常规冰冻制片常见问题分析湘雅医院病理科付春燕

常规及冰冻切片制片中常见的

问题分析及解决方法中南大学湘雅医院病理科傅春燕常规、冰冻制片常见问题及对策冰晶的问题----冰冻切片制片时如何减少冰晶染色的问题----怎样使切片染色更漂亮标本切开与固定----如何做好标本的切开与固定一、冰冻切片制片中冰晶的问题

冰晶的产生：当组织缓慢冷冻时，组织间隙的水份凝固形成的，这时由于电解质析出，渗透压升高，细胞内的水分子渗透到细胞外，使组织间隙的冰晶变得更大，挤压周围组织，使组织细胞的形态发生明显的改变，严重影响病理诊断。

所以良好的冰冻切片制作取决于标本的冷冻速度，要想组织在冷冻过程中不产生或者少产生冰晶，就必须

使组织快速冷冻，而且冷冻得越快越好。

如何使组织快速冷冻如何减少冰晶

1、标本送检的要求

临床医师取组织后尽量避开水源，不能水洗，不能加放固定液，送检标本时不要用生理盐水浸泡，不要用湿纱布包裹组织，由于液体浸泡后，组织内水分增加，冷冻后组织内冰晶就会增多。

2、

取材不能太大、太厚

组织块的大小、厚薄决定了冷冻的速度，太大、太厚的组织由于冷冻时间长，难免有冰晶的产生。所以，取材组织块小于1.5*1.5*0.3cm。取材3mm厚

取材4mm厚3、使用吸水纸

可以吸干组织表面的水分4、样本托和打底胶预冷打底胶预冷胶未预冷补胶要少动作要快

补加胶的时候，动作要快，而且不能补加太多的胶，因为胶的量越多冻得越慢，（可以是周围加胶，也有两头加的）放标本动作要快特别是一个样本托要放几块组织时，动作要快

5、使用

速冻台和冷冻锤加快组织的冷冻

每台冰冻切片机都有一个速冻台，好的冰冻切片机可以在几分钟内将速冻台的温度下降至-50℃～-60℃度之间。冷冻锤从上面压在组织上，可以使组织上下两面同时冷冻一台冰冻切片机有多个冷冻锤6、液氮和急冻剂

使用液氮和急冻剂来快速冷冻组织7、专用冷冻机

使用专用冷冻机可以使组织标本在1分钟之内冷冻好总结：减少冰晶的措施1、组织不能水洗，组织取材要小、薄（在能满足诊断的基础上尽量小、薄）并用吸水纸吸干组织表面的水份2、样本托、打底胶要预冷、补胶量要少，（在保证切片完整）3、放多块组织和补加胶时动作要快4、充分利用速冻装置如：冷冻台、冷冻锤、来加快组织的冷冻5、购置专用冷冻机、急冻剂、专用液氮灌

二、常规与冰冻制片中常见问题

切片染色的问题脱蜡试剂的问题怎样使切片染色更漂亮1、正确选择染色试剂苏木素、伊红的配方2、注意染色过程中的细节问题1、苏木素、伊红配方的选择（1）改良Gill苏木素液：苏木2.5克溶于乙二醇250ml中。硫酸铝铵17.6克溶于蒸馏水730ml,以上二液充分溶调后混合，加碘酸钠0.2克，使用前加冰醋酸20ml.（2）酸化沉淀伊红液贮备液：伊红20克，蒸馏水500ml,经充分溶解后加浓盐酸10ml，用玻棒不断搅拌，过夜析出沉淀，弃去上清液，用蒸馏水反复洗沉淀三次，用滤纸过滤，弃去滤液，沉淀与滤纸一同放入烤箱，干燥后，用95%乙醇1000ml配成饱和液，即贮备液。工作液：取贮备液1份与95%乙醇2--3份，混合

2、注意染色的细节脱蜡彻底（热片和震动）染色前用滤纸刮去苏木素液表面的氧化膜苏木素染色（过染）、分化，蓝化、镜下观察，流水冲洗10分钟以上分化液为0.5%盐酸酒精伊红过染时，可用70%酒精洗至理想颜色染色时要注意试剂的量是否足够手工染色时，为了保证各缸试剂的浓度，尽量不要把前一缸的试剂带入后一缸内使用新鲜的试剂，定期更换染色试剂染色试剂的更换除了二甲苯换掉第一缸，后面的二甲苯往前移外，其他的试剂都换新的。废液倒掉后，试剂瓶要清洗干净并且擦干。更换试剂后要预先试染一批切片。更换试剂时要注意不要弄错试剂摆放的顺序。由于天气的原因，试剂容易挥发，要及时添加或更换。细节决定成败在常规和冰冻切片制片过程中，切片染色也是比较重要的一个环节，如果这个环节没做好，也一样地影响病理诊