《实验猴寄生虫病防治技术规范》（征求意见稿）编制说明

1广西地方标准《实验猴寄生虫病防治技术规范》（征求意见稿）编制说明一、任务来源、起草单位、主要起草人根据《广西壮族自治区市场监督管理局关于下达2023年广精神，由广西壮族自治区农业农村厅提出，广西壮族自治区兽医为高质量编制广西地方标准《实验猴寄生虫病防治技术规范》，由起草单位成立标准编制工作组并进行如下分工：师二、制定标准的必要性和意义2据桂政发〔2019〕7号《广西壮族自治区人民政府关于加快推进广西现代特色农业高质量发展的指导意见》，推动现代特色农业技术升级、改革升级、产业升级，构建现代农业产业体系、生产体系、经营体系，加快产业共性关键技术的研发、集成创新与转化应用，支撑现代特色农业高质量发展。充分发挥科实验动物科技基础条件资源的作用，为科研人员开展基础科学研究提供坚实的科技条件支撑。实验猴与人类基因同源性和生物特性高度相似，属于实验动物中的高端产品，目前已成为科学研究和药物研究使用较多的一种灵长类试验动物，全球每年需求量超过10万只，全国约有20个实验猴养殖基地，我国是主要的实验猴出口国，其中出口欧、美、日和韩国等发达国家。广西的地理气候条件适宜人工繁殖实验猴（食蟹猴、猕猴），实验猴养殖企业10家，是我国实验猴的供应“大省”，2021年广西实验猴的饲养量量超过12万只，占全国总量的60%以上，年均产值超过50亿元，实验猴养殖产业也成为广西特色的实验动物产业，极大地推动当地的经济发展。2020年全球新冠疫情流行，实验猴成为研究新冠病毒的理想动物模型，大量实验猴送至北京、上海等研究机构，食蟹猴为全球新冠肺炎科研攻关、疫苗研发等方面做出了巨大的贡献，目前对实验猴的需求量还在不断增加，我区鼓励和扩大实验猴基地的建设及扩大，这加快了实验猴人工饲养的发展速度。但是，随着实验猴养殖量的增加，疾病的发生率也在不断升高，临床调查发现腹泻是实验3猴养殖的常见疾病之一，引起腹泻的除了细菌、病毒外，寄生虫感染是最重要的原因，人工饲养多采用开放的饲养模式，导致实验猴寄生虫病感染率较高，临床上危害实验猴主要寄生虫有：吸虫、线虫、绦虫、疟原虫、溶组织内阿米巴、结肠小袋纤毛虫、弓形虫、鞭毛虫、球虫、隐孢子虫、螨虫等。据唐文红报道，对广西两个规模化养殖食蟹猴场调查发现结肠小袋纤毛虫感染率分别为28.4%、29.3%，本研究团队发现广西某猴场溶组织内阿米巴、鞭虫、隐孢子虫、球虫的平均感染率分别为33.47%、16.1%、2.51%，1.55%，调查结果发现广西地区的实验猴寄生虫感染率较高，实验猴感染寄生虫后对自身造成了生理、生化以及免疫学指标的变化，对实验结果的准确性造成干扰，严重影响实验结果的准确性，也制约养殖场的经济收益，同时一些寄生虫也是人畜共患寄生虫病，引起人和动物的腹泻、结肠充血、出血、溃疡和穿孔等，并且容易继发细菌或病毒感染，威胁人类的健康，应该引起重视。在严格规范药物使用及新发疫病威胁加大的新形势下，如何搞好实验猴养殖场的疫病预防和控制，必须要依靠制定和执行应对新形势下的兽医防疫规范，针对性提出了一系列疫病防控策略，为我区实验猴产业的稳定快速发展保驾护航。因传统技术要求操作者熟练掌握辨别寄生虫样本的能力，容易漏检，对操作者造成视觉疲劳，导致临床检测出现误差，短时间内无法完成大量的检测工作，同时对操作者的健康也造成威胁，因此针对临床上4高发且镜检不易区分的寄生虫，建立一种快速高效、特异性高、灵敏度高、低成本的现代检测技术，将传统技术与现代检测技术相结合在实验猴的寄生虫的监测中发挥作用，可以有效剔除感染动物，及时发现感染猴只，以便隔离治疗。这些综合的防控措施会极大的促进实验猴向标准化、社会化和产业化的发展，提升广西实验猴的品牌价值，保持广西实验猴养殖质量在全国名列前茅，在经济、公共卫生、社会等方面具有十分重要的意义，是广西灵长类实验动物产业发展非常急需的。通过制定广西地方标准《实验猴寄生虫病防治技术规范》，以标准为抓手，促进实验猴向标准化、社会化和产业化的发展，对提升广西实验猴的品牌价值，推动广西实验猴养殖产业高质量发展，助力乡村振兴具有重要意义具有十分重要的意义。三、主要起草过程（一）成立标准编制工作组广西地方标准《实验猴寄生虫病防治技术规范》项目任务下达后，广西壮族自治区农业农村厅成立了标准编制工作组，起草单位制定了起草编写方案与进度安排，明确任务职责，确定工作技术路线，开展标准研制工作。具体标准编制工作由广西壮族自治区兽医研究所等单位组成的标准编制工作组完成。编制工作组下设二个组分别是资料收集组、草案编写组。资料收集组负责国内有关实验猴寄生虫病防治技术的相关文献资料的查询、收集和整理工作。5草案编写组负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作，包括后期召开征求意见会、网上征求意见，以及标准的不断修改和完善。（二）收集整理文献资料标准编制工作组收集了国内有关实验猴寄生虫病防治技术相关文献资料。主要有：GB/T18448.2-2008实验动物弓形虫检测方法GB/T18448.7-2008实验动物疟原虫检测方法GB/T18448.9-2008实验动物肠道溶组织内阿米巴检测方法GB18596-2001畜禽养殖业污染物排放标准NY/T1168-2006畜禽粪便无害化处理技术规范T/CALAS106-2021实验动物结肠小袋纤毛虫核酸检测方法NY/T1949-2010隐孢子虫卵囊检测技术改良抗酸染色法GB19489-2008实验室生物安全通用要求GB/T27401-2008实验室质量控制规范动物检疫（三）研讨确定标准主体内容标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究之后，标准编制工作组召开了标准编制会议，对标准的整体框架结构进行了研究，并对标准的关键性内容进行了初步探讨。经过研究，标准的主体内容确定为术语和定义、诊断方法、防治要求、驱治方法和监测评价。（四）调研、形成草案、征求意见稿62023年3月～5月，标准起草工作小组进行了广泛实地调研工作，查阅了大量的国内外文献资料，对实验猴寄生虫病防治技术的前人研究成果进行系统总结。调研的同时召集广西壮族自治区兽医研究所等单位相关负责人开展了标准研讨会，对实验猴寄生虫病防治技术相关文件进行系统总结。形成了标准的基本构架，对主要内容进行了讨论并对项目的工作进行了部署和安排。2023年6月～7月，在前期工作的基础之上，通过理清逻辑脉络，整合已有的参考资料中有关实验猴寄生虫病防治技术要求，在广西各实验猴养殖基地广泛实地调研及查阅资料的基础上，按照简化、统一等原则编制完成广西地方标准《实验猴寄生虫病防治技术规范》（草案），并提出申请立项。2023年8月22日，根据《广西壮族自治区市场监督管理局关于下达2023年广西地方标准制修订项目计划的通知》，广西地方标准《实验猴寄生虫病防治技术规范》获批立项。2023年8月～10月，标准起草工作组再次深入广西各实验猴养殖基地进行实地调研。通过实地调研，掌握各基地关于实验猴寄生虫病防治技术的具体技术要求。以草案为基础，提炼核心技术细节，在广西区内广泛开展技术对比和总结，并实际征求意见，通过收集反馈了大量意见，标准编制工作组多次召开会议，对标准草案进行了反复修改和研究讨论。进一步讨论完善标准草案，形成广西地方标准《实验猴寄生虫病防治技术规范》（征求意见稿）和（征求意见稿）编制说明。7四、制定标准的原则和依据，与现行法律、法规的关系，与有关国家标准、行业标准的协调情况（一）编制原则1.实用性原则本文件是在充分收集相关资料和文献，分析当前实验猴寄生虫病防治技术现状，调研广西区内实验猴养殖情况，在现有实验猴寄生虫病防治相关技术要求的基础上，依据多年来的实验猴疫病防控研究经验并针对广西的疫病流行情况进行针对性总结而起草的，可供我区实验猴养殖基地、及相关机构参考与应用，有助于促进实验猴向标准化、社会化和产业化的发展，提升广西实验猴的品牌价值，具有较强的实用性和可操作性。2.协调性原则本文件编写过程中注意了与实验猴寄生虫病防治技术相关法律法规的协调问题，在内容上与现行法律法规、标准协调一致。3.规范性原则本文件严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》编写本标准的内容，保证标准的编写质量。4.前瞻性原则本文件在充分考虑当前实验猴寄生虫实际情况、养殖技术水平、行业发展现状以及经济发展状况的基础上，还考虑到了行业快速发展的趋势和需要，文件条款规定的主要技术内容尽可能与8我国现有水平相一致，避免起点、要求过低，在文件中体现了个别特色性和先进性条款，推动广西实验猴养殖企业核心技术向高端化、集约化、智能化发展，促进我区实验猴产业从传统型向现代化产业转型升级，科技助力推动广西乡村振兴。（二）编制依据本标准严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规则起草，标准主要内容是结合起草单位多年的实验猴寄生虫病防治技术经验总结进行（三）与现行法律、法规的关系，与有关国家标准、行业标准的协调情况本编制工作组承诺本标准内容与各项指标不违反相关法律法规要求，且不低于国家强制性标准、推荐性国家标准和行业标准要求。经调查，与实验猴寄生虫病相关的国家标准、行业标准、地方标准以及团体标准主要有：20191336-Q-469《实验动物微生物、寄生虫学等级及监测》、20065976-T-469《实验动物弓形虫检测方法》、20191045-T-326《动物球虫病诊断技术》、GB18448.6-2001《实验动物蠕虫检测方法》、GB/T18448.7-2001《实验动物疟原虫检测方法》、GB/T18448.9-2001《实验动物肠道溶组织内阿米巴检测方法》、GB/T18448.10-2001《实验动9物肠道鞭毛虫和纤毛虫检测方法》、GB/T18448.2-2008《实验动物弓形虫检测方法》、GB/T18647-2020《动物球虫病诊断技18448.1-2001《实验动物体外寄生虫检测方法》。以上这些标准只是对实验动物一种或者一类寄生虫病进行检测，未针对实验猴临床上易发的寄生虫病，进行系统性、全面性的综合防控技术规范，将传统技术与现代技术相结合，规范实验猴寄生虫病的综合防控技术，目前区内乃至国内还没有制定出相关的技术标准，加上广西特有的高温高湿气候条件，必须根据广西的疫病流行情况进行针对性的防控管理。综上所述，经调查，未见与申报地方标准项目技术要点完全符合的国家标准、行业标准、地方标准以及团体标准。五、主要条款的说明广西地方标准《实验猴寄生虫病防治技术规范》主要内容包括术语和定义、诊断方法、防治要求、驱治方法和监测评价。（一）术语和定义实验猴的定义主要参考行业标准《SN/T3090-2012进出境实验猴现场检疫监管规程》中“3.1实验猴”的术语定义（图1并结合本文件的实验猴的种类和特点进行了修改，确定实验猴的定义为：由人工饲育，对其携带的微生物进行控制，遗传背景明确或者来源清楚的，用于科学研究、教学、生产、检定以及其他科学实验的动物。实验猴主要包括食蟹猴和猕猴。图1摘自《SN/T3090-2012进出境实验猴现场检疫监管规程》寄生虫病的定义主要参考行业标准《WS/T471-2015寄生虫病诊断名词术语》中“2.29寄生虫病”的术语定义（图2），并结合寄生虫的物种进行补充完善，确定寄生虫病的定义为：由动物界包括原生动物的各种寄生性的无脊椎物种（统称寄生虫）引起的疾病。图2摘自《WS/T471-2015寄生虫病诊断名词术语》优势虫种主要依据进行定义，优势虫种指在一定地区，某一种动物所感染的寄生虫虫种当中，感染分布广、且危害严重的主要寄生虫虫种。蠕虫病的定义主要参考行业标准《WS/T471-2015寄生虫病诊断名词术语》中“2.34蠕虫病”的术语定义（图3），并根据实验猴的主要感染的寄生虫进行限定，修改完善蠕虫病的定义为：由吸虫、绦虫、线虫、棘头虫引起的寄生虫病。图3摘自《WS/T471-2015寄生虫病诊断名词术语》原虫病主要依据引起实验猴原虫病的相关寄生虫进行定义，确定为：由溶组织内阿米巴、结肠小袋纤毛虫、球虫、隐孢子虫等引起的寄生虫病。体外寄生虫主要参考行业标准《WS/T471-2015寄生虫病诊断名词术语》中“2.13体外寄生虫”的术语定义（图4），并结合实验猴体外寄生虫实际情况进行修改，最终确定体外寄生虫的定义为寄生于动物体外并暂时性吸取营养的寄生虫。如螨、虱等。图4摘自《WS/T471-2015寄生虫病诊断名词术语》（二）诊断方法实验猴寄生虫病的诊断方法主要包括直接涂片法、水洗沉淀法、卢氏碘液染色法、饱和蔗糖漂浮离心法、虫体浓集法、环介导等温扩增法。直接涂片法、水洗沉淀法、卢氏碘液染色法、饱和蔗糖漂浮离心法主要参照谢永平等的文章《一例食蟹猴结肠小袋纤毛虫感染情况调查》中“2.2寄生虫检测”的相关内容（图5），并结合起草单位多年的人工驯繁养殖实验猴的实际寄生虫病防治经验进行修改完善。直接涂片法操作方法为：在载玻片上滴加一滴生理盐水，用竹签挑取少许被检实验猴新鲜粪便，或者用刀片刮下少许皮屑，将粪便或者皮屑在生理盐水中涂抹均匀，置光学显微镜下检查，或解剖动物后立即用接种环挑取新鲜小肠、盲肠、结肠内容物或病变组织，分别与生理盐水混合涂成薄而均匀的薄膜，盖上盖玻片后于显微镜下检查。此方法适用于大多数虫卵检图5摘自《一例食蟹猴结肠小袋纤毛虫感染情况调查》水洗沉淀法的操作为：取被检粪便10～15g于塑料杯中，加水20～30mL搅拌成混悬液，用60目铜筛过滤到100mL三角烧杯中，再加入适量蒸馏水充分搅拌混匀，静置15min，倒去上清液，向沉渣中再加入蒸馏水，调匀、静置15min。重复3～4次，直至上层液变清。最后倒去上清液，取沉渣涂片镜检。此方法适用于大多数虫卵检测。卢氏碘液染色法的操作为：取少许新鲜粪便或用吸管吸取水洗沉淀法的量杯底部沉淀物1滴，加卢氏碘液工作液1滴，搅匀，盖上盖玻片后，在10×和40×光学显微镜下测量观察。此方法适用于溶组织内阿米巴、结肠小袋纤毛虫、鞭毛虫等原虫检测。饱和蔗糖漂浮离心法的操作为：取被检粪便5～10g于塑料杯中，加入10～20mL自来水充分搅匀，经过60目铜丝筛过滤，滤液装入离心管中，3000rpm离心5min，弃上清，加入适量配置好的饱和蔗糖溶液，充分搅拌，使下层沉淀和蔗糖液充分混匀，3000rpm离心5～10min。用铁丝吊环蘸取表层液膜，涂于载玻片上，制片后于10×和40×光学显微镜下观察、测量。此方法适用于隐孢子虫、鞭虫的检测。虫体浓集法主要参照《动物寄生虫病学（第四版）》中的相关内容，结合起草单位多年的临床经验进行相应调整确定虫体浓集法的操作为：取病料于试管内，加入10%氢氧化钠自热浸泡过弃上清，吸取沉淀，涂于载玻片上，在10×和40×光学显微镜下测量观察。此方法适用于螨虫检测。环介导等温扩增法主要参考《T/CALAS106-2021实验动物结肠小袋纤毛虫核酸检测方法》的检测方法，并结合起草单位多年的临床经验进行相应调整确定环介导等温扩增法的操作为：取待检实新鲜粪便2.0g～5.0g，置灭菌烧杯充分搅匀，称取搅拌后的粪便样本100mg～300mg至2mL离心管中，按粪便基因组DNA提取说明书提取模板DNA。按照LAMP扩增反应试剂盒配制反应(LA-320C，日本荣研公司)密闭进行，浊度仪实时监控扩增情况，反应程序为63℃保持60min，之后85℃灭活5min。仪器通过读取反应管的浊度值绘制浊度曲线，在阴阳性对照成立的情况下，样品反应管出现浊度上升曲线的为可检测出其目的基因，判为阳性，反之为阴性。（三）防治要求人员要求、设施、设备要求、引进猴要求、药物使用要求主要参考国家标准《GB/T19526-2004羊寄生虫病防治技术规范》中“3防治要求”的相关内容（图6），并结合广西区内实验猴饲养相关文件及各单位人工驯繁养殖实验猴寄生虫病防控的多年经验进行补充修改。图6摘自《GB/T19526-2004羊寄生虫病防治技术规范》在人员要求上，技术人员应经过相关的技术培训，严格执行操作规程，每年体检一次，做好人畜防护安全工作。在设施、设备要求上，药浴池要防渗漏，要求建在地势较低处，并远离人畜饮水水源。药浴、药淋设备应按操作要求使用。驱虫前、浴前、淋前要求先进行小群试验，确认安全后方可大群驱虫、药浴或药淋。在引进猴要求上，严格按照《中华人民共和国动物防疫法》的要求，必须从外场引进猴群时，要确认产地为非疫区。引进后隔离饲养45d以上，进行观察、检疫、监测，并进行一次驱虫，收集粪便进行发酵处理。确认为健康后方可与健康猴混群。在药物使用要求上：药物配制、使用剂量和使用方法要严格按照使用说明书进行。休药期要严格按照说明书执行，对未规定休药期的药物，休药期不应少于28d。在饲养管理要求上：幼猴与成年猴应分开饲养，以减少感染机会。供给全价营养饲料，合理补充青料和必要的添加剂，增强猴只抵抗力。病猴应及时隔离治疗，严禁混群饲养，以防感染传播。在其他要求上：驱虫过程中，应跟踪观察，发现中毒、伤残猴应及时采取解毒等治疗措施。驱虫药物的选择主要参考国家标准《GB/T19526-2004羊寄并结合广西区内实验猴寄生虫病防治的相关药物选择的实际情况及起草多年的经验进行修改完善。药物的选择和使用必须符合二册）、《进口兽药质量标准》的相关规定。所用兽药必须来自具有《兽药生产许可证》和产品批准文号的生产企业，或者具有《进口兽药许可证》的供应商。所用兽药的标签应符合《兽药管理条例》的规定。选用的药物要符合高效、广谱、安全、价廉、使用方便的原则。定期预防性驱虫，要选择对优势虫种均有效的药物，如一种药物不能满足要求，可以选择2种或2种以上药物同时使用，但要注意药物配伍禁忌，尽量选择长效驱虫药制剂。图7摘自《GB/T19526-2004羊寄生虫病防治技术规范》圈舍灭虫及废弃物无害化处理分为圈舍灭虫和废弃物无害化处理，主要参考国家标准《GB/T19526-2004羊寄生虫病防治技术规范》中“6圈舍、粪便、尸体、废弃物（液）的处理”的相关内容（图8），并结合广西区内各单位关于实验猴圈舍灭虫及废弃物无害化处理经验及相关文件要求规定进行修改完善。在圈舍灭虫上，应定期在空舍条件下，对圈舍墙壁、地面、围栏、用具、饲喂工具等喷洒杀虫药，能进行火焰消毒的耐高温设施选用火焰消毒法，以杀灭圈舍内的寄生虫卵。可与投药、药浴、药淋同步进行对圈舍墙壁、地面、围栏、用具、饲喂工具等喷洒杀虫药或火焰消毒，也可以根据发病情况或具体情况随时进行。在废弃物无害化处理上：圈舍内粪便要及时清除，粪便集中堆积发酵处理，利用生物热杀灭各种寄生虫和虫卵，达到消灭传染源，保障人畜健康及环境安全。粪便处理应符合NY/T1168的要求；污水处理符合GB18596的要求。病猴尸体及废弃物按《病死及病害动物无害化处理技术规范》规定执行，严禁将未经处理的病猴尸体、废弃物直接喂犬或随地抛弃。图8摘自《GB/T19526-2004羊寄生虫病防治技术规范》（四）驱治方法起草单位所在项目组经过对广西的实验猴寄生虫病的流行病学调查，获得有关广西灵长类实验猴寄生虫病方面的大量数据，依据调查所得相关的数据分析并结合广西特有的高温高湿气候条件，总结出针对蠕虫病、原虫病、螨虫病等几种寄生虫病的针对性驱治方法。蠕虫病：采用高效驱虫药每年全群驱虫，一年进行三次，第一次在春季（3月～4月），第二次在夏季，气温较高，猴群在室外运动频繁时期进行（7月～8月），第三次在秋冬季（11～12月）。原虫病：采用高效抗驱虫药每年全群驱虫，一年进行2～4次，春季（3～4月秋季（9～10月根据寄生虫的流行情况适当调整。螨虫病：发现病猴后及时隔离治疗，选择长效驱虫药，一年进行三次，分别在1月、3月、10月进行驱虫，至少用药2次，用药间隔7～8d。（五）监测抽样数量及比例、监测时间、监测方法主要参照《GB14922-2022实验动物寄生虫学等级及监测》，并结合起草单位所在项目组对广西的实验猴寄生虫病的流行病学调查，获得的有关广西灵长类实验猴寄生虫病方面的大量数据及多年的实验猴寄生虫病防治经验进行确定。在抽样数量及比例上，猴群监测（以猴群为单位），抽样数量为猴数量的5～10%，其中幼猴30%，种猴40%，青年（商品用）猴30%。对规模小于100只的猴群，抽样数量不应少于10只。在监测时间上，蠕虫及原虫在驱虫前1周内或驱虫后7～15d