SN-T1605-2017进出口植物性产品中氰草津、氟草隆、莠去津、敌稗、利谷隆残留量检验方法液相色谱-质谱质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准代替SN/T1605—2005进出口植物性产品中氰草津、氟草隆、莠去津、敌稗、利谷隆残留量检验方法液相色谱-质谱/质谱法inproductsofplantoriginforimportandexport—LC-MS/MSmethodI本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1605-2005《进出口植物性产品中氰草津、氟草隆、莠去津、敌稗、利谷隆残留量检验方法高效液相色谱法》。本标准与SN/T1605—2005相比主要技术变化如下：—一适用基质增加了菠菜、橙子、大白菜等不同类型植物性产品；--样品前处理由原先的中性氧化铝过滤后C固相萃取柱净化改为复合强阳离子交换固相萃取柱富集净化；——优化了色谱及质谱条件。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：进出口植物性产品中氰草津、氟草隆、莠去津、敌稗、利谷隆残留量检验方法液相色谱-质谱/质谱法本标准规定了食用植物性产品中氰草津、氟草隆、莠去津、敌稗、利谷隆残留的液相色谱-质谱/质谱检测方法。的测定和确证。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要后，经复合强阳离子交换柱净化富集后，提取液经氮吹至近干后用乙腈-水溶解，液相色谱-质谱/质谱检4试剂材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水采用GB/T6682规定的一级水。4.5氯化钠。4.6无水硫酸钠：用前在650℃灼烧4h,冷却后贮存于干燥器中。4.75mmol/L乙酸铵溶液(含0.1%甲酸):准确称取0.3854g乙酸铵(4.4),用水溶解并转移至1000mL4.8乙腈(含0.1%甲酸):取1.0mL甲酸用水定容至1L。4.92%甲酸溶液：量取2mL甲酸用水定容至100mL,混匀。4.10甲醇溶液(10+90,体积比):量取10mL甲醇和90mL水，混匀。4.11甲醇溶液(40+60,体积比):量取40mL甲醇和60mL水，混匀。4.12氨水-甲醇溶液(5+95,体积比):量取5mL氨水和95mL甲醇，混匀。24.13乙腈溶液(50+50,体积比):量取50mL乙腈和50mL水，混匀。浓度为1.00mg/mL的标准储备液，4℃以下避光保存，可使用1年。4.16标准中间溶液：移取适量的标准储备液，用乙腈配制浓度为100mg/L的标准溶液，4℃以下避光保存，可使用1个月。4.17标准工作溶液：移取适量的标准储备液，用乙腈溶液(50+50,体积比)配制浓度为10.0ng/mL、4.18聚合物阳离子交换柱(OasisMCX):60mg,3mL。使用前用3mL甲醇和3mL水活化固相萃取柱。5仪器和设备5.5旋转蒸发仪。5.6固相萃取装置和真空泵。5.8涡旋混合器。5.10氮吹浓缩仪。6测定步骤准确称取均质样品4g(精确至0.001g),置于50mL塑料离心管中，加入2g氯化钠，加入10.0mL乙腈混匀，以3000r/min高速均质1min～2min后，再以4000r/min离心5min,取5.00mL上清液转移至旋转蒸发瓶中，于40℃水浴减压浓缩至近干，残渣用5.00mL甲酸溶液(2+98,体积比)涡旋混合1min溶解。准确称取均质样品4g(精确至0.001g),置于50mL塑料离心管中，加入6mL水，10.0mL乙腈混匀，以3000r/min高速均质1min～2min后，再加入2g氯化钠和2g无水硫酸钠，以涡旋混合器混合1min后，再以4000r/min离心5min,取5.00mL上清液转移至旋转蒸发瓶中，于40℃水浴减压浓缩至近干，残渣用5.00mL甲酸溶液(2+98,体积比)涡旋混合1min溶解。将6.1提取液全部转移至活化后的MCX固相萃取柱上；随后分别用3mL2%甲酸溶液和3mL甲3醇溶液(40+60,体积比)洗涤旋转蒸发瓶，待洗液全部通过固相萃取柱后，用真空泵抽干柱中残留液体；随后，用3mL5%氨化甲醇溶液洗脱并收集该洗脱液于10mL的刻度试管中，用真空泵抽干柱中残留液体。收集的洗脱液于40℃下用氮气吹至近干后，用乙腈溶液(50+50,体积比)振荡溶解并定容至6.3基质标准工作溶液的制备取空白样品，按上述操作步骤到收集液经氮气吹至近干，按照标准曲线最终定容浓度分别加入标准工作溶液(4.17),并以乙腈溶液(50+50,体积比)振荡溶解并定容，制备基质标准工作曲线。6.4测定6.4.1液相色谱条件液相色谱条件如下：a)色谱柱：整体化硅胶柱Chromlith@HighResolutionRP-18e50mm×4.6mm,孔径2μm,空隙大小15nm(150Ä)或相当者；d)流动相：A:5mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸),B:乙腈(含0.1%甲酸);f)梯度洗脱条件见表1。时间/min02786.4.2.1离子化模式：电喷雾离子源(ESI),正离子模式。6.4.2.3其他参考质谱条件参见附录A。6.4.3液相色谱-质谱/质谱测定在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在±2.5%之内；4每种化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子，且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度>20%～50%>10%～20%允许的最大偏差士25%6.4.3.2定量测定根据试样中被测物的含量，选取适宜的标准工作溶液进行分析。以峰面积为纵坐标，工作溶液质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述仪器条件下的保留时间参见附录A表A.1,标准溶液的多反应监测色谱图参见附录B中图B.1。6.4.4空白试验除不加试样外，按上述测定步骤进行。7结果计算和表述按式(1)计算样品中目标物残留量，计算结果需扣除空白值： (1)式中：X;——试样中化合物残留量，单位为微克每千克(μg/kg);c——由回归曲线得到的试样溶液中化合物含量，单位为微克每升(μg/L);V——样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL);m——最终样品溶液所代表的试样质量，单位为克(g)。8方法的测定低限和回收率本方法测定低限为10μg/kg。不同基质中不同添加水平下的回收率实验数据见表3。表3不同基质中氰草津、氟草隆、莠去津、敌稗和利谷隆残留量在不同添加水平下的回收率试验数据表样品名称化合物名称添加水平/(mg/kg)回收率范围/%(n=6)大米氰草津0.0185.0～94.02.0088.2～97.291.0～97.5氟草隆0.0187.5～90.52.0083.2～91.597.0～1095样品名称化合物名称添加水平/(mg/kg)回收率范围/%(n=6)大米莠去津83.0～89.590.5～94.590.0～95.5敌稗85.5～98.592.5～110利谷降80.5～94.594.8～11092.5～103橙子氰草津86.7～91.188.0～89.7氟草隆93.0～10782.5～91.684.8～99.3莠去津91.5～98.084.3～91.385.9～94.7敌稗87.0～10083.7～94.786.3～100利谷隆79.5～92.581.5～91.1玉米氰草津87.0～96.584.3～91.695.7～110氟草隆82.6～97.584.5～10389.8～96.8莠去津89.0～99.089.0～11292.0～1086表3(续)样品名称化合物名称添加水平/(mg/kg)回收率范围/%(n=6)玉米敌稗89.0～98.095.1～10利谷隆81.0～92.583.9～92.092.4～103菠菜氰草津89.9～11596.7～100氟草隆89.9～11592.4～104莠去津98.0～11094.5～111敌稗89.5～10188.7～98.295.5～102利谷隆88.5～98.083.6～89.691.4～109大白菜氰草津93.0～10992.1～99.392.0～103氟草降93.0～10992.1～99.392.0～103莠去津98.0～10096.1～108敌稗89.0～99.592.7～10894.1～1037表3(续)样品名称化合物名称添加水平/(mg/kg)回收率范围/%(n=6)大白菜利谷隆大豆氰草津氟草隆莠去津敌稗利谷隆8(资料性附录)质谱参考条件!质谱参考条件如下：a)电喷雾电压(IS):正模式5500V;b)碰撞气压力(CAD):68.9kPa(10psi);c)气帘气压力(CUR):207kPa(30psi);d)雾化气压力1(GS1):414kPa(60psi);e)辅助气压力2(GS2):414kPa(60psi);f)离子源温度(TEM):550℃;g)定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量及其他相关参数见表A.1。表A.15种除草剂ESI-MS/MS监测离子对及对应碰撞气能量化合物名称保留时间监测离子对去簇电压DP/V碰撞能量CE/V碰撞室入口电压EP/V碰撞室出口电压CXP/V氰草津9氟草隆莠去津6利谷隆敌稗9注：*为定量离子对，对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳1)非商业性声明：本标准列出的仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。9(资料性附录)多反应监测色谱图ThestandardisdraftedaccordancewiththerulesgivenintheGB/T1.1—2009.ThestandardisareplacementofSN1605—2005Inspectionofcyanazine,fluometuron,atrazine,pro-panilandlinuronresiduesinproductsofplantoriginforimportandexport—HPLC.ThemainimprovementfromSN1605—2005:—Thesamplepretreatmentischangedtosolidphaseextraction(SPE),comparedtotheformeredi-tion,whichadoptedmanuallyloadedchromatographiccolumn;一Thechapterof“Samplingprocedure”isdeleted;—Thematrixscopewasenlargedtospinach,orange,cabbage,andetc;一Thechromatographyconditionisoptimizd.Somepartsofthestandardmayhaverelationshipwithsomepatents.Thereleasedepartmenthavenoresponsibilitytorecognizethesepatents.ThisstandardwasproposedbyandisunderthechargeoftheCertificationandAccreditationAdmin-istrationofthePeople'sRepublicofChina.ThisstandardwasdraftedbytheShanghaiEntry-ExitInspectionandQuarantineBureauofthePeople'sRepublicofChina.ThemaindraftersofthisstandardareZhouYao,ShengYonggang,ShiYiyin,ZhangRunhe,FanYanli,Thepreviousversionsofthisstandardareasfollows:—SN/T1605—2005.Determinationofcyanazine,fluometuron,atrazine,ThestandardspecifiestheHPLC-MS/MSmethodofdeterminationofcyanazine,fluometuron,atrazine,propanilandlinuronresiduesinproductsofplantoriginforimportandexport.Thisstandardisapplicabletodeterminationofcyanazine,fluometuron,atrazine,propanilandlinuronresiduesinrice,orange,corn,spinach,cabbageandsoybean.Thefollowingreferenceddocumentsareindispensablefortheapplicationofthisdocument.Fordatedreferences,onlytheeditioncitedapplies.Forundatedreferences,thelatesteditionofthereferenceddocument(includinganyamendments)applies.GB/T6682Waterforanalyticallaboratoryuse—SpecificationandtestmethodsThecyanazine,fluometuron,atrazine,propanilandlinuronresiduesinsamplesisextractedbyacetoni-tril,theextractisconcentratedundervacuumandreconsititutedin2%fomicacidwater,thencleaned-upbypolymerstrongcationexchangeSPEcolumn(MCXcolumn).TheextractisdeterminedbyHPLC-MS/MSaftercondensationandreconstitution,andquantifiedbyexternalmatrixmixedstandardmethod.Unlessotherwisespecified,allreagentusedshouldbeanalyticalgrade,waterisdeionizedwater.4.1Methanol:HPLCgrade.4.2FormicAcid:HPLCgrade4.4Ammoniumacetate:HPLCgrade.4.6Anhydroussodiumsulfate:Driedat650℃for4handkeepinatightlyclosedcontainer.4.75mmol/Lammoniumacetatesolution(containing0.1%formicacid):dissolve0.3854gammo-niumacetatein1000mLwater,add1.00mLforthoroughly.4.10Methanolsolution(10+90,V/V):mix10mLmethanoland90mLwaterthoroughly.4.12Ammoniumhydroxide-methanol(5+95,V/V):mix5mLammoniumhydroxideand95mLmethanolthoroughly.4.13Actonitrilesolution(50+50.V/V):mix50mLacetonitriland50mLwaterthoroughly.4.14Standards:cyanzaine(CASNo.21725-46-2),flumometruon(CASNo.2164-17-2),atrazine(CASNo.1912-24-9),propanil(CASNo.709-98-8).linuron(CAS330-55-2),purity≥98%.4.15Stockstandardsolutions:accuratelyweigheachstandard,anddissolveitinacetonitrileto4.16Intermediatesolution:takeappropriatestocksolutionsanddissolvethemtogatherinactonitril4.17Workingsolution:takeappropriateintermediatesolution,anddissolveitinacetonitrilto10.0ng/mL,20.0ng/mL,50.0ng/mL,100ng/mL,500ng/mL.4.18Polymercationexchangecomethanoland3mLwaterbeforeuse.5.1Liquidchromatograhycombinedwithelectrosprayionizationmassspectrometry.5.2Balances:0.01mg,0.01g.5.3Homogenizer:3000r/min.5.5Rotaryevaporator.5.6SPEdeviceswithvacuumairpump.5.7Centrifuger:5000r/min.5.10Nitrogenconcentr5.11Syringeand0.22μmmembranefilter.5.1250mLcentrifugetube.tril,homogenizethemixtureat3000r/minfor1min～2min.Themixturewas4000r/minfor5min.Take5.00mLsupernatantintoarotarytube,andconcentratedundervacat40℃.Theremainsisdissolvedthoroughlyforfurthercleanup.6.1.2Soybean,riceandcornWeigh4g(0.001g)sampleina50mLcentrTake5.00mLsupernatantintoarotarytube,andconcentratedundervaccutrateisdissolvedin5.00mLformicacid-water(2+98,V/V),andmixthemixturethoroughlyforfurthercleanup.Loadtheextractaboveonthecolumn.Washthecolumnwith3mLformicacidsolution(2+98,V/V),and3mLmethanol-water(40+60,V/V)andthenuse3mLammoniumhydroxide-methanol(5+95,V/V)toelutetheanalytes.DrytheeluatebyN,in40Cwaterbathandreconstitutethean-alytein2.00mLacetonitrilesolution(50+50,V/V).Mixthemthoroughlyandfilterthemby0.22μmmembraneforfurtherHPLC-MS/MSanalysis.Processtheblanksampleasabsolutiontomakematrixmatchedworkingstandard.TheHPLCoperatingconditionsisasfollows:a)Column:ChromlithHighResolutionRP-18e50mm×4.6mm,ortheequivalent;b)Columntemperature:roomtemperature;c)Injectionvolume:20μL;d)Mobilephase:A:5mmol/LAmmoniumAcetate(containing0.1%formicacid),B:Acetonitrile(containing0.1%formicacid);Time/minA/%B/%0278Table1(continued)Time/minA/%B/%6.4.2.3OtherMS/MSparametersseetheAnnexA.DeterminethesampleundertheestablishedLC/MS-MSconditions,andcalculatetheintensityratiooftimeofsamplechromatogrampeakareconsistentwiththatofworkingsolution,andtherelativeabundanceratiotolerancemeetstherequirementslistedintheTable2,itcanbeconcludedthatthiscompounddoesexistinthesample.Table2—MaximumpermittedtolerancesforrelativeionintensitieswhileconformationRelativeionintensities土25%AccordingtotheaboveHPLC-MS/MSoperatingcondition,determinethesamplesolutionandthestandardworkingsolutionsimultaneously.Theresponsesoftheanalytesinthestandardworkingso-lutionandthesamplesolutionshouldbewithinthelinearrangeoftheinstrumentdetection.Theoperationoftheblanktestisthesameasthatdescribedinthemethodofdeterminationbutwiththeomissionofsampleaddition.7CalculationandexpressionofresultCalculatethecontentofresiduesinthetestsamplebyHPLC-MS/MSdataprocessororaccordingtotheformula(1).Theblankvalueshouldbesubtractedfromtheaboveresultofcalculation.…………Where:X,—theresiduecontentinthetestsample,μg/kg;c—theconcentrationinstandardworkingsolution,ug/L;V—thefinalvolumeofthesamplesolution,mL;m—massoftestsampleoffinalsamplesolution,g.8LimitofquantitationandrecoveryThelimitofquantificationis10μg/kg.Accordingtotheexperimentaldata,thecorrespondingrecoveryofeachfortifyinglevelindifferentTable3—Recoveryresultsofeachfortifyinglevelindifferentmatrixforcyanazine,flum