基因工程原理与技术思考题

ChapterIIntroduction什么是基因？基因有哪些主要特点？基因是一段可以编码具有某种生物学功能物质的核苷酸序列。①不同基因具有相同的物质基础.②基因是可以切割的。③基因是可以转移的。④多肽与基因之间存在对应关系。⑤遗传密码是通用的。⑥基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。翻译并解释下列名词geneticengineering遗传工程geneengineering基因工程：通过基因操作，将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物获得新的遗传性状的操作。genemanipulation基因操作：对基因进行分离、分析、改造、检测、表达、重组和转移等操作的总称。recombinantDNAtechnique重组DNA技术genecloning基因克隆：是指对基因进行分离和扩大繁殖等操作过程，其目的在于获得大量的基因拷贝，在技术上主要包括载体构建、大肠杆菌遗传转化、重组子筛选和扩大繁殖等环节。molecularcloning分子克隆什么是基因工程？简述基因工程的基本过程？p2p4简述基因工程研究的主要内容？p5简述基因工程诞生理论基础p2和技术准备有哪些p3？基因表达的产物中，氨基酸序列相同时，基因密码子是否一定相同？为什么？否，密码子简并性举例说明基因工程技术在医学、农业、工业等领域的应用。医学:人胰岛素和疫苗农业:抗虫BT农药工业:工程酿酒酵母ChapterⅡThetoolsoftrade什么是限制性核酸内切酶？简述其主要类型和特点？是一种核酸水解酶，主要从细菌中分离得到。类型特点p11II型核酸内切酶的基本特点有哪些p12-14？简述影响核酸内切酶活性的因素有哪些p14？解释限制酶的信号活性？抑制星号活性的方法有哪些？什么是DNA连接酶p15？有哪几类p16？有何不同p16？什么叫同尾酶、同裂酶p12？在基因工程中有何应用价值？同裂酶：识别位点、切割位点均相同，来源不同。在载体构建方面往往可以取得巧妙的应用。应用较多的同裂酶比如Sma1和Xma1，它们均识别CCCGGG，但前者切后产生钝末端，后者切后产生粘性末端同尾酶：来源各异，识别序列各不相同，但切割后产生相同的粘性末端。由同尾酶(isocaudomer)产生的DNA片段，是能够通过其粘性末端之间的互补作用彼此连接起来的。什么是DNA聚合酶？根据DNA聚合酶使用的模板不同，可将其分为哪两类？各有什么活性？p17-18聚合酶：在引物和模板的存在下，把脱氧核苷酸连续地加到双链DNA分子引物链的3‘-OH末端，催化核苷酸的聚合作用。依赖于DNA的DNA聚合酶依赖于RNA的DNA聚合酶TaqDNA聚合酶：是一种从水生嗜热菌中分离得到的一种耐热的dna聚合酶，具有5-3聚合酶活性和3-5外切酶活性，在分子中主要用于PCR。逆转录酶：RNA指导的DNA聚合酶，Klenow片段的特性和用途有哪些？举例说明。p17名词解释：S1核酸酶、核酸外切酶、磷酸化酶激酶、甲基化酶:甲基化酶是作为限制与修饰系统中的一员，用于保护宿主

DNA

不被相应的限制酶所切割。什么是末端脱氧核苷酸转移酶？举例说明其应用之一。P19加p什么是碱性磷酸酶？其在基因工程领域中有哪些用途？p19减p质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？目的基因片段与载体由相同的单一限制性核酸内切酶消化酶切后，两者的两端均具有相同的黏性末端，成为单酶切位点的黏性末端。为了防止载体的自我环化，通常用碱性磷酸酶去除载体的粘性末端的5‘p以抑制DNA的自我环化。名词解释：分子杂交、核酸杂交探针切口平移标记探针的主要步骤有哪些？简述Southern印迹杂交的基本原理及其主要步骤？简述Northern印迹杂交的基本原理及其应用？简述Western印迹的基本原理及其主要步骤？简述Sanger碱基顺序分析法的基本原理？简述酵母双杂交技术的基本原理和在基因工程中的应用？简述酵母单杂交技术的基本原理和操作过程？什么是噬菌体展示技术？简述其基本操作过程？什么是DNA迁移率变动试验？简述其基本原理？什么是DNaseI足迹实验？简述其基本原理？ChapterⅤPolymeraseChainReactionTechnologyandApplication什么是PCR技术？简述其基本原理？简述PCR反应体系的主要成分与反应流程？简述PCR引物设计的目的和一般原则？简述提高PCR反应特异性的因素和措施？什么是巢式PCR、降落PCR、反转录PCR？它们分别有哪些应用？简述荧光定量PCR的基本原理？为什么在定量PCR中要引入Ct值的概念？ChapterⅥRNAiandmiRNAregulation什么是RNA干扰技术？简述利用RNA干扰技术沉默基因的基本原理和一般操作流程？什么是siRNA？如何选择siRNA靶位点？简述获得siRNA的途径有哪些？ChapterⅦObtainingoftargetgene目的基因克隆时常用哪些方法分离和获得基因？什么是基因文库？简述构建基因文库常用的载体有哪些？什么是基因组文库？简述构建基因组文库的一般步骤？什么是cDNA文库？简述构建cDNA文库的主要步骤？目的基因与载体的连接方法有哪些？各有哪些优点？基因重组时在两个酶切位点中其中有一个不相匹配时，你如何解决连接问题？如果目的基因的基因结构中有内含子存在，而且要采用原核表达系统，你应如何分离克隆基因？ChapterⅧRecombinationandgenetransfercDNA克隆较之基因组克隆的优越性体现在哪里?试述T-A克隆法的原理和用途？基因工程宿主菌必需具备哪些特性？名词解释：受体细胞、感受态细胞、转化、转染、转导简述将重组DNA导入原核细胞的方法有哪些？简述将重组DNA导入真核细胞导的方法有哪些？外源基因导入植物的方法？Ti质粒的结构特点？Ti质粒介导植物基因转移的过程？ChapterⅨScreeningandidentificationofrecombinantclones如何从所克隆到的基因重组载体中鉴定目的基因的存在和正确性重组子的筛选与鉴定主要有哪些方法？重组子的遗传学检测法主要包括哪两类？简述根据载体表型特征进行重组子筛选的常用方法及其基本原理？如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆？名词解释：插入失活效应LacZ基因通常用于构建质粒载体的目的和原理？如何利用LacZ标记基因筛选阳性克隆？报告基因检测法筛选重组子对报告基因有哪些基本要求?举例说明重用的报告基因有哪几种？ChapterⅩExpressionofcloninggene大肠杆菌作为基因工程受体菌有哪些优缺点？实现真核基因在大肠杆菌表达系统的正确表达需要哪些基本条件？名词解释：启动子、终止子、SD序列、包涵体蛋白质包含体复性的方法有哪些？可使外源基因在大肠杆菌中高水平表达的启动子应具备哪些条件？常用大肠杆菌表达载体有哪些？简述λPL启动子表达载体和T7噬菌体RNA聚合酶/启动子表达载体的主要特征？原核表达系统常采用的启动子有哪些？Lac、Tac、trp启动子各自有何特点？在大肠杆菌中表达外源基因的表达载体需具备哪些条件？利用大肠杆菌进行外源蛋白质主要有哪几种表达部位？采用相应表达形式有何优缺点？名词解释：融合基因、融合蛋白提高外源基因表达效率一般从那几个方面进行考虑？从提高转录启动效率及翻译起始效率角度考虑，可通过哪些措施构建高效率表达载体，提高外源基因表达效率？避免外源基因表达蛋白被宿主细胞内源蛋白水解酶降解的主要措施有哪些？简述大肠杆菌表达外源基因产物的检测方法有哪几种？与原核细菌相比，酿酒酵母做为外源基因表达受体菌有哪些优点？酵母表达系统有哪些优缺点？酵母基因表达系统主要有哪些基本结构？常采用的选择标记基因有哪些？简述酵母表达载体的种类和主要特