有机磷检测知识课件

有机磷农药的检测洪宇浩罗祎迩林剑锋张述熙酶抑制法原理

酶抑制法是目前最常见的蔬菜中农药残留快速检测方法。有机磷和氨基甲酸酯农药能抑制昆虫神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响昆虫正常的神经传导，使其中毒致死。有机磷和氨基甲酸酯类农药对酯酶的抑制率与其浓度称正相关。

酶样与样品进行反应，如样品中没有农药残留或残留量极少，酶的活性不被抑制，可以水解底物；反之，如农药的残留量比较高，酶的活性被抑制，底物就不被水解或水解速度较慢。

水解产物可以通过光度法或电化学的方法进行检测，通过抑制率判断出样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在及其含量的多少。酶抑制法酶的选择

酶抑制法中酶最为关键，酶的种类决定着检测的灵敏度。常用的酶有两种：乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶。底物和显色剂

酶抑制显色反应可以使用的底物和显色剂很多，大致可分为以下几种类型：

乙酰胆碱-修百里酚蓝显色法

乙酸-ß-萘酯-固蓝B盐显色法

乙酸羟基吲哚显色法

乙酸靛酯显色法酶抑制法方法—速测卡纸法

农药速测卡是55mm*22mm的形纸条，上面贴有直径15mm的白色、红色圆形药片各一片。

2,6-二氯靛酚乙酸酯在白色药片上胆碱酯酶的催化下能迅速发生水解反应，生成2,6-二氯靛酚（蓝色）和乙酸，反应一段时间后，打开速测卡，若白色药片变成蓝色，为阴性，若不变色或显浅蓝色，表示有有机磷、氨基甲酸酯类农药的存在，其抑制了胆碱酯酶的活性，即抑制了水解反应。胆碱酯酶乙酰胆碱类似物2,6-二氯靛酚乙酸酯酶抑制法方法分析

该方法抗干扰性强，操作简便，检测速度快，不需要配制试剂，，携带方便，检测成本低，能够实现在普通农户中广泛推广使用，是现场检测的最佳方法，但此方法存在以下一些严重的缺陷：

该方法只能定性不能定量。它只能显示样品中是否有农药，而无法确定其种类和大致含量。

该方法对大部分农药的检测灵敏度低，检出限远高于蔬菜中农药的国家标准，也就是说，该方法对农药残量超过限量标准而低于方法检出限的蔬菜无能为力，导致测定结果假阴性。

除了有机磷和氨基甲酸酯农药外，其它因素如重金属离子、反应温度、酶的来源及活性等问题也会影响测定结果。因此该方法容易受到干扰而导致误检。

测定葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白等样品时，由于其中含有对酶有影响的植物次生质，容易产生假阳性的检测结果。气相色谱法方法原理

色谱法也叫层析法，是一种高效能的物理分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为了色谱分析法。

在色谱法中存在两相，一是固定不动的，叫做固定相；另一相则不断流过固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与股定向发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力大小，强弱不同，随着流动想的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检验方法结合，实现混合物各组分的分离和检测。气相色谱法方法优点

高灵敏度：可检出10-10克的物质，可作超纯气体、高分子单体的痕迹量杂质分析和空气中微量毒物的分析。

高选择性：可有效地分离性质极为相近的各种同分异构体和各种同位素。

高效能：可把组分复杂的样品分离成单组分。

速度快：一般分析、只需几分钟即可完成，有利于指导和控制生产。

应用范围广：即可分析低含量的气、液体，亦可分析高含量的气、液体，可不受组分含量的限制。

所需试样量少：一般气体样用几毫升，液体样用几微升或几十微升。气相色谱法样例分析从右边的图便可一对所测量的结果进行比对，从而确定农药的组成及含量，只得注意的是（a）图的曲线不平坦，峰比较多，下面的则相对比较平坦，峰比较少，这是因为GC/FPD（b）系统相对于GC/NPD（a）系统，对干扰的限制比较多，相对比较准确。气相色谱法气相色谱法分光光度法丁酰胆碱酯酶法

以碘化硫代丁酰胆碱为底物，在丁酰胆碱酯酶的作用下底物水解成碘化硫代和丁酸，碘化硫代胆碱和显色剂二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）产生显色反应，反应液呈黄色，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率。通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷农药的存在。抑制率（%）=[(ΔA0-ΔAτ)/ΔA0]×100%

式中ΔA0——对照溶液3min吸光度的变化值； ΔAτ——样品溶液3min吸光度的变化值。分光光度法实验步骤样品处理

选取有代表性的蔬菜样品，洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲溶液，振荡1~2min，倒出提取液，静置3~5min，待用。对照溶液测试

先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后与于37°C放置15min以上（每批样品的控制时间应一致）。加入0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3min的吸光度变化△A0。样品溶液测试

先于试管中加入2.5mL样品提取液，其他操作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化△A0。分光光度法结果判定与检出限当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检验2次以上。对阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定具体农药品种和含量。农药名称毒性最低检出浓度（溶液）/（mg/L）最低检出浓度（蔬菜）/（mg/kg）甲胺磷高毒

１～２３～５氧乐果高毒

０．７～２２～５对硫磷高毒

０．７～１．５２～４甲拌磷高毒

０．３