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文档简介
愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因(一)基因工程的基本工具切酶(限制酶)(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。。(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶)的比较:缝合磷酸二酯键。DNA苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二A单个脱氧核苷酸加到已存在的单链(1)载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。(2)最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之(3)其它载体:λ噬菌体的衍生物、动植物病毒获取化学合成法_。PCR增目的基因(1)PCR的含义:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。(2)目的:获取大量的目的基因(3)原理:DNA双链复制(4)过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链为单链;DNA(5)特点:指数(2n)形式扩增的构建(核心)(1)启动子:是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合(2)终止子:也是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的尾端。(3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有导入受体细胞_将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术。方法的受体细胞多将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完检测和表达DNADNA2.其次还要检测目的基因是否转录出mRNA,方法是采用分子杂交(DNA-RNA)技—抗体杂交技术。定等。(三)基因工程的应用(四)蛋白质工程的概念以满足人类的生产和生活的需求。(基因工程在原则上只能生产自然界已存在的A转录B翻译结构推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列(基因)注意:目的基因只能用人工合成的方法5、设计中的困难:如何推测非编码区以及内含子的脱氧核苷酸序列通过改造基因,以定向改造天然蛋白存在的蛋白质将目的基因从供体转移到受体细达白质伸出的第二代基因工程1.理论基础(原理):细胞全能性细胞;植物细胞>动物细胞 (2)用途:微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工A植物繁殖快速地实现种苗的大量繁殖为植物分生区附近的病毒极少或没有)和运输B花粉进行花药离体培养(技术是植物组织培养);得到单倍体植株;对其幼苗时b明显缩短育种年限种(如筛选抗病、抗盐、含高蛋白的突变体)D产:通过能够产生对人们有利的产物的细胞进行组织培养,从(3)地位:是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工交技术(1)过程:化学法一般是用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。(3)意义:克服了远缘杂交不亲和的障碍。2)动物细胞培养的流程:取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶 (3)细胞贴壁和接触抑制:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞增多,当贴壁(4)动物细胞培养需要满足以下条件COOCO的主要作用是(5)动物细胞培养技术的应用:制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物隆动物(2)选用去核卵(母)细胞的原因:卵(母)细胞比较大,容易操作;卵(母)细胞细(3)体细胞核移植的大致过程是:(右图)减二分裂中期的卵母细胞,去核(显微操作)[注:为什么要用卵细胞?它可以提供充足的营养;操作简便;细胞质不会抑制细胞核全能性的表达];将供体细(4)体细胞核移植技术的应用:(5)体细胞核移植技术存在的问题:陷等。(1)动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞(2)动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同,诱导动物细胞融合的骨髓瘤细胞选择培养细胞单克隆抗体骨髓瘤细胞选择培养细胞单克隆抗体(3)动物细胞融合的意义:克服了远缘杂交的不亲和性,成为研究细胞遗传、。(4)动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较:交能性、细胞膜的流动性胞膜的流动性酶解法去除细胞壁(纤维素酶、果胶酶)化学法:聚乙二醇(PEG)振动、电激二醇生物法:灭活的病毒(灭活的生质体的制备(酶解法)生质体融合(物、化法)杂种细胞的筛选和培养杂种植株的诱导与鉴定合(物、化、生法)选与培养性细胞培养纯(1)制备单克隆抗体 (2)诊断、治疗、预防疾病,例如“生物导弹”治疗癌症体(1)抗体:一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产(2)单克隆抗体的制备过程:迅速大量增殖,又能产生专一的抗体];然后对它进行克隆化培养和抗体检测[筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞];最后将杂交瘤细胞在体外做大规模培养或注到大量的单克隆抗体。抗原注入小鼠体内分离B淋巴细胞杂交瘤细胞体内培养体外培养提体内培养体外培养提第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。(3)杂交瘤细胞的特点:既能大量繁殖,又能产生专一的抗体。(4)单克隆抗体的优点:特异性强,灵敏度高,并能大量制备。(5)在腹腔内增殖的优点:不需要特定的培养基,不需要严格的外界条件。(6)筛选的时候用:特定的选择性培养基进行筛选。(7)单克隆抗体的作用:性结合,具有准确、高效、简易、快速的优点。.1体内受精和早期胚胎发育(1)精原细胞→多个初级精母细胞(通过数次有丝分裂)(2)1个初级精母细胞→2个次级精母细胞→4个精子细胞(通过减数分裂,即(3)精子细胞→精子(通过变形)补充,精原细胞先进行有丝分裂后进行减数分裂;变形过程中,细胞核为动二、卵细胞(卵子)的发生内的储备)(1)卵原细胞→初级卵母细胞(2)1个初级卵母细胞→1个次级卵母细胞+第一极体(排卵前后完成)(3)1个次级卵母细胞→1个卵子+第二极体(精子和卵子结合过程中完成)在胎儿时期,卵原细胞进行有丝分裂演变成初级卵母细胞[被卵泡细胞包围],减一分裂在排卵前后完成,形成次级卵母细胞和第一极体进入输卵管准备1、概念:精子和卵子结合成合子(受精卵)的过程。(1)受精前的准备阶段1:精子获能(2)受惊前的准备阶段2:卵子的准备(到减数第二次分裂中期,具备与精子(3)受精阶段结合精子获能(在雌性动物生殖道内);卵子的准备(排出的卵子要在输卵管二中期才具备受精能力);受精阶段[卵子周围的结构由外到的瞬间阻止后来精子进入透明带的生理反应[它是防止多精子入卵受精的第一道其他精子再进入卵内的过程[它是防止多精子入卵受精的第二道屏障];体积并不增加,或略有减小。的潜能胞)发育成胎膜和胎盘;胚胎内部逐渐出现囊胚腔[注:大会导致透明带的破裂,胚胎伸展出来,这一过程叫孵化],下[细胞分化在胚胎期达到最大限度]2体外受精和早期胚胎培养技术。方法一:用促性腺激素处理,使其超数排卵,从中输卵管冲取精子(针对体型小的实验动物,家畜猪、羊等),可直接受精。物,如牛)(针对大家畜或大型动物,如牛)方法有:(1)培养法(通过获能培养液),如啮齿动物、兔、猪等的精子; (2)化学法(通过一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液),用化学药物等3胚胎工程的应用及前景理技术,如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。胎,移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内,使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体叫供体(遗传特性和生产性能优秀),接受胚胎的个体叫受体(有健康的体质和正常繁殖能力)。到:供体和受体的生理状况(1)供、受体生殖器官的生理变化相同,为胚胎提供相同的生理环境(2)早期胚胎没有与母体子宫建立组织联系,为胚胎收集提供可能(3)受体对外来胚胎基本不发生免疫排斥反应,为胚胎的存活提供可能(4)胚胎能与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但其遗传物质在孕育过程(1)对供、受体母牛进行选择:用激素进行同期发情处理;对供体母牛用激素做超数排卵(2)配种或人工受精:选择同种优秀公牛配种[有性生殖过程];(3)胚胎收集(冲卵(早期胚胎),此时胚胎处于游离状态)、检查(胚胎应发育到桑椹胚或囊胚)、培养或保存(-196℃的液氮)(4)胚胎移植:手术法(引出子宫和卵巢将其注入);非手术法(用移植管将其(5)移植后的检查(是否妊娠)等(6)产下胚胎移植的犊牛。双胎或多胎的技术[可看作是动物无性繁殖或克隆]。(1)选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚,移入盛有操作液的培养皿(2)用分割针或分割刀切开胚胎,吸出半个,注入空透明带或直接将裸半胚移功能上:具有发育的全能性,即可分化为成年动物体任何一种组织细(1)移植ES细胞修复坏死或退化部位,治愈糖尿病、肝(心)衰竭、成骨不良等S(3)ES细胞在牛黄酸、丁酰环腺苷酸等分化诱导因子作用下可向不同类型组织变家负责的态度、无实例无证据多样性的影响级杂草、有可能造成“基因污染”系统稳定性的影响类地位、减少农药使用、保护农田土壤环境杀死多余胚胎,无异于“谋杀”。(3)特点:致病力强、多数具传染性、传染途径多、污染面广、有潜伏期、不易态度(1)原理技术(2)操作(3)结果人类社会和自然环境的和谐发展。理性生物多样性程度“三北”防护林建统的生物多样性
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