微生物室作业指导书

微生物室作业指导书微生物室岗位一、岗位设备以及工艺流程1．设备流程全玻璃茄形瓶全玻璃茄形瓶(800ml)标准型双人净化工作台卧式圆形压力蒸汽消毒器(121标准型双人净化工作台卧式圆形压力蒸汽消毒器(121℃×45min)不锈钢接种瓶(10L)种子罐种子罐(0.65M3)2．岗位设备一览表序号设备编号设备名称规格型号数量〔台〕1JZ-1卧式圆形压力蒸汽消毒器YXQ-WY-21-60012JZ-2标准型双人净化工作台SW-CJ-1C23JZ-3不锈钢接种瓶10L24JZ-4新飞冰箱BCD-165E15JZ-5容声冰箱BCD-203A16JZ-6澳柯玛冷藏展示柜SC-23017JZ-7电热手提式压力蒸汽灭菌锅YXQ。SG41。28018JZ-8生物显微镜XS-1819JZ-9落地扇FS18-40110JZ-10电动搅拌机D60-2F211JZ-11增力电动搅拌器JJ-1112JZ-12超级恒温水浴CS501113JZ-13超级恒温器HH．S114JZ-14恒温磁力搅拌器78HW-1315JZ-15电热蒸馏水器HS。Z11。5116JZ-16电热恒温培养箱SKP-01117JZ-17电热鼓风枯燥箱DGF30/T-I118JZ-18精密PH计PHS-3B119JZ-19阿贝折射仪WYA120JZ-20弧形往复式生物液体培养震荡台HSZ-1121JZ-21回转式恒温调速摇床DKY-Ⅱ122JZ-22不锈钢培养架1.5m×1.1m223JZ-23中效送风机〔带电加热〕800M3/h124JZ-24除湿器DH-350B13．工艺控制流程茄形瓶菌种斜面茄形瓶菌种斜面(800ml)孢子悬浮液转入不锈钢接种瓶(孢子悬浮液转入不锈钢接种瓶(无菌操作)卧式圆形压力蒸汽消毒器(121℃×45min)培养温度：30℃低温保藏制备孢子悬浮液〔无菌操作台操作〕接种子罐培养接种子罐培养(30℃)取样监测不同时段PH值、温度及镜检。取样监测不同时段PH值、温度及镜检。发酵罐培养发酵罐培养(30℃)检测菌丝体酶活取样监测不同时段PH值、温度及镜检。检测菌丝体酶活取样监测不同时段PH值、温度及镜检。4．工艺控制要点控制工程工艺参数超出控制范围影响调整措施茄形瓶菌种斜面培养温度30℃影响严格控制控温器茄形瓶菌种斜面保藏温度低温保藏影响严格观查冰箱蒸汽消毒器消毒压力及时间121℃×45min影响严格按照压力容器操作规程操作，控制好压力及温度。4.1制备孢子悬浮液：必须在无菌操作台上制备。4.2孢子悬浮液转入不锈钢接种瓶：必须在无菌情况下操作。4.3接种子罐、发酵罐培养：温度30℃；压力0.1Mpa；超出控制范围影响；4.4检测菌丝体酶活：温度50±1℃；超出控制范围影响；二、操作控制程序1．菌种斜面操作控制程序1.1操作步骤1.1.1别离1.1.1.1、将培养皿用玻璃铅笔标记，标明-4、-5、-6各3只，另外6个试管插入试管架，分别标明-l、-2、-3、-4、-5、-6。将无菌生理盐水往6个试管中各参加4.5ml。1.1.1.2、开始稀释。用吸管吸取已摇匀的孢悬液O.5mL注入-l试管，摇匀。即从O.5mL加至5mL，稀释10倍，这一试管的菌液浓度为原菌液浓度的1/10，即lO-1，简称-1。另取一吸管从-l试管吸0.5mL至-2试管，摇匀。再取一吸管从-2试管吸取O.5mL至-3试管……依次进行。要求一支试管只吸取一个稀释菌液，随即换掉，并在吸取菌液入下一号试管前，用吸管吸取和吹出此已摇匀后的菌液3—5次，以帮助菌液均化。2.1.1.3、从-4号试管开始，在吸取0.5mL至下一试管后，同一试管吸取菌液个0.2mL至3个同一稀释标号的培养皿中，直至-6试管为止。采用什么样方式和匀菌液于培养基内，可根据要求进行。然后将9个培养皿放在30℃的保温培养箱中培养，培养好后收入冰箱待用。1.2、接种1.2.1操作步骤(以液体试管移接液体试管说明)1.2.1.1、左手手拿两只液体试管，外侧为菌液试管。1.2.1.2、将接种环在火焰上烧红灭菌。12.1.3、右手取下管塞，接种环凉后使用。1.2.1.4、试管口靠近火焰灭菌。1.2.1.5、将一环菌液移至培养液管中。1.2.1.6、将接种环在培养液中摇晃一下，取出。1.2.1.7、先将试管在火焰上消毒后，塞管塞。1.2.1.8、将接种环火焰灭菌放回原处。1.2.1.9、在试管标签上标上日期等送培养箱培养。1.3.培养1．3．1、培养室必须清洁。1．3．2、培养物不应摆放过于稠密，需有一定的间隙。1．3．3、控制好培养温度以及观察培养中的生长情况。1．3．4、培养好的菌种要收藏好。1．4、保藏菌种保藏主要是低温保藏，方法根据?工业微生物实验手册?上的相关方法进行。2．卧式圆形压力蒸汽消毒器操作控制程序2．1操作控制程序2．1．1加水：使用此消毒器前须开启进水阀，使水进入蒸汽发生器内，加至离水位表顶端5—10毫米处为止，NN关NANN。每次消毒前应检查贮水，如有不够应予补充。2．1．2堆放：将待消毒的物品预以妥善包扎，顺序地相互之间保持适当间隙地放入消毒室内。堆放物品时不宜紧靠消毒室门，以免蒸汽的冷凝水沿门壁滴在物品上，致使物品吸收过多水份，消毒终了进不易枯燥。料包不易太大，一般以20厘米×10厘米为佳，否那么将延长消毒时间。对溶液进行消毒时，应灌注于硬质耐热玻璃瓶中，以不超过其容积的3／4为宜，用棉塞塞好，牛皮纸包好，切勿使用未打孔的橡胶或软木塞。2．1．3密闭：将门关上，按顺时针方向拨动锁紧手柄至中方位，使撑档进入门圈内，然后转动八角转盘，使门和垫圈密合，不要将门闭得过紧，以免损坏垫圈。2．1．4加热：将压力控制开关的钮拨至开处，电源指示灯亮，表示通电。关闭总阀，按各类物品所需消毒温度，将转动钮拨至0.07、O.11、0.14Mpa，此时电源指示灯亮，表示开始加热，至相应压力时会自动切断电源，指示灯也随之熄灭。以后电流时通时断，自动地使压力表指示。在加热时要适当地翻开消毒正中下端冷凝水泄出器前的控制阀，使冷凝水从夹套内排出，确保到达相应的温度。2．1．5消毒：当夹套内的加热蒸汽到达所选择的控制压力时，即可将其导入消毒室，其步骤为：先将冷凝水泄出器前面的冷凝阀钮开少许，然后将总阀拨至“消毒〞，这时蒸汽便由夹套进入消毒室，放出热量进行加热和润湿消毒物品，消毒室内之空气和冷凝水也由冷凝水泄出器不断排出，这时，夹套内的蒸汽压力下降，消毒室内压力上升，当消毒室温度到达预选温度值时，开始计消毒时间。2．1．6枯燥：消毒时间终了后，按各种不同消毒物品要求任由消毒室内蒸汽自然冷却或预以慢排或快排。如溶液培养基那么须自然冷却或慢排，待消毒室压力降至O位后，再候l—2分钟，方可开启消毒阀门，取出物品。2．1．7终了：如不再继续消毒时，可关去电源开关，将总阀拨至“全排〞，排去套层内的蒸汽并将大门开启，散发消毒室内剩余蒸汽，使消毒室内壁经常保持枯燥。2．2考前须知：2.2.1:不同类型的物品不要同时进行消毒2.2.2:使用前须查水位表，保持足够的贮水量2.2.3:当蒸汽进入消毒室内，应徐徐开放冷凝水2.2.4:平安阀提柄每周提拉1—2次，以保持其灵活性2.2.5:应保持其清洁和枯燥2.2.6:消毒器应在完整情况下操作，并由专人负责，防止发生事故2.2.7:消毒器旁应悬挂操作规程以备查阅和遵循2.2.8:确保电源接地，保证平安3.标准型双人净化工作台操作控制程序3.1操作控制程序3.1.1、使用前先对操作区外表作清洁处理，启动风机20分钟后，即可开始工作。3.1.2、在工作台面上不要存放不必要的物品，保持操作区内的洁净气流不受干扰。3.1.3、禁止在工作台面上记笔记，工作时应尽量防止作明显扰乱气流的动作。3.1.4、定期(一般3月一次)用QDF—2A型球式风速计测量操作区风速，如发现不符合技术要求，那么可调节风机组电机使用电压。3.1.5、经常注意工作台上微压表的指针，当指针从绿色区进入红色区时，说明此时高效空气过滤器的容尘量己趋于饱和，必须半有一次用风速计测量工作区风速，当平均风速0.3m/s时说明高效空气过滤器失效，应预以更换。4.接种瓶使用操作控制程序4.1操作控制程序4.1.1、接种瓶灭菌前必须进行再次清洗并滤干水或者用75％酒精进行浸泡后冲洗(用蒸馏水)干净并滤干水，然后用棉塞及2层牛皮纸包扎瓶口。4.1.2、接种管在灭菌前，也须按照清洗按种瓶一样进行清洗，待干后垫好垫圈，用8层脱脂纱布、2层牛皮纸进行包扎。4.1.3、进行高压灭菌。4.1.4、灭菌完毕后，放置无菌室内，开启紫外灯照射30分钟，待用。4.1.5、孢子悬浮液制备完毕，并将孢悬液转入无菌瓶内，要特别注意无菌操作。4.1.6、转完后，在无菌操作下用无菌接种管摞紧接种瓶时，要特别注意无操作。4.1.7、假设接种时间还未到，装有孢悬液的接种瓶不得搬离无菌室，待接到接种通知后，再从无菌室取出接种瓶到种子罐处进行接种。接种时必须在无菌条件下进行操作。4.1.8、搬运接种瓶过程中，禁止瓶口倾斜以及接种管口的包扎物松动脱落。4.1.9、接种完毕，接种瓶、管必须认真冲洗，然后倒立于干净的桌面上滤干水，待下次使用。5.紫外灯使用操作控制程序5.1操作控制程序5.1.1、紫外灯使用范围：紫外灯使用范围包括，菌种室、缓冲间、培养间、微生物实验室、摇瓶问、淋门以内、南平安门以内的控制区。5.1.2、紫外灯的使用时间：每天上班前20分钟为紫外灯照射时间。5.1.3、其它：使用紫外灯时，注意观察紫外灯是否正常，有异常情况应及时反映给车间，要时进行更换。5.1.4：固定的紫外灯照射不到房间死角或设备内部，可用流动紫外灯照射。5.1.5：紫外灯使用情况和时间填写“紫外灯使用情况记录〞，并由使用者签名。6.电热蒸馏水器使用操作控制程序6.1操作控制程序6.1.l、蒸发器安装完毕后，将蒸馏水器放水龙头关闭，然后翻开水源使水经冷凝器流入回水漏斗中，注入蒸发器内，直至水位上升到水位镜处暂将水源关闭。6.1.2、接通电源开始加热。6.1.3、当蒸发器内水沸腾，开始出蒸馏水时，将水源翻开，冷却水源由小到大逐渐调整，以所出蒸馏水40－45为宜。同时用水阀调整进水量使蒸发过程中，蒸发器内水位高度保持在水位镜范围内。6.1.4、每次使用完毕应将锅内剩水排净，清洗干净，保持枯燥清洁。6.2考前须知：6.2.1．电源电压，必须与本设备要求电压相符，使用请必须接好地线。6.2.2．蒸馏用水应符合国家有关标准，使用天然水应经处理前方可使用。6.2.3．本蒸馏水器软管自备，使用请应按要求接好。.2.4．在使用前切记先加水后通电，蒸馏过程中要随时观察，调整进水量，保持平安水位。7.无菌室使用操作控制程序7.1操作控制程序7.1、进入GMP无菌室，在外脱下所穿的鞋，将换下的鞋、套上专用黑塑料袋，放入鞋柜中(或指定地点〕转身180°取出拖鞋，穿拖鞋进入一更更衣室。并将白大褂脱下，整齐放入更衣框内后，进入缓冲间，并用洗手液洗手，烘干，然后进入二更更衣室。7.2、进入二更更衣室，戴口罩，穿工作服、裤。不得长发外露，换上工作鞋，更换后的拖鞋，放入更衣柜内或指定地点，然后进入缓冲间。7.3、进入缓冲间后，进行手的消毒、烘干，然后进入微生物实验室。7.4、进入微生物实验室7.4.1、进入微生物实验室开始工作前，首先了解清楚电闸、气闸等所设的位置。7.4.2、实验室必须经常进行卫生清扫，每3个月定期进行空间消毒灭菌(用一些化学试剂如甲醛熏蒸l—2天，再用氨水中和20分钟，然后开排风吹，或者用乳酸熏蒸等)。7.4.3、工作前后必须用新洁尔灭溶液进行地面洁净消毒，用75％的酒精擦拭操作台及桌椅。7.4.4、每天开启紫外灯消毒20分钟，专人负责并作好记录。7.4.5、每月用甲酚皂擦拭一次室墙面、门窗的消毒。7.4.6、进入无菌操作前必须先用紫外灯灭菌20—30分钟。7.4.7、进入无菌室时，穿戴好无菌工作服，推开操作间门，进入后立即关门。7.4.8、操作时禁止谈话，禁止在无菌操作过程中进入无菌室内无故走动。7.4.9、无菌操作完毕后，进行清洁卫生，开启紫外线灯对无菌室灭15分钟，此后关闭紫外灯，无菌操作结束。7.4.10、严禁不相关及外来人员进入无菌室。7.4.11、使用的电器设备应定期检查。7.4.12、离开实验室时，应换下工作服，不得穿工作服到室外。8.菌种室发酵中控操作控制程序8.1操作控制程序8.1.1、PH值：当发酵工段操作人员配好料通知取样时，菌种室中控人员校好酸度计取样调PH值6.0±0.1，然后做好接种准备工作。8.1.2、种子罐接种：料液打入种子罐后，操作人员对其进行实消，当罐内温度降至培养温度并保持稳定10－15分钟即可进行接种，并记录接种时间。8.1.3、种子罐培养中控：从接种完毕即开始计时培养，并在接种后1、4、6、8、10小时时分别取样监控工程为PH值、温度、镜检、并做好中控记录，培养10小时后，那么每小时取一次样进行监测，直到可移种时下移种通知单。8.1.4、发酵罐培养中控：当发酵罐内培养液温度降至培养到一定程度可移种的培养液移种入发酵罐内，并记录翻罐时间，从移完种开始计时培养，待到达停罐条件时，中控人员应提前下达具体停罐时间开始离心别离，同时做好中控记录。8.1.5、酶活测定：分别取前6次离心所得菌丝体少许捏细混匀。准确称取0.1g放于50ml12.5％的蔗糖溶液中，在温度为50℃±1的条件下开启反响，并记录时间，反响1h后停止搅拌，取出反响液进行灭酶，用孔径为０.45μ滤膜过滤出10－15ml样品，送样进行HPLC检测，计算出酶活并填写酶活测定通知单，一式肆份，下发管理部门及酶化车间。9.生物显微镜操作控制程序9.1操作控制程序9.1.l、将所需观察的标本放在工作台上夹住。9.1.2、将各倍率物镜顺序地装在物