DB37-T 4206-2020 渔用兽药 中草药中氯霉素的测定 液相色谱串联质谱法

65.020.30CCS

B

42DB37 37/T

4206—2020渔用兽药 中草药中氯霉素的测定液相色谱串联质谱法

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Chinese

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liquid

tandem

山东省市场监督管理局 发

布DB37/T

4206—2020 本文件按照GB/T

—《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东省农业农村厅提出并组织实施。本文件有山东省农业标准化委员会渔业标准化分技术委员会归口（鲁）。本文件起草单位：山东省淡水渔业研究院、青岛市华测检测技术有限公司。本文件主要起草人：吴蒙蒙、姚建华、朱永安、武风娟、孙栋、赵华锋、张婵、郭芳芳、刘红彩。DB37/T

4206—2020 1 范围本文件规定了渔用兽药

中草药中氯霉素测定的原理、试剂和耗料、仪器设备、样品、测定步骤、测量结果、检测方法灵敏度、回收率、精密度、线性范围。本文件适用于渔用兽药

中草药中氯霉素的测定方法。2 规范性引用文件文件。GB/T

6682 分析实验室用水规格和试验方法。3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理C18净化后，液相色谱串联质谱仪测定，内标法定量。5 试剂和耗材5.1

水：GB/T

6682，一级。5.2

乙酸乙酯：色谱纯。5.3

乙腈：色谱纯。5.4

甲醇：色谱纯。5.5

氨水：分析纯。5.6

50

%乙腈水溶液：将

50

乙腈与

50

水混合均匀。5.7

氯化钠：分析纯。5.8

氯霉素标准品：氯霉素

，纯度不低于

%

3

5.9

标准溶液的配置。a)

mg(精确至

0.01

mg)于

mL

(4.4)溶解定容，该溶液浓度为

1

mg/mL。

℃避光保存，有效期为

6

个月。b)

0.1

mL

于

mL

定容，该溶液浓度为

10

μ

g/mL。-18

℃避光保存，有效期为

3

个月。DB37/T

4206—2020c)

0.1

mL

于

10

mL

释定容。该溶液浓度为

μ

g/mL。-18

℃避光保存，有效期为

3

个月。d)

氯霉素氘代内标：氯霉素

D-5，纯度不低于

99

%-18

℃储存，有效期

3

e)

氘代氯霉素储备液：10

精确至

0.01

mg)于

10

mL

棕色容量瓶中，用甲醇溶解定容，该溶液浓度为

1

mg/mL。-18

6

个月。f)

于

mL

甲醇稀释定容，该溶液浓度为

μ

g/mL。-18

℃避光保存，有效期为

3

个月。g)

0.1

mL

于

10

醇稀释定容。该溶液浓度为

0.1

μ

g/mL。-18

℃避光保存，有效期为

3

个月。5.10 实验耗材5.10.1 C18固相萃取柱：1

000

mg/6

mL。5.10.2 微孔滤膜：0.22

μ

m，有机系。6 仪器设备6.1

液相色谱－串联质谱仪：配电喷雾离子源（）。6.2

电子天平：感量

0.000

1

g

和

0.01

mg。6.3

旋涡混合器。6.4

离心机：转速不低于

10

r/min。6.5

固相萃取装置。6.6

超声波震荡器。6.7

旋转蒸发仪。7 样品部过0.45

筛，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，装入清洁容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样。液体样品混匀后取出部分作为试样，其余样品作为留样。8 测定步骤8.1 提取称取2

g（精确至0.001

g50

μ

L8

mL混匀后静置30

，加入

mL氨水，再加入

mL乙酸乙酯，振荡提取10

min，10000

r/min离心5

min，取上层乙酸乙酯于鸡心瓶中，40

℃旋转浓缩至近干，加入2

mL乙腈涡旋混匀，取1

mL4

水混匀。8.2 净化依次用6

mL乙腈和6

C18

mL乙腈水，收集洗脱液于50

mL离心管中，加入约0.5

g氯化钠使上述溶液饱和，振荡，4

r/min5

min，取上层乙腈层于40

℃氮吹浓缩至干。准确加入2

mL乙腈溶液定容，过0.22

μ

m滤膜。8.3 标准工作曲线的制备minmL/min

0.000.310901.500.3953.500.3953.510.310905.000.31090

Parentm/z

Daughterm/z

Cone

Energy321.0152.12518321.0257.12512-D5326.1157.12518DB37/T

4206—2020精确移取适量氯霉素标准工作液于10

mL0.1

mL乙腈水溶液稀释成浓度分别为0.2

μ

、0.5

μ

g/L、

μ

、1.0

μ

、5.0

μ

的标准溶液，现用现配，供液相色谱-串级质谱仪测定，内标法定量。8.4 仪器测定8.4.1 液相色谱条件色谱柱：

C18柱，长50

mm，内径

mm，粒径

μ

m40

℃；流速：0.3

mL/min；进样量：3

μ

L；流动相：A：乙腈；B：水，梯度洗脱条件见表1。表1 梯度洗脱程序表8.4.2 质谱条件离子化模式及扫描方式：电喷雾负离子扫描（ESI-）；检测方式：多反应检测（）；毛细管电压（Capillary2.0

Kv；脱溶剂温度（

Temperature

脱溶剂气流速（）：1000

L/Hr；锥孔气流速（Cone

L/hr；雾化气（Nebuliser）：

Bar；定性离子对、定量离子对及电压、碰撞能量见表2。表2质谱参数8.4.3 定性测定在相同测定条件下，待测物在样品中的保留时间与标准工作液中的保留时间相对偏差在±

%之较，若相对偏差不超过表3规定的范围，则可判断为样品中存在对应的待测物。5020101020253050DB37/T

4206—2020表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差8.4.4 定量测定氯霉素标准工作液特征离子的多反应监测（）色谱图见附录A。8.5 空白测试除不加试样外，均按上述测定步骤进行。8.6 平行测试按照上述前处理方式对同一样品进行平行试验测试。9 测量结果试样中氯霉素的含量按公式（1）计算，数值以微克每千克（μ

g/kg）表示，计算结果需扣除空白值：X=

c

nm

......................................

(1)式中：X

——样品中氯霉素的含量（μ

g/kg）；c

——从内标标准曲线查得的试样溶液氯霉素的浓度，单位为微克每升（μ

）；V

——试样的定容体积，单位为毫升（mL）；n

——等分倍率；m

——试样的质量，单位为克（g测定结果用平行测定算术平均值表示，结果保留2位有效数字。10 检出限、回收率、精密度、线性范围10.1 检出限与定量限本方法检出限为0.3

μ

，定量限为1

μ

g/kg。10.2 回收率本方法基质加标样品加标量1

μ

g/kg～10

μ

g/kg范围内，回收率均为80

%～

%。10.3 精密度本方法的批内变异系数CV小于等于10

%，批间变异系数CV小于