谱维护鬼峰流动相被污染进样阀残余峰样品中未知物色谱柱中的污染物岛津液相色谱维护第二部分日常使用注意点硬件基础知识容易出故障的部件及常见故障的排除

岛津液相色谱维护液相系统维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器色谱柱岛津液相色谱维护一、输液部分岛津液相色谱维护管线选择材料

不锈钢TeflonPEEK(聚醚醚酮)尺寸

0.1mmI.D.x1.6mmO.D.

0.3mmI.D.x1.6mmO.D.

0.5mmI.D.x1.6mmO.D.

0.8mmI.D.x1.6mmO.D.岛津液相色谱维护管线材料不锈钢(可用于所有连接)能承受几千kgf/cm2

压力酸性或高浓度盐环境中易腐蚀(尤其在pH小于2时)PEEK(可用于所有连接)能承受高达250kgf/cm2压力可在整个PH范围(pH1-14)内使用

不适用于高溶解性溶剂如氯仿等Teflon(用于柱后阻尼管、反应管和排液管)化学惰性大能承受5kgf/cm2

压力岛津液相色谱维护接头不锈钢接头/垫圈

主要用于输液泵、进样器的连接能承受400kgf/cm2压力一旦固定，垫圈不可再动PEEK接头

主要用于色谱柱、检测器的连接易于安装能承受250kgf/cm2压力容易产生死体积不锈钢接头垫圈PEEK接头岛津液相色谱维护死体积死体积可能会引起分离度变差和重现性变差等问题.管线公螺母死体积好的连接差的连接岛津液相色谱维护选择原则采用“HPLC”

级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配流动相岛津液相色谱维护溶剂的等级HPLC级优级纯分析纯都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒）优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱流动相岛津液相色谱维护水/甲醇梯度ODS柱鬼峰GradientCurve1ml/min,0-100%MeOHover10minsandholdfor15mins.鬼峰的出现流动相岛津液相色谱维护水的等级纯化水蒸馏水去离子水波长(nm)纯化水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物吸光率流动相岛津液相色谱维护选择缓冲液的步骤

1.确定最佳分离状态时的流动相pH

2.选择具有与流动相的pH相近的pKa的缓冲液（即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液）3.确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液）流动相岛津液相色谱维护代表性弱酸的pKa

pK1

pK2pK3醋酸4.87柠檬酸3.134.766.40磷酸2.167.2112.32流动相岛津液相色谱维护缓冲液的使用

使用前必须过滤使用后一定要对柱子进行清洗，以免造成腐蚀、磨损及阻塞:首先用5～10％的甲醇水溶液冲洗10-30min（0.5-1ml/min），再用甲醇冲洗30min(0.1-0.5ml/min)

易受到细菌和霉菌的影响

注意冲洗次序，不能直接用有机溶剂冲洗流动相岛津液相色谱维护流动相的更换不互溶的流动相不能直接更换缓冲盐不能直接用有机溶剂更换水正己烷异丙醇缓冲盐有机溶剂水岛津液相色谱维护过滤：0.45um或更小孔径滤膜

目的：除去溶剂中的微小物理颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是在使用无机盐配制的缓冲液的时候必须过滤脱气：除去在流动相中溶解或彼此混合而产生的气泡气泡对测定的影响：

1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积

2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形

3）检测器中的气泡产生基线波动无在线脱气应注意：

1）每天脱气

2）如使用氦脱气，对混合溶剂脱气时间不能过长溶剂前处理流动相处理岛津液相色谱维护LC-20A日常维护

－输液泵LC-20AD并联双微柱塞方式高性能输液泵LC-20AT串联双柱塞输液泵LC-20AB并联双微柱塞高压梯度输液泵

送液单元项目频率备注检查或更换LINEFILTER6MonthsWater1ml/min，≦0.3Mpa检查或更换PLUNGER&SEAL1Year检查或更换CheckValve1Year检查或更换Diaphragm/Flowlineseal2YearsBearing加润滑脂3Years清洗方法：异丙醇超声5min。岛津液相色谱维护LC-20A日常维护

－输液泵LC-20AD/AB岛津液相色谱维护LC-20A日常维护

－输液泵LC-20ATLC-20AT岛津液相色谱维护吸滤头吸滤头部件号：228-45707-91吸滤头部件号：228-21984-01岛津液相色谱维护吸滤头材料：不锈钢烧结(或陶瓷），孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用异丙醇（或5％稀硝酸），超声波清洗，再用蒸馏水清洗岛津液相色谱维护泵工作示意图凸轮柱塞杆柱塞密封圈单向阀泵头流动相入口流动相出口岛津液相色谱维护单向阀T泵：串联式往复泵D泵：并联式往复泵岛津液相色谱维护LC-20ATLC-20AT岛津液相色谱维护LC-20AD岛津液相色谱维护单向阀单向阀结构球座吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头抛光面宝石球流动相单向阀工作原理岛津液相色谱维护单向阀结构请不要分解阀心A和阀心B重新组装后性能不被保证，输液可能不稳定注意：岛津液相色谱维护LC20AT主入口阀部件号:228-45704-92LC20AD入口阀LC20AT副入口阀部件号:

228-45704-91LC20AD出口阀部件号:

228-45705-91单向阀LC10ADvp出口阀LC10ATvp出口阀部件号:

228-34976-91LC10ADvp入口阀部件号:

228-39093-92LC10ATvp入口阀部件号:

228-32166-91岛津液相色谱维护单向阀清洗故障：宝石球或球座受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：打开排液阀，以异丙醇为流动相输液拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗注意：超声清洗时开口端向上放置。View岛津液相色谱维护故障：宝石球粘附于垫片表现：泵无法吸液或排液，流路不通措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压，使宝石球与垫片分开

2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗单向阀清洗View岛津液相色谱维护柱塞密封圈柱塞密封圈LC-20ADLC-20ABLC-10ADvp部件号228-35146柱塞密封圈LC-20ATLC-10ATvp部件号：228-35145取下和安装柱塞密封圈工具岛津液相色谱维护柱塞密封圈的更换故障：密封圈磨损导致密封不良现象：系统压力波动大或漏液措施：更换密封圈注意点：

拆卸泵头前，柱塞杆复位（P－SET）流动相泵头清洗管路柱塞杆密封圈View岛津液相色谱维护柱塞杆柱塞杆LC-10ADvp用部件号：228-35281-91柱塞杆LC-10ATvp用部件号：228-35009-92柱塞杆LC-20AD/LC-20AB用部件号：228-35281-95柱塞杆LC-20AT用部件号：228-35009-93岛津液相色谱维护柱塞杆更换更换柱塞密封圈后仍然漏液时；柱塞密封圈使用寿命短时；柱塞杆损伤时，应更换柱塞杆。岛津液相色谱维护柱塞隔膜更换柱塞时，应同时更换隔膜。隔膜损坏导致泵头后部漏液时，应更换隔膜。注意：只有D系列泵有隔膜，T系列泵由于设计不同，没有隔膜。隔膜LC-20AD/LC-20AB/LC-10ADvp用部件号：228-32784-91View岛津液相色谱维护线路过滤器故障：堵塞现象：系统压力偏高措施：异丙醇（或5％稀硝酸），超声波清洗判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力>5kgf/cm2，则堵塞。排液阀压力传感器线路过滤器流动相线路过滤器部件号：228-32744岛津液相色谱维护过滤器的更换旧过滤器的取出新过滤器的安装岛津液相色谱维护排液阀漏液故障：排液阀垫圈损伤或密封不良现象：打开排液阀进行排气时，从装有排液阀的螺口处漏液措施：排液阀手柄按逆时针方向旋转取下，确认垫圈表面有否损伤。有损伤，进行更换；附有脏物，擦洗掉，再确认。岛津液相色谱维护LC-20A系列泵部件号：228-45574-91LC-10Avp系列泵部件号：670-11518排液阀岛津液相色谱维护混合器混合器不同体积的连接方法岛津液相色谱维护输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器单一或混合溶剂等度洗脱岛津液相色谱维护梯度洗脱装置：高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。HPGE梯度混合器低压梯度比例阀LPGE高压常压高压/低压梯度系统岛津液相色谱维护分析时间长分离度差

MeOH/H2O=6/4MeOH/H2O=8/2(column:ODS)使用梯度洗脱的原因当等度洗脱时：岛津液相色谱维护95%30%甲醇浓度在最短时间内获得最佳的分离使用梯度洗脱的原因当采用梯度洗脱时：岛津液相色谱维护梯度洗脱形式：线性梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化和时间成线性比例指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度随时间的变化呈指数关系折线梯度：梯度洗脱方式岛津液相色谱维护梯度洗脱形式的选择岛津液相色谱维护梯度洗脱：优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度注意事项：溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差梯度混合的溶剂互溶性要好梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）查看空白实验的数据遵守分析周期。（最初的分析数据不采用）梯度洗脱要点岛津液相色谱维护1.使用流动相溶解样品

--减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要

--保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀

2.进样前最好使用0.45um的膜进行过滤如果样品很脏，要使用0.2um的膜进行过滤3.对于含有复杂基质的样品，最好过前处理小柱后再进样。样品前处理岛津液相色谱维护混合器过滤组件常见故障：堵塞混合器堵塞往往是由于混合器过滤组件堵塞引起的。处理方法：按图中结构卸下过滤组件，5%稀硝酸或其他溶剂超生清洗或更换新的组件标准或半微量混合器用部件号：228-18872-93岛津液相色谱维护二、进样部分岛津液相色谱维护进样器自动进样器手动进样器(7725/7725i）原理：（六通阀）注入方式：

1）全量注入

2）部分注入7725i手动进样阀岛津液相色谱维护手动进样器的原理图岛津液相色谱维护7725/7725i手动进样器结构图定子密封部件号：228-32211-31转子密封(Vespel)部件号：670-12098-51(Tefzel)部件号：670-12098-56转子密封适用范围岛津液相色谱维护进样量和检测器响应的关系示意图进样量

定量环体积一半三倍定量环体积全量注入部分注入响应值岛津液相色谱维护交叉污染的原因微量注射器红色表示残留样品岛津液相色谱维护进样口清洗（1）将附件进样口清洗器安在注射器上。（2）清洗液（试样溶剂或不含盐的流动相等）用注射器吸入（3）在进样状态下，将针孔清洗器压接在针导管上，流入清洗液1ml左右（4）使用缓冲盐后，用水清洗流路和针孔（5）不应用微型注射器清洗（6）清洗液可能反喷，因此注射器应慢慢地推压进样口清洗器手柄组件针导管针管岛津液相色谱维护

手动进样器定子转子针头密封垫弹簧不锈钢套操作注意点：1）进样时，进样针应插到底2）不使用时将针头留在进样器内3）进样应使用液相色谱专用平头进样针4）样品溶液pH小于10,常用密封垫的Vespel材质，适用pH<10,否则换Tefzel或PEEK材质的密封垫pH0-145）清洗应使用专用针口清洗器岛津液相色谱维护故障处理漏液

如果液体从定子和定子环之间流出、或从针孔流出，或从排液口流出，上紧压力调整螺钉，如果不成功更换转子或定子面组件针密封漏液

针的外径由于有偏差，在使用比针外径小的注射器时，进样口不能严实密封，产生漏液，使进样量不准。从进样口取出针，用铅笔的橡皮头将针导管压入，针密封上承受压力使孔变小达到严实密封。岛津液相色谱维护三、分离部分岛津液相色谱维护色谱柱的日常保养购买新柱后一定要仔细阅读说明书，确认柱的使用条件以及清洗再生步骤，按照说明书条件测试色谱柱柱效，记录使用压力定期检测柱压和柱效不同流动相之间转换时应注意溶剂的互溶性确认样品不会在流动相中析出或带有固体不溶物，请使用0.45um或0.2um的一次性滤膜过滤样品，或者进行前处理。为了延长色谱柱使用寿命，请使用保护柱。定期用合适的溶剂清洗或再生色谱柱长期不用时，清洗干净后，使用柱子说明书中指明的溶剂保存。柱子要从仪器上卸下并用堵头密封后保存。定期用合适的流动相清洗保存的柱子，避免干涸。岛津液相色谱维护峰的变形根部变宽有肩或分叉岛津液相色谱维护峰产生有肩或分叉的原因1.

柱子劣化（进口处产生不均匀的空隙）2.样品劣化（生成氧化物、分解物等）判断标准

所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化岛津液相色谱维护色谱柱柱效降低原因滤片或填料堵塞样品或流动相中杂质吸附机械振动产生空隙填料变性岛津液相色谱维护滤片或填料堵塞使用预柱缓冲液和溶剂使用0.45um滤膜过滤样品溶液使用0.45um滤膜过滤反向连接色谱柱，使用清洗溶剂以小流量送液打开柱头，清洗或更换滤片岛津液相色谱维护样品或流动相中杂质吸附杂质会产生拖尾峰使用高溶解性溶剂清洗色谱柱仅几毫米深度会被污染色谱柱取出污染填料，装填新的填料岛津液相色谱维护机械振动产生空隙不要撞击色谱柱，如：色谱柱掉落或柱压急剧变化。8945612370xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx00000000LC-20AD:::::::输液时不要打开排液阀岛津液相色谱维护色谱柱类型色谱柱的类型及适用范围硅胶基底聚合物基底pH范围2–7.5宽范围有机溶剂所有有限制压力<200kgf/cm2低压温度宽范围<60℃岛津液相色谱维护产生峰变形的原因柱进口污染柱内存在空隙样品过载溶解样品的溶剂选择不当二次保留效应担体表面存在硅醇基担体表面残留重金属岛津液相色谱维护溶解样品的溶剂选择不当最好不要选择高溶解性的试剂作为溶解样品的溶剂甲醇作为溶剂20uLCaffeine乙醇作为溶剂20uLCaffeine乙醇作为溶剂10uLCaffeine最好注入少量样品岛津液相色谱维护柱温箱分析结果重现性好提高柱效降低柱压保证检测稳定性

岛津液相色谱维护常用检测器紫外检测器（包括二极管阵列检测器）荧光检测器示差折光检测器电导检测器蒸发光散射检测器质谱检测器岛津液相色谱维护原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收定量基础：朗伯比耳定律，A＝KCL优点：1）灵敏度高

2）对温度和流速不敏感

3）可用于梯度洗提缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质紫外检测器岛津液相色谱维护二极管阵列检测器岛津液相色谱维护二极管阵列检测器（SPD-M20A）

-二十一世纪标准紫外检测器色谱定性依据：

保留时间常规紫外检测器峰纯度二极管阵列检测器二极管阵列检测器岛津液相色谱维护

样品池二极管阵列光栅D2/W灯每一组分可在每一波长处得到一吸光度值二极管阵列检测器岛津液相色谱维护1）采集三维谱图2）峰纯度检验3）光谱库检索4）可以发现单波长检测时未测到的峰二极管阵列检测器的优点岛津液相色谱维护原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测优点：1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一

2）选择性好

3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）荧光检测器岛津液相色谱维护原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。优点：通用型检测器，缺点：1）对温度变化敏感2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测3）属于中等灵敏度的检测器示差折光检测器岛津液相色谱维护原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率增加2%-2.5%)用途：主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子电导检测器岛津液相色谱维护原理:色谱柱后流出物在通向检测器途中，被高速氮气喷成雾状液滴，溶质形成不挥发的微小颗粒，被载气带到检测系统。进入散射室中，检验散射光的强度。优点:消除了溶剂干扰以及温度变化带来的基线漂移，可梯度洗脱，灵敏度高缺点：不能使用不挥发性性盐做流动相，如磷酸盐。

蒸发光散射检测器岛津液相色谱维护质谱检测器强大的定性和选择性能力多组份样品的准确定性；

未充分分离组份峰的鉴别；消除杂质干扰；可作为便捷的定性分析用于合成和衍生反应的研究；作NMR