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文档简介

生物化学重庆医药高等专科学校佘玉罕蛋白质的理化性质等电点（一）两性解离-COOH-COO--H

++H+-COO--COOH-NH3+-NH2+H+-H

+-NH3+-NH2蛋白质分子除两端的氨基(-NH2)和羧基(-COOH)可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，也可解离成带负电荷或正电荷的基团。一、两性解离和等电点实质：各种带电基团得失氢离子(H

+

)的过程。各种蛋白质的pI不同，多接近5.0。PrCOOHNH3+PrCOO-NH3+PrCOO-NH2+H+pH<pI阳离子pH>pI阴离子当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为0，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点(pI)。（二）等电点pH=pI兼性离子-H+-H++H+

在电场中，带电颗粒向电性相反的电极移动的现象称为电泳。如蛋白质分子带正电，向负极泳动；带负电则向正极泳动。

应用pI-pH的关系所带电荷电离基团移动方向pI-pH=0不带电-不移动pI

-pH>0带正电-NH3+向负极移动pI

-pH<0带负电-COO-向正极移动电泳：练习：现有一含A、B、C，三种蛋白质的混合样品。其pI依次为4.5、10.2、9.2，在pH为8缓冲溶液中进行醋酸薄膜电泳分离，请在下图中标示出点样位置及电泳结果。＋－

解析：pH=8A蛋白：pI–pH=-3.5<0，带“-”

，向正极移动；B蛋白：pI–pH=2.2>0，带“+”

，向负极移动；C蛋白：pI–pH=1.2>0，带“+”

，向负极移动；

因B>C，故B蛋白跑得更快。ACB练习：现有一含A、B、C、D、E，五种蛋白质的混合样品。其pI依次为4.5、10.2、9.2、8.6、5.2，在pH为8缓冲溶液中进行醋酸薄膜电泳分离，请在下图中标示出点样位置及电泳结果。＋－

ACBDE蛋白质所带电荷量越大，在电场中跑得越快；蛋白质的分子量越大，在电场中跑得越慢。等电聚焦电泳：当蛋白质在其等电点时，净电荷为零，在电场中不再移动。++－－－－+－－－－－5.06.07.0稳定pH梯度5.06.07.0稳定pH梯度通电++－－－－+－－－－－++－－－－+－－－－－++－－－－+－－－－－++－－－－+－－－－－蛋白质的理化性质胶体性质

一、蛋白质的胶体性质溶质分子直径与溶液真溶液胶体颗粒悬浊液

d<1nm1nm<d<100nmd>100nm蛋白质的相对分子量1万-100万之间，分子量大。其分子直径1-100nm之间，在胶体颗粒的范围。因此具有胶体性质。

蛋白质具有胶体溶液的性质：布朗运动、丁道尔现象、不能透过半透膜、具有吸附力等。稳定因素：蛋白质颗粒表面的水化膜和带同种电荷，阻止分子间的聚集、沉淀。表面亲水内部疏水同种电荷表面亲水内部疏水同种电荷①透析：由于胶体溶液中的Pro不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。应用②蛋白质的沉淀：破坏维持蛋白质稳定的2个因素之一（破坏同种电荷和水化膜），则导致蛋白质溶液沉淀析出。（酸、碱液、脱水、盐析、重金属等）+H++H+pH=pIpH<pIp

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