微生物学检验(第3版)微生物检验质控

微生物检验的质量控制

检验学院：汤丽霞第二十二章2009北京医院感染管理学习班Company

Logo内容检验前质量保证检验中质量保证检验后质量保证2009北京医院感染管理学习班Company

Logo质量保证

（qualityassurance，QA）

概念：有计划地、系统地评估和监测患者诊疗质量的整个过程，以便及时发现问题，采取有效措施，提高质量和服务。随着质量管理理念的发展，质量保证的重点由发现问题转变为质量评估和质量改进。质量控制室内质控由实验室内部制定并实施的，是质量保证的核心和基础。室间质评是由实验室外部的组织和医疗机构对实验室的质量进行评价

全部检验流程中各分析阶段实验室的比例

理解检验的需求性检验申请的必要条件32-75%病人准备分析前标本采集标本处理4-32%标本分析分析中报告单的生成9-55%报告单修正分析后报告判读

分析前质量控制临床检验科全面质量管理系统用于临床诊断与治疗分析测定参与临床诊断、查房等医疗活动，帮助临床医生合理分析、正确使用检验结果分析中分析后

通过实践与文献复习进行方法学研究、临床意义探讨、经济学评估，不断开展循征医学工作探讨标本采集各环节影响实验因素并制定相应制度与措施检验科与临床密切的信息交流临床医生选择最直接最有效的,最合理,最经济的项目用于患者,正确化验单的书写检验科对临床医生选择项目时,提出自己的建议对检验科工作人员不断进行专业知识继续教育,不断提高整体素质和学术水平

医护人员能正确进行标本采集与运送标本采集检查、监督标本是否符合要求标本运送病人准备建立检验报告解释咨询及建议的机构临床检验科2009北京医院感染管理学习班Company

Logo检验前的质量保证

检验前程序，又叫分析前期，指从临床医生开医嘱开始，到分析检验程序启动时终止的步骤。包括：检验申请标本的采集与运送。2009北京医院感染管理学习班Company

Logo检验申请患者姓名、出生年月日、病房和床号、年龄和性别临床表现及当前所用抗菌药物相关旅行史标本来源检验项目感染类型或目标微生物标本采集时间、实验室收到标本时间2009北京医院感染管理学习班Company

Logo标本的采集

原始标本采集手册包括：患者准备不同部位标本的采集方法标本运送要求延迟运送时标本的贮藏方法安全运送标本的方法标本标识标本采集指南应方便标本采集、运送者取阅2009北京医院感染管理学习班Company

Logo标本的运送与接收标本运送：根据申请检验项目性质；标本采集指南规定运送时间、运送条件、运送培养基；安全运送标本方法以及国家、地区及当地相关法规要求进行监控标本接受：制定并执行标本接收或拒收标准，包括合适的标本类型、标本量、运送条件、预防拭子干燥、运送培养基等缺乏正确标识标本：一般不接收或处理；若被检物不稳定，并且标本不可替代或很重要，可以先处理，待申请医师或标本采集者识别并确认后，再发送报告

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Logo微生物检验中的质量保证

人员试剂培养基设备检验过程2009北京医院感染管理学习班Company

Logo一、人员1.经过广泛的基础训练教育，包括微生物学、基础医学临床医学知识的学习，专业化的实验技能培训。2.参加医务人员的继续教育。

3.配有一名经严格训练并长期从事于微生物检验的技术人员，全面负责实验室的工作。2009北京医院感染管理学习班Company

Logo4.操作手册包括：①各级人员的职责和权限；②实验室安全措施；③标本采集和处理指南；④本室开展的检验项目及最低鉴定要求；⑤培养基和试剂的配制方法；⑥质量控制方案；⑦常用参考数据；⑧其他制度。2009北京医院感染管理学习班Company

Logo二、试剂标识：名称、浓度、储存条件、配制日期、失效期，生物危害性新批号或同一批号不同货次试剂使用前性能评估。评估方法：分析质控物质新旧批号平行试验常规质控2009北京医院感染管理学习班Company

Logo1.生化反应试纸和试剂的质控

试纸和试剂无论是外购的还是自制的，在使用时一定要注明开启时间和失效期。测定代谢产物的试纸或试剂，要用已知阳性和阴性的菌株进行测试，并作好测试记录。测定代谢产物的试剂，要防止细菌的污染。触酶、氧化酶、凝固酶试剂在开瓶时以及使用中，每天至少要分别用一阳性和阴性菌测试1次2009北京医院感染管理学习班Company

Logo表3常用试剂的质量鉴定试剂名称阳性对照菌种阴性对照菌种监控频率

凝固酶血浆金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌每天

杆菌肽A群链球菌B群链球菌每周Optochin

纸片肺炎链球菌每周10%去氧胆酸钠肺炎链球菌

每周三氯化铁（马尿酸钠试验）B群链球菌A群链球菌每次过氧化氢

金黄金葡萄球菌A群链球菌每天氧化酶铜绿假单胞菌大肠埃希菌每天2.染色液质控①、染色液名称、配制日期、配制人的标签。②、初次使用时必须用革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌标准株作质量鉴定，以证实染色液配制无误。③、商品化染色液应对品牌、试剂名称、批号、存放条件、失效期。厂家应向客户提供染色液鉴定的质量保证书。④、过期的染色液应不再使用。3.诊断血清的质控①、生产批号、血清效价、透明度与色泽。②、初次使用时应注意：工作浓度并与原用的诊断血清对照比较后再用于病人样品的测试。③、试验中应注意无菌操作，避免细菌污染。要经常检查贮存在4℃冰箱中的各种血清，若发现混浊，出现絮状，应停止使用。④、为保证血清凝集反应结果准确，应每3个月对血清进行一次质控。⑤、不要使用过期的血清。2009北京医院感染管理学习班Company

Logo三、培养基

培养基是分离培养微生物的必需品。培养基质量的好坏，直接关系到分离培养的成败。目前大多数实验室都使用干粉培养基配制或使用成品培养基。对来自著名的微生物培养基生产公司的培养基，质量比较稳定。只要按照说明书的要求贮存，在有效期内使用可获得满意效果。2009北京医院感染管理学习班Company

Logo1．一般性状培养基的一般性状包括外观、厚度、pH值等。刚配制的液体培养基，其外观应透明、清亮、无混浊、无沉淀，颜色符合要求。新鲜的固体培养基应具有特定的颜色，表面湿润但无水汽、平整、光洁无凹坑和气泡。整块平板厚薄均匀，一般厚度在

3mm，但MH平板的厚度不得小于

4mm，当颜色改变，表面干燥，出现裂纹或边缘的琼脂与平板或试管分离时，应不再使用。斜面的长度不得超过试管长度的2／3。应经常观察贮存培养基的质量是否合格。液体培养基液面降低，表明水分蒸发，培养基浓缩。2009北京医院感染管理学习班Company

Logo

外观良好：表面平滑、水分适宜、无污染、适当的颜色和厚度明确标识：能够获得生产日期、保质期、配方、质量控制、贮存条件等信息自制培养基：检测每批号相应的性能，如：无菌试验、生长试验或与旧批号产品平行试验、生长抑制试验（适用时）、生化反应（适用时）等2009北京医院感染管理学习班Company

Logo2．无菌试验

新制备的培养基要按批号随机抽取一定数量的样品作无菌试验。对于压力蒸气灭菌后倾注的固体培养基，抽样后放35℃±1℃温箱培养24-48h；灭菌后经无菌操作分装的液体培养基要全部放入35℃±1℃温箱内培养24h；对有些无需高压灭菌只需煮沸消毒的选择性培养基要取部分琼脂，放入无菌肉汤管培养24h：上述试验证实无细菌生长时才算合格。若有细菌生长，说明培养基制备过程中已受杂菌污染，除了寻找原因外，应不再使用。2009北京医院感染管理学习班Company

Logo3．细菌生长试验

所有的培养基在使用前除了做无菌试验外还必须做细菌生长试验以测定培养基性能是否符合要求。要用已知的标准菌株按照NCCLS推荐的方法作质控。质控所需的标准菌株分2种：一种是已知的可在某种培养基上生长并产生典型生物学性状的，对培养基中的某种物质产生阳性反应的菌株；另一种是用已知的不能在某种培养基上生长或对培养基中的某种物质产生阴性生化反应的菌株。表2列出10种常用固体培养基的质量鉴定标准及所需标准菌株。2009北京医院感染管理学习班Company

Logo种常用培养基的质量鉴定

培养基名称质控菌株ATCC鉴定标准血平板金黄色葡萄球菌25923中度到大量生长

化脓性链球菌19615生长，β-溶血

肺炎链球菌6305生长，α溶血

大肠埃希菌25922生长

巧克力平板流感嗜血杆菌10211生长

脑膜炎奈瑟13090生长淋病奈瑟菌43096生长

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Logo

伊红美蓝平板鼠伤寒沙门菌14028生长，无色到琥珀色大肠埃希菌25922生长，蓝黑菌落，金属光泽粪肠球菌29212部分抑制

麦康凯平板大肠埃希菌25922生长，红色菌落

奇异变形杆菌12453迁徒现象部分抑制

鼠伤寒沙门菌14028无色菌落

粪肠球菌29212部分抑制

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Logo测定羊血琼脂平板的性能

培养基质控菌株判定标准生长试验金黄色葡萄球菌ATCC25923生长溶血反应肺炎链球菌ATCC19615生长，α溶血化脓性链球菌ATCC6305生长，β溶血杆菌肽敏感（纸片法）化脓性链球菌ATCC6305＞10mm，敏感B群链球菌＜10mm，耐药2009北京医院感染管理学习班Company

Logo购买的培养基注意事项

最好检查并记录每批号和/或批次产品的破损、污染状况，以及外观、冷冻或受热等信息遵循一定质量保证标准产品：免除质量控制，保存生产者所遵循的质量保证标准，以及每批号产品完成无菌试验、质量控制性能合格证明等文件。当培养基脱水、溶血、破损、被污染或量不足时，仍应进行质量控制。不能提供所遵循的质量保证标准的产品：进行质量控制（包括相应的性能检测）。抗微生物药物敏感试验的质控方法：K-B法、稀释法M-H培养基：4nm，是影响K-B法准确性的重在因素。抗生素：纸片在取用或贮存的过程中失效培养条件：平板孵育的时间、温度、气体偏离标准操作人员的技术不够熟练0.5号麦氏浊度标准管药敏试验质控的方法及步骤11、药敏质控菌株按标准方法与临床标本分离鉴定同步进行药敏试验2、更换培养基的药物时必须用相应的质控菌株测试3、所有质控菌株在实行常规监控（一周一次监控）前应连续监测30天4、对每种菌、每种药物，30次试验中失控结果不能超过3次。药敏试验质控的方法及步骤25、如果30天监控结果完全符合上述要求，可转为一周一次的监控方法。6、当失控原因不明时，用质控菌株连续做5d质控，每种菌对质控的每种药同时测出5个圈，如果结果完全达到可接收范围，可一周一次的监控7、只要抑菌圈超出可接收范围都必须校正药敏中存在问题不能及时获得新的NCCLS标准纸片保存不标准，M－H平板的厚度。不会做苛养菌的药敏试验：肺炎链球菌嗜血杆菌奈瑟菌药敏质控系统包括(1)经过正规培训，掌握药敏试验操作方法的人员；(2)要有标准操作规程，其中包括药敏试验方法、标准菌株种类及应用、药敏试验的质控方法及允许范围、药物种类选择与判断标准等；(3)有试验所需的质控菌株；(4)使用质量合格的消耗性检验材料；

(5)仪器设备运转正常控制标准在允许范围内。推荐的质控菌株推荐的质控菌株2009北京医院感染管理学习班Company

Logo四、设备制定并执行标准操作程序定期实施维护、保养、监测，并记录新设备或经搬运、维修后的设备：性能评估及功能验证，或确保实验结果的准确性

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Logo仪器设备的质控

临床微生物实验室最常用的仪器设备是光学显微镜、温箱、二氧化碳培养箱、冰箱与低温冰箱、压力蒸汽灭菌器等。这些仪器设备的质量控制标准见表1。2009北京医院感染管理学习班Company

Logo表1临床微生物实验室常用仪器设备的质量控制仪器设备名称控制标准允许范围监控方法和频率

光学显微镜

每年4次或需要时，作清洁与调试培养箱

35℃±1℃每天观察记录温度二氧化碳培养菌

每天观察记录温度和温度35℃±1℃二氧化碳浓度气体5%-10%<10%

冰箱

每天观察记录温度冷藏室4℃±2℃

冷冻室-5℃±1℃

低温冰箱-20℃±5℃每天观察记录温度压力蒸汽灭菌器121℃≥121℃使用时观察并记录温度、压力，每周用嗜热芽孢菌或每次用化学方法测试灭菌效果2009北京医院感染管理学习班Company

Logo常用设备温度依赖检测设备：定时监测温度，使用过程中注意温度变化；存放试剂和标本的冰箱，亦应监测温度。确保温度计准确、量程适宜并经检定，已保证设备温度符合要求。定量移液器、微量滴定管或自动分配器：核查并记录使用区间内的准确性和重复性定期监测特殊设备性能：CO2孵育箱内CO2浓度；厌氧系统厌氧条件；生物安全柜内气流、过滤器（必要时）；压力灭菌器灭菌效果等。2009北京医院感染管理学习班Company

Logo五、检验过程

标本质量评估检验方法的确认和验证标准化操作程序生物参考区间：定期评审测量准确性内部质量控制体系测量系统校准和验证2009北京医院感染管理学习班Company

Logo标本质量评估内容标本量标本采集次数标本的质量血液、体液、尿标本等的污染率

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Logo检验方法的选择与确认公认的、权威的教科书经同行评议的书刊、杂志国际、国家、