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文档简介

亳菊组培快繁与脱毒技术规程1范围本标准规定了亳菊(Dendranthemamorifolium(Ramat.)Tzvel.‘Boju’cv.nov.)组培育苗中的普通术语、组培育苗过程中外植体材料的选择、消毒灭菌、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽及苗床管理。本标准适用于亳菊在全国范围内的工厂化组织培养育苗生产。2规范性引用文件下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。NY/T2306-2013花卉种苗组培快繁技术规程GB3095环境质量标准《中华人民共和国药典》(一部)2020版3普通术语下列术语和定义适用于本标准。3.1植物组培planttissueculture将从植物体分离出的符合需要的组织、器官或细胞及原生质体等材料,通过无菌操作接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株的技术。3.2接种inoculation将消毒后的外植体或干净培养材料在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。3.3消毒disinfection通过物理、化学方法去除物体表面大部分有害病原微生物(孢子除外)的过程。3.4灭菌sterilization通过物理、化学及一些理化方法杀灭一切微生物(包括孢子等)的过程。3.5外植体explant从自然生长的活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的起始材料。3.6初代培养primaryculture指直接从机体取下的细胞、组织和器官等材料的培养。3.7继代培养subculture将培养材料从原来的培养基中转接入新鲜培养基中继续培养的过程。3.8生根培养rootingculture将继代增殖后的无根芽苗转接至生根培养基上进行诱导生根得到完整植株的过程。3.9组培工厂planttissuecultureproductionlaboratory利用植物组织培养技术大规模生产植物组培苗的工厂。3.10炼苗acclimatization

炼苗是在温室中采取放风、降温、适当控水等措施对幼苗强行锻炼的过程。4组培4.1外植体材料选择将新鲜采挖、大小适宜的亳菊嫩茎作为外植体材料。4.2消毒灭菌先在流水下冲洗30分钟,然后移至超净工作台。将嫩茎置于无菌瓶中,倒入适量75%乙醇,使嫩茎浸泡并震荡无菌瓶消毒30s,迅速倒出酒精,用适量无菌水冲洗两次,然后用0.1%升汞浸泡消毒约8min,期间不断震荡,倒出升汞后用无菌水冲洗嫩茎四到五次,静置晾干待用。4.3初代培养取消毒处理后的亳菊嫩茎1mm左右的茎尖及1.5-2cm带有1-2个叶片的茎段;以每瓶1株分别接种至初代培养基(MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7.5g/L)上进行初代培养,然后在温度25±2℃,光照16h/天,光照强度1500~2000lx的培养室中培养,25d左右可进行转接。4.4继代培养将经过初代诱导培养获得的组培苗切成1.5-2cm带有2-3个叶片的茎段,以每瓶6株接种至增殖壮苗培养基(MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7.5g/L)上进行继代培养,然后在温度25±2℃,光照16h/天,光照强度2200~4000lx的培养室中培养,25d左右可进行转接。4.5生根培养将增殖壮苗培养获得的高度约为7-8cm的亳菊丛芽分离成单株,并切成3-4cm带有3-4个叶片的茎段,以每瓶6株接种至生根培养基(1/2MS+IBA0.03mg/L+NAA0.01mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L+活性炭3g/L)上进行生根培养,然后在温度25±2℃,光照16h/天,光照强度2200~4000lx的培养室中培养,25-30d即可出瓶。4.6病毒检测对即将炼苗的植株进行病毒检测。采用PCR法对亳菊组培苗中的TAV、CMV、CVB、CSVD等病毒进行检测。5炼苗5.1生根苗移栽标准在组培瓶中生长的根、茎、叶俱全的完整植株,苗高3.5-5.5cm,基部长出不定根时,即可进行炼苗。5.2炼苗方法将生长健壮、叶色正绿平展、根长2-4cm、高4-6cm的亳菊生根苗在温室内进行强光闭瓶炼苗,驯化3-5d后进行温室炼苗。6移栽6.1栽培基质及准备在保证组培穴盘苗正常生长的前提下,可因地制宜选择基质种类。基质开袋倒槽,装入穴盘中并稍压紧待用。6.2洗苗将水池用75%酒精喷洒消毒5min,随后用自来水冲洗干净。蓄水池内加入适量的水,轻轻取出驯化后的组培苗,用水洗净根部附着的培养基且尽量防止伤苗,对洗净后的亳菊苗进行75%酒精喷洒消毒,放置1-2min后清水冲净。6.3移栽将穴盘基质挖出深2-4cm,直径3cm的槽,然后把清洗处理后的苗移栽到槽中,填土轻轻按平。6.4消毒配置2000倍枯草芽孢杆菌和1000倍矿源黄腐酸钾用喷雾机进行喷洒,使其充分浇匀浇透。6.5摆放穴盘苗分移栽日期,在苗床上整齐摆放。7苗床管理7.1遮阳移栽后用遮阳网遮阳,炼苗后遮阳时间不少于7天,然后遮阳率调为75%左右最适宜亳菊苗健康生长。7.2水肥管理据天气情况与季节特性及时浇水,保持土壤含水

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