高考生物二轮复习 微生物的培养与应用专题卷1试题

微生物的培养与应用一、单选题1．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果【答案】C【解析】试题分析：计数时一般选取菌落在30～300之间的平板，C错误。考点：本题意在考查土壤中微生物的分离与计数的问题，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点的能力。2．用平板划线法或稀释涂布平板法都可以纯化大肠杆菌，二者的共同点有几项①可以用相同的培养基②都要使用接种环进行接种③都需要在火焰旁边进行接种④都可以用来计数活菌A.一项B.二项C.三项D.四项【答案】B【解析】①平板划线法或稀释涂布平板法都是在固体培养基上进行的，所以①描述正确；②平板划线法接种用接种针，稀释涂布平板法接种要用涂布器，所以②描述错误；③不论是平板划线法还是稀释涂布平板法都需要进行无菌操作，在酒精灯火焰旁进行，所以③描述正确；④平板划线法不能用于计数活菌，只能用于分离菌种；稀释涂布平板法可以用来计数活菌，所以④描述错误；综上所述，正确的是①③，选B。【考点定位】微生物的分离和培养【名师点睛】微生物的纯化培养方法

平板划线法

稀释涂布平板法

注

意

事

项

（1）接种环的灼烧①第一次划线前:杀死接种环上的微生物,避免污染培养物②每次划线前:杀死残留菌种,保证每次划线菌种来自上次划线末端③划线结束后:杀死残留菌种,避免污染环境和感染操作者

（2）灼烧接种环之后,要冷却后再进行操作,以免温度太高杀死菌种

（3）划线时最后一区域不要与第一区域相连

（4）划线用力要大小适当,防止用力过大将培养基划破

（1）稀释操作时:每支试管及其中的9mL水、移液管等均需灭菌;操作时,试管口和移液管应在离火焰1～2cm处

（2）涂布平板时

①涂布器用体积分数为70%酒精消毒,取出时,让多余酒精在烧杯中滴尽,然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中,以免引燃其中的酒精③酒精灯与培养皿距离要合适,移液管管头不要接触任何物体

3．采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌()A.接种环、吸管、培养基、接种室B.吸管、接种环、培养基、接种箱C.培养基、接种环、吸管、接种箱D.培养皿、吸管、培养基、双手【答案】B【解析】接种环属于接种用的金属工具，需要用灼烧灭菌；吸管在使用前保持干燥，需要用干热灭菌；培养基应该用高压蒸汽灭菌；接种室、接种箱需要用紫外线照射灭菌；双手可以用医用酒精消毒；综上所述，选B。【点睛】总结常见灭菌方法的应用：高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌；干热灭菌适用于需要保持干燥的空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌；无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌；微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。4．下列有关微生物培养的说法，正确的是（）A.制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、消毒、倒平板B.分离能分解纤维素的细菌，要以纤维素作为培养基中唯一碳源C.配置培养不同微生物的培养基时都要将pH调至中性或微碱性D.在无氮培养基中加入酚红指示剂可用来鉴定尿素分解菌【答案】B【解析】制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，消毒知识杀死部分微生物，灭菌则是彻底消灭所有微生物，A错。只有能分解纤维素的细菌才能从培养基的纤维素获取碳源，其他微生物不能，B正确。培养霉菌的培养基要将pH调至酸性，细菌为中性或微碱性，C错。在以尿素为唯一氮源的培养基加入酚红指示剂，如果PH升高，表示该细菌能够分解尿素，D错。【考点定位】微生物的培养相关知识5．关于灭菌和消毒的叙述，错误的是A.接种环、接种针用灼烧的方法灭菌B.灭菌是杀死物体内外所有微生物C.消毒是杀死物体内外绝大多数的微生物D.高压蒸汽灭菌的原理是使细菌DNA变性【答案】D【解析】试题分析：微生物实验中一定要防止杂菌污染，接种环、接种针常用灼烧的方法灭菌，A正确；灭菌是为了杀死物体内外所有微生物，B正确；消毒是杀死物体内外绝大多数的有害微生物，C正确；高压蒸汽灭菌的原理是使细菌蛋白质和DNA变性，D错误。考点：本题考查灭菌和消毒的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。6．在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种（甲）、培养结果（乙）如下图且甲乙的对应位置不变。有关叙述，错误的是A．配制培养基时需进行髙压蒸汽灭菌B．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落C．图示接种过程中接种环至少灼烧了5次D．甲中a区域为划线的起始位置【答案】D【解析】试题分析：为了能彻底灭菌，配制的培养基需进行髙压蒸汽灭菌，A正确；连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落，B正确；由于每次使用接种环前后都要灼烧灭菌，从图示甲中4次划线接种就可推出，接种过程中接种环至少灼烧了5次，C正确；起始划线的区域长出的菌落多且密，根据甲乙对应区域对比，甲中a区域为划线的结束位置，D错误。考点：平板划线法【名师点睛】平板划线法注意事项：（1）接种环的灼烧①第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物②每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者（2）灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种（3）划线时最后一区域不要与第一区域相连（4）划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破7．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，关于倒平板的描述正确的是()①等培养基冷却至40℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰④用左手的拇指和食指打开皿盖⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖⑥等待平板冷却5～10s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上A.①②③④B.④⑤⑥C.③⑤D.①②④⑥【答案】C【解析】①培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，防止杂菌污染，①错误；②不能将灭过菌的培养皿放在桌面上，因为桌面上可能有杂菌，②错误；③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰，高温防止杂菌污染，③正确；④用右手的拇指和食指打开皿盖，④错误；⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖，并通过酒精灯火焰，⑤正确；⑥等待平板冷却5～10分钟，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上，⑥错误；综上所述，选C。8．MS培养基与微生物的培养基相比，需要提供大量的（）A.无机营养B.蔗糖C.甘氨酸和微生素D.激素【答案】A【解析】9．下列哪一种方法能将T2噬菌体的DNA标记上32PA．用含32P标记的大肠杆菌培养B．用含32P标记的植物细胞培养C．用含32P标记的动物细胞培养D．用含32P标记的固体培养基培养【答案】A【解析】试题分析：T2噬菌体是一种寄生在大肠杆菌体内的病毒，在侵染细菌时，DNA进入到细菌的细胞中，而蛋白质外壳仍留在细菌细胞外；在噬菌体的DNA的指导下，利用细菌细胞中的物质来合成噬菌体的组成成分。因此用含32P标记的大肠杆菌培养T2噬菌体，才能使T2噬菌体的DNA标记上32P，A项正确，B、C、D三项均错误。考点：本题考查噬菌体侵染细菌的实验的相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。10．在细菌的连续培养过程中，要以一定速度不断添加新的培养基，同时以同样速度放出老的培养基。右图表示培养基的稀释率（培养基的更新速率）与培养容器中营养物质浓度、细菌代时（细菌数目增加一倍所需的时间）、细菌密度的关系。下列相关叙述不正确的是A．在稀释率很低的情况下，稀释率的增加会导致细菌密度增加B．稀释率从a到b的变化过程中，细菌生长速度不断提高C．稀释率超过b点后，营养物质浓度过高导致细菌死亡率增大，细菌密度降低D．为持续高效地获得发酵产品，应将稀释率控制在b点附近【答案】C【解析】试题分析：当稀释率大于b点的时候，营养物质的浓度还会进一步增加，代时也还会进一步缩小，但是由于培养液更新的速度太快，细菌很快就会随“老”的培养基被放出而在这个培养环境中存留的时间非常的短暂，最后导致细菌的密度较低。C错误。ABD叙述正确，本题选C。考点：连续培养法点评：本题考查了学生的曲线及试验分析能力，难度较大，解题的关键是会分析不同条件下曲线之间的关系。11．获得纯净培养物的关键是（）A.将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌B.接种纯种细菌C.适宜环境条件下培养D.防止外来杂菌的入侵【答案】D【解析】试题分析：防止杂菌入侵，是获得纯净培养物的关键。在实验室培养微生物，一方面要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面要保证其他微生物无法混入。考点：微生物的培养12．单细胞蛋白是指（）A．单个植物细胞培养得到的高纯度蛋白质B．单个动物细胞培养得到的高纯度蛋白质C．单个细菌细胞分泌的蛋白质D．通过发酵获得的大量微生物菌体【答案】D【解析】试题分析：单细胞蛋白是指通过发酵获得的大量微生物菌体，这是其定义。考点：本题考查单细胞蛋白。点评：基础题，考生熟悉单细胞蛋白定义可轻松作答。13．某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染，为查找污染原因设计了四个实验，实验条件除图示外其他均相同。下列各图表示实验结果，下列有关说法正确的是A．培养基灭菌时间长短是造成污染的主要原因B．污染主要来源于组织培养所用的离体组织C．灭菌后可以添加HCl或NaOH来调节培养基的pHD．为调节培养温度可以在培养时加清水降温【答案】B【解析】试题分析：随培养灭菌时间的变化，污染率在一定范围内波动，可见污染主要不是培养基灭菌时间短造成的，A错误；随离体组织灭菌时间变化，污染率曲线变化明显，说明污染主要来源于组织培养所用的离体组织，B正确；调节培养基的pH值要在灭菌前，C错误；调节培养温度不可以在培养时加清水降温，D错误。考点：本题主要考查微生物实验室培养的相关知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间内在联系的能力。14．需要在火焰旁操作的有①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养A．①②③④⑤B．②③④⑤C．③④⑤D．②③④【答案】D【解析】试题分析：②称取土壤、③土壤溶液稀释、④涂布平板等操作均需在火焰旁进行，以防止杂菌污染。因此，D项正确，A、B、C项错误。考点：微生物的分离和培养15．下列关于高中生物学实验的原理、方法或选材的叙述，正确的是A.制作果醋时，通氧不足或温度过低会使发酵受影响B.利用稀释涂布平板法对细菌计数时需借助于显微镜C.对提取出的胡萝卜素进行纸层析鉴定，在纸层析过程中，滤纸可放在普通烧杯中D.固定化酶和固定化细胞技术中，反应产物对固定化酶的活性没有影响【答案】A【解析】醋酸菌是嗜氧菌，也是嗜温菌，因此制作果醋时，通氧不足或温度过低会使发酵受影响，A正确；利用稀释涂布平板法对细菌计数时，通过肉眼即可数出菌落数，不需借助于显微镜，B错误；在纸层析过程中，滤纸放在装有层析液的密封的玻璃瓶中，C错误；某些反应产物可能与酶结合，致使酶的结构产生变化，从而改变酶的催化活性，因此固定化酶和固定化细胞技术中，反应产物对固定化酶的活性可能有影响D错误。16．用蔗糖、奶粉和经蛋白酶水解后的玉米胚芽液，通过乳酸菌发酵可生产新型酸奶，下列相关叙述错误的是()A．蔗糖消耗量与乳酸生成量呈正相关B．酸奶出现明显气泡说明有杂菌污染C．应选择处于生长旺盛的乳酸菌接种D．只有奶粉为乳酸发酵提供氮源【答案】D【解析】试题分析：蔗糖作为乳酸菌的碳源被乳酸菌利用产生乳酸，蔗糖消耗量多，乳酸生成量多，A正确；乳酸菌是厌氧菌，呼吸的产物是乳酸，不产生二氧化碳，若酸奶出现气泡，说明有需氧菌存在，B正确；对数期的菌快速分裂，代谢旺盛，菌体形态和生理稳定，常用作生产用菌种和科研材料，C正确；经蛋白酶水解后的玉米胚芽液也可以为乳酸菌提供氮源，D错误。考点：本题主要考查乳酸发酵的相关知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间的内在联系的能力。17．下列有关发酵项目的内容全部正确的是发酵项目微生物名称微生物结构特点微生物异化作用类型A果酒酵母菌有核膜兼性厌氧B果醋醋酸菌无核膜厌氧C腐乳青霉有核膜需氧D泡菜乳酸菌无核膜厌氧【答案】AD【解析】试题分析：酵母菌发酵形成果酒，属于真核细胞，具有核膜包围的细胞核，代谢类型是异养兼性厌氧型；A正确。醋酸菌发酵形成果醋，属于原核细胞，没有核膜包围的细胞核，代谢类型是异养需氧型；B错误。腐乳制备需要毛霉，属于真核细胞，代谢类型是异养需氧型；C错误。泡菜制备乳酸菌，属于原核细胞，代谢类型是异养厌氧型；D正确。考点：果酒、果醋、腐乳和泡菜制备的菌种。点评：本题比较简单，意在考查学生的识记和理解能力。18．以下化学物质或者微生物的检测方法对应错误的是（）A．酒精--溴麝香草酚蓝水溶液B．大肠杆菌--伊红美蓝C．尿素分解菌--酚红指示剂D．纤维素分解菌--刚果红【答案】A【解析】试题分析：A．酒精需要用酸性的重铬酸钾检测；溴麝香草酚蓝水溶液用于检测二氧化碳，A错误；B．当大肠杆菌分解乳糖产酸时，细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽，B正确；C．尿素分解菌可以利用脲酶将尿素分解成二氧化碳和氨，氨会使含酚红指示剂的培养基呈现红色，C正确；D．刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但与纤维二糖和葡萄糖没有这种反应。故可以用刚果红培养基将纤维素分解菌鉴别出来，D正确。考点：探究酵母菌的呼吸方式；培养基对微生物的选择利用二、非选择题19．）【生物——生物技术实践】2007年，我国利用秸秆生产车用燃料乙醇的关键技术获得了重大突破，目前已顺利进入工业化实验阶段。实验显示，每4吨秸秆（玉米、麦草秸秆等）可生产1吨燃料乙醇。秸秆的主要成分是纤维素，通过自主创新，我国已经掌握了纤维素的水解技术。请回答：（1）利用玉米秸秆生产乙醇首先选用_______________酶处理秸秆，使之转化为发酵所需的_________等物质，然后进行发酵，获得乙醇。（2）在培养分离纤维素分解菌的过程中，接种微生物可以采用平板划线法和____________________法。进行平板划线时，在划线结束后仍然要灼烧接种环，原因是__________________________________________________。（3）在筛选纤维素分解菌的过程中，通常采用____________染色法，这种方法能够通过颜色反应直接对纤维素分解菌进行筛选。从物理状态看，培养基应使用____________培养基。（4）在酒精发酵过程中，在不同时间内对发酵液样品进行检测，发现发酵液的pH一直下降，原因是_______________________________________________________________。（5）为了提高乙醇的品质和降低生产成本，研究人员提出可以使用固定化酵母细胞。制备固定化酵母细胞多采用_______________法。【答案】（1）纤维素葡萄糖（2）稀释涂布平板法及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境或感染实验操作者（3）刚果红固体（４）酵母菌在进行发酵过程中产生CO2溶于发酵液中，使pＨ下降。（5）包埋【解析】20．回答下列有关微生物的问题下表为一种培养液的配方，试根据表中内容作答。成分含量(NH4)HCO30.5gKH2PO43.0gCaSO40.5gFeCl20.5g维生素少许H2O1000ml(1)若用于培养微生物，该培养液中有_______类营养物质。(2)若用来培养固氮微生物则应除去的成分是_______，应加入的物质是__________。若用来培养金黄色葡萄球菌并观察其菌落的形态，还应加入___________。(3)用来鉴定饮水中的大肠杆菌是否超标，除已加入的物质外，还应加入_______________。如呈现__________________现象，则有大肠杆菌。(4)在分离分解尿素细菌的实验时，大部分同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而有一个同学从培养基上筛选出大约150个菌落，这种实验结果差异产生的原因可能有___________（填序号）。①由于土样不同②由于培养基污染③由于操作失误④没有设置对照【答案】五（NH4）HCO3有机物（有机碳源）琼脂伊红、美蓝金属光泽紫黑色①②③【解析】试题分析：本题考查微生物培养，考查对培养基成分、种类和功能的识记、理解。(1)若用于培养微生物，该培养液中有水分、无机盐、碳源、氮源、生长因子5类营养物质。(2)固氮微生物的同化方式为自养型，该培养基用来培养固氮微生物则应除去氮源（NH4）HCO3，应加入有机物（有机碳源）。观察其菌落的形态应使用固体培养基，培养基中应加入琼脂。(3)鉴定饮水中的大肠杆菌是否超标，除32题已加入的物质外，还应加入伊红、美蓝。大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有金属光泽。（4）培养基中菌落数异常可能是由于土样不同，或由于培养基污染，或由于操作方法不对。21．孔雀石绿(C23H25N2Cl)常用作纺织业的染料，也可用作水产养殖业的杀菌驱虫剂。但它具有高毒性、高残留的危害，因此对孔雀石绿废水的处理已成为环境科学领域关注的热点。科研人员从某化工厂污水池中分离获得了能降解孔雀石绿的细菌菌株A。主要步骤如图7－15－3所示。图7－15－3请分析并回答：(1)从①到③的培养过程中，培养液应加入________作为唯一碳源，此过程的目的是________________________和________________________。(2)使用____________法可以在④上获得单个菌落。实验中使用的培养基可以用________灭菌法进行灭菌。(3)从某化工厂污水池中分离获得了能降解孔雀石绿的细菌菌株A，从生物进化的角度分析，这是________的结果。菌株A在生态系统成分中属于________。(4)研究人员进一步研究了不同金属离子对菌株A降解孔雀石绿的影响，实验结果如图7－15－4所示。由上述结果可以看出，与不加金属离子的对照组相比，多数金属离子对菌株A降解孔雀石绿有________作用，唯有Pb2＋的作用相反。若要排除Pb2＋本身对孔雀石绿有降解作用，则应设置__________________________的培养基样本作为对照。图7－15－4【答案】(1)孔雀石绿筛选出菌株A增加菌株A的浓度(扩大培养)(2)稀释涂布平板(或平板划线)高压蒸汽(3)自然选择分解者(4)抑制含等量的Pb2＋但不接种菌株A【解析】(1)因孔雀石绿可用作水产养殖业的杀菌驱虫剂，又因其高效性和高残留需要培育出能降解孔雀石绿的细菌菌株A，因此，在培养基中应加入孔雀石绿以便筛选出菌株A，通过扩大培养获得更多的菌株A。(2)稀释涂布平板可使微生物在固体培养基上形成单个菌落，优点是可以计数，可以观察菌落特征，同时也可以用平板划线法分离，其优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。但无论是哪种方法，都要对培养基进行高压蒸汽灭菌。(3)自然选择决定了生物进化的方向，能降解孔雀石绿的细菌菌株A在生态系统中是非常重要的成分——分解者。(4)为了排除无关条件的干扰，通常设置对照组，以消除或减少实验误差。22．炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病，炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状，对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的宿主专一性，通过实验确诊。细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落。细菌鉴定：实验流程如图所示（1）挑选可疑菌落制片后，用______观察，可看到呈竹节状排列的杆菌。（2）对配制的液体培养基等需采取______灭菌；实验所用液体培养基的碳源为______（填“无机碳”或“有机碳”）。（3）接种可疑菌后，35℃培养24h，液体培养基变浑浊，原因是______，对照组试管中应加入______，与实验组同时培养6h后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组______（填“高”或“低”），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。（4）对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体．与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外，还有______和______。【答案】显微镜高压蒸汽有机碳细菌大量繁殖等量生理盐水低吞噬细胞效应B细胞【解析】试题分析：微生物细胞经制片后，需要用显微镜进行观察；培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌；实验过程中要遵循等量原则、单一变量原则、对照原则和控制无关变量原则。参与体液免疫的淋巴细胞主要有T细胞、B细胞、吞噬细胞和浆细胞。（1）挑选可疑菌落制片后要看到细菌，要用显微镜。（2）培养基的灭菌一般采用高压蒸汽灭菌．炭疽杆菌为异养型，因此碳源为有机碳。（3）液体培养基变混浊，是细菌大量繁殖后造成，实验组是生理盐水配制的澄清噬菌体液，因此对照组应为等量的生理盐水。（4）若患者被炭疽杆菌感染，则可被其专一的噬菌体侵染色导致炭疽杆菌大量死亡而使液体变清．吞噬细胞与抗原识别呈递有关，抗体由效应B细胞产生。【点睛】根据题干提供的信息，准确提取信息是解题的关键。23．放线菌是重要的抗生素产生菌，在有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。要研究某种放线菌，必须首先从混杂的微生物群体中将它们分离出来。抗生素滥用情况严重，且以往的抗生素已经不能有效地治疗人类的疾病，所以，继续寻找和筛选产生新型抗菌物质的放线菌有着重要意义。放线菌产生的抗生素抑菌效果可通过抑菌实验来获得。如图一所示为分离和鉴定实验用到的部分仪器。请结合图示分析回答下列问题：（1）分离放线菌时所用的培养基除了含有微生物生长所必需的营养要素外，还要加入10%的酚，该药品的作用是使细菌、霉菌得以淘汰，可以判断，该培养基属于_________培养基。（2）分离采用的方法为________，②可用于__________操作，通过该操作才可在平板上得到单菌落。（3）举出③在分离时的两个用途____________、_______________。（4）放线菌的抑菌效果鉴定时，先将分离后经活化的放线菌接种到发酵培养液中，37℃培养3天，将培养液离心，应取离心后的______________进行下一步实验。图二中A、B、C分别为涂布有金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌悬液的三个平板，图中各放置了六只牛津杯（图一中④），每个平板右侧三个杯为对照。上述制得的上清液放置的位置为____________，图中抑菌效果最好的是__________组。【答案】选择稀释涂布平板法稀释对涂布器灭菌形成无菌区上清液牛津杯内C【解析】试题分析：分离纯化微生物的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法，由于该分离实验中用到了涂布器和移液管，所以推测所采用的分离接种方法是稀释涂布平板法。在鉴定放线菌产生的抗生素的效果的实验中，需要先在发酵液中培养分离活化的放线菌，通过离心，得到主要分布在上清液中抗生素进行分组对照鉴定实验，其中形成的抑菌圈最大的效果最佳。（1）根据题意，在培养基中加入酚，以淘汰细菌、霉菌，其目的在于筛选所需的放线菌，这类培养基称为选择培养基。（2）根据实验所采用实验仪器：第一种为涂布器，它是用于稀释涂布平板法的工具。所以该微生物实验分离采用的方法为稀释涂布平板法，②为定量移液管，可用于稀释操作，通过该操作才可在平板上得到单菌落。（3）③为酒精灯，在分离时要用于对涂布器灭菌和接种操作时形成一个无菌区，以减少被被杂菌污染的机会。（4）由于在发酵液中培养的放线菌会分泌产生抗生素，而抗生素在发酵液中经离心后主要分布在上清液中，所以在鉴定放线菌产生的抗生素效果的实验中，应取离心后的上清液进行鉴定实验。结合图示二和题意分析，鉴定实验分三组进行，每组有6个牛津杯内分别盛装离心得到的上清液，其中各有3个实验组，3个对照组；对比结果可知，其中C组中有3个实验组得到的抑菌圈（图示中白色区域）最大，说明该组的抑菌效果最佳。【点睛】解决本题有两个关键点：一是根据接种工具推断所采用分离接种微生物的方法；二是根据实验目的和实验结果结合推断鉴定实验的大致操作过程，从而理顺鉴定抗生素效果的实验原理。24．金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，回答相关问题。（1）按细胞结构分类，金黄色葡萄球菌属于__________生物；（2）操作中在血平板上的接种方法是________________，接种操作前后需要对接种工具进行灭菌。（3）经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现______________的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带，因此，要对本操作进行完善，完善的方案是______________。【答案】原核平板划线法周围存在透明圈设置不加鲜牛奶其他操作均相同的对照组【解析】试题分析：根据微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板、接种、划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面,经培养后可形成单个菌落。从而确定图示操作为平板划线法接种。(1)金黄色葡萄球菌是一种细菌，属于原核生物。(2)使用接种环进行接种的方法是平板划线法。(3)根据题意，“金黄色葡萄球菌在血平板(培养基中添加适量血液)上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色”，所以如果经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现透明圈的菌落，说明初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌；但这个实验要这是对照实验，对照实验的设计是在培养基中不加鲜牛奶其他操作均相同的对照组。【点睛】注意：带“菌”字的生物中，“菌”字前有“杆”、“球”、“弧”、“螺旋”等表示形态的字的都是细菌，如大肠杆菌、肺炎双球菌、葡萄球菌、霍乱弧菌等都是细菌。25．[生物—选修1：生物技术实践]（15分）请回答下列有关问题：（1）微生物培养中的无菌技术主要包括。（2）如图为倒平板操作过程，操作时要待培养基时，在附近进行。制备固体培养基时，要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要目的是。（3）生产中通常用葡萄作原材料制作果汁、果酒及果醋。①果醋的制作需要醋酸菌。醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。当氧气充足、缺少糖源时醋酸菌将乙醇变为__________，再进一步转变为。②果胶酶能够提高葡萄的出汁率并使浑浊的果汁变得澄清，其原因是。③从发酵条件看，果酒和果醋的制作过程的不同之处主要是。【答案】（15分，除注明外每空2分）（1）消毒和灭菌（1分）（2）冷却至50℃（3）①乙醛醋酸②果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层③果酒制作需无氧条件，果醋制作需要充足的氧气【解析】试题分析：（1）微生物的培养技术主要包括消毒和灭菌。（2）倒平板时要待培养基冷却至50℃左右（3）醋酸菌在氧气充足糖原不充足的时候可以将乙醇变为乙醛，进而再转变成醋酸。果胶酶能将细胞壁的中的果胶，瓦解了植物的细胞壁及胞间层，从而使果汁变得澄清。果酒制作利用的是酵母菌的无氧呼吸，需要密封发酵，而果醋制作利用的是醋酸菌的有氧呼吸需要提供充足的氧气。考点：本题考查微生物的培养和果酒、果醋的制作相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。26．某研究小组从牛的瘤胃中采集样本，进行分解尿素的微生物的分离与计数。实验基本步骤如下：（1）分解尿素的微生物含有_______________，因此，配制培养基时以尿素作为唯一氮源，尿素会被分解成_________使培养基的碱性增强。（2）配制培养基时，需添加琼脂，琼脂起________________作用；培养基中添加___________作为指示剂，可使目标菌落的周围产生红色环带。（3）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是___________灭菌。A.高压蒸汽B.干热C.添加抗生素D.过滤E.紫外线照射F.70﹪酒精浸泡（4）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________；然后将1mL瘤胃样液稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板的菌落数分别为49、47和45。据此可得出每升瘤胃样液中分解尿素的微生物活菌数为__________，理论上，统计的菌落数往往_____（低、等、高）于接种的实际活菌数目。【答案】脲酶（分解尿素的酶）氨（NH3）凝固剂酚红D检测培养基平板灭菌是否合格4.7×108低【解析】（1）分解尿素的微生物含有分解尿素的酶，将尿素分解成氨，所以分离能分解尿素的细菌时，要以尿素作为选择培养基的唯一氮源。（2）在配置微生物培养的固体培养基时需要加入琼脂作为凝固剂；培养基中添加酚红作为指示剂，可使目标菌落的周围产生红色环带。（3）由于尿素在高温下会分解，所以对尿素溶液的灭菌要采用G6玻璃漏斗过滤的方法。（4）微生物培养过程应该进行无菌操作，配制的培养基要进行高压蒸汽灭菌，可以将灭菌后的空白平板进行培养以检测培养基灭菌是否彻底；由题意知1ml瘤胃样液中的菌落数是（49+47+45）÷3÷0.1×1000=4.7×105个，所以每升瘤胃样液中的活菌数为4.7×105×103=4.7×108。有些活菌在培养过程中死亡,另外有些菌落是有多个活菌共同形成的,所以按形成的菌落数目来计算活菌数目的话,结果往往会少于活菌实际数目。【点睛】本题是对微生物实验室培养过程中对实验用品进行灭菌常用的方法及检测培养基灭菌是否彻底的方法、估算样品中菌株数的方法、微生物常用的接种方法和具体操作步骤的综合性考查，回忆微生物实验室培养过程中对实验用品进行灭菌常用的方法及检测培养基灭菌是否彻底的方法、估算样品中菌株数的方法、微生物常用的接种方法和具体操作步骤，然后解答问题。27．国家饮用水标准规定，每升饮用水中大肠杆菌不超过3个。某小组欲通过实验来检测自来水中大肠杆菌的含量，已知大肠杆菌在伊红-美蓝培养基培养，大肠杆菌菌落呈深紫色。请根据下列有关实验步骤回答问题：(1)配制培养基：配制伊红-美蓝培养基时，除蛋白胨、乳糖、伊红、美蓝等原料外，还需要水、无机盐和。在这些成分中，能为大肠杆菌提供氮源的是。搅拌加热至完全溶解后调节，