《生物化学》实验教学大纲

《生物化学》实验教学大纲一、课程编号：14040011适用专业：临床医学课程类别：学科专业基础必修开课学期：3实验学时：24二、开课实验室：基础医学部生物化学实验室三、实验教材及参考书教材：卢新华主编，《机能实验学》第二版，世界图书出版社，出版时间，2011年参考书目：吴士良主编，《生物化学与分子生物学实验教程》第一版，科学出版社，出版时间，2006年四、实验教学目的和要求1.实验前预习实验讲义与有关理论，明确实验目的、原理、预期的结果、操作关键步骤及注意事项，计划安排实验工作时间。勤于动手细心操作，认真观察实验变化过程与记录原始数据，善于理论联系实践，综合分析实验现象与准确解释并得出实验结论，及时完成实验报告。2.掌握各项生物化学实验的基本操作技能：生化物质的分离、制备、分析和鉴定等基本实验技术及原理；各种常用玻璃仪器的洗涤和使用，如刻度吸量管的使用；离心机、电泳系统、分光光度计等常规仪器的原理及使用。3.掌握以下各项生化实验基本原理和基本技术：实验基本操作训练、蛋白质的两性反应与蛋白质等电点的测定方法；蛋白质电泳技术；检测影响酶活性因素的方法；分离纯化与鉴定糖原的方法分光光度计的使用与定量实验。五、考核形式要求实验成绩占总评成绩的20%，其中实验报告成绩与实验操作考核成绩各占10%。

六、实验项目及要求序号实验项目名称实验类型实验学时每组人数实验要求目的要求1基本操作训练、蛋白质的两性反应和酪蛋白等电点的测定验证420必修掌握一般玻璃仪器的洗涤法和刻度吸量管的使用。蛋白质的两性反应性质。蛋白质等电点的测定。2醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质综合420必修掌握电泳技术的原理及醋酸纤维薄膜电泳操作技术。3温度、酸碱度、激活剂与抑制剂对酶活性的影响验证420必修掌握温度、pH、激活剂与抑制剂对酶活性的影响。4肝糖原的提取、鉴定与定量综合420必修掌握提取动物肝糖原的方法，通过实验观察饥饿和饱食对肝糖原含量的影响。5分光光度法、分光光度计的使用及血糖的测定综合420必修掌握分光光度法原理及分光光度计的使用。掌握邻甲苯胺法测血糖。6分子生物学技术（电教）演示220必修了解常用分子生物学技术7实验操作考核综合220必修检查学生实际操作能力实验一实验基本操作训练、蛋白质的两性反应、蛋白质等电点的测定目的和要求：刻度吸量管的使用；通过实验进一步了解蛋白质的两性反应性质，熟悉操作方法，分析和判断实验结果。实验内容：认识刻度吸量管、掌握选用原则及使用方法；训练用1ml、2ml、5ml等刻度吸量管准确吸取1ml、2ml、5ml自来水，放入试管中，然后用1ml吸量管取0.5ml硫酸铜溶液分别加入上述试管中，用不同的方法混匀；蛋白质分子是两性电解质，pH＜pI，使蛋白质带正电荷；pH＞pI，使蛋白质带负电荷；蛋白质在等电点时所带的正负电荷相等，净电荷为零，此时溶解度最小，容易聚沉。用酸与碱分别滴入蛋白质溶液，借助酸碱指示剂初步判断蛋白质带电荷状况及等电点范围。用不同浓度醋酸与醋酸钠溶液配制成不同pH值溶液，观察酪蛋白在不同pH值溶液中的溶解状况，推理出蛋白质的等电点。实验二醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质目的和要求：了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维薄膜电泳操作技术。实验内容：血清中各种蛋白质的等电点大都低于7.0，在pH8.6的缓冲液中它们电离成负离子，在电场中向正极移动。将醋酸纤维薄膜浸泡于pH8.6的缓冲液中，血清蛋白质点样后，进行电泳，由于各种蛋白质的等电点、分子量、分子形状不一，在同一电场中的迁移率不同而将其分离。实验三温度、酸碱度、激活剂与抑制剂对酶活性的影响目的和要求：加深对酶的化学本质的认识；了解温度、pH、激活剂与抑制剂对酶活性的影响。实验内容：酶活性易受环境温度的影响。在最适温度时，酶促反应速度最快。高于或低于最适温度时，反应速度逐渐降低。温度过高时可引起蛋白质变性，导致酶的失活。大多数动物酶的最适温度为37～40℃。酶活性易受环境pH的影响极为显著。通常各种酶只有在一定的pH范围内才表现它的活性。在最适pH时，酶促反应速度最快，过酸或过碱都会使酶的活性降低，甚至使酶蛋白变性失活。不同酶的最适pH不相同。酶活性还受激活剂与抑制剂的影响；如氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。实验四肝糖原的提取、鉴定与定量目的和要求：掌握提取动物肝糖原的方法及鉴定，了解糖原定量的方法。实验内容：饱食后动物肝脏糖原含量丰富，加三氯醋酸后将小鼠肝脏研磨成匀浆，利用糖原不溶解于乙醇的原理，沉淀肝糖原并离心分离，加热水溶解之成溶液，用H+作为催化剂水解提取物，再用班氏试剂进行鉴定。实验五分光光度法、分光光度计的使用与血糖的测定目的和要求：了解分光光度法，掌握分光光度计的使用。掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理及方法，掌握血糖测定的临床意义及正常值。实验内容：分光光度法是利用物质特有的吸收光谱，对物质进行鉴定和测定其含量的技术。分光光度法依据的原理是Lambert-Beer定律，设计出分光光度计，通过测定样品溶液对一定波长光线的吸光度，与标准溶液相比，可计算得出样品溶液的浓度。学习分光光度计的基本构造，学习使用分光光度计，利用分光光度计检测样品溶液的浓度。邻甲苯胺催化葡萄糖生成蓝绿色的shiff’s碱，利用分光光度计比色定量。实验六电教目的和要求：了解分子生物学常用技术电教内容：分子生物学实验技术实验七实验操作考核目的和要求：检查学生实际操作能力。考核内容：利用分光度法测定CuS