动物繁殖学课件

氯前列烯醇在动物繁殖中的应用

前列腺素的发现鲜精滴在离体子宫上的试验促进子宫自发性收缩——前列腺素命名切除子宫试验溶黄体素的命名氯前列烯醇是PGF2α的类似物，在目前常用的PGF2α及其类似物中，其活性最高

PGF2α

的功能促进卵巢上黄体的退化抑制孕酮的合成，促进孕酮的降解促进子宫及平滑肌的自发性收缩促进催产素的分泌

氯前列烯醇的应用牛的同期发情每头牛宫注0.3mg，48-72h同期发情率70%对有功能黄体的母牛宫注0.4mg，发情母牛可达95%，38—62小时范围内发情母牛为88.3％

与孕酮结合同期发情率也较高肌肉注射用量比宫注大一倍受胎率与自然发情相同羊的同期发情

直接使用国产氯前列烯醇0.2mg／只对513只新疆细毛羊母羊发情同期化处理。1—5d内同期发情率为92.01％。配种后25d不返情率为86.44％。实际产羔率80.91％。孕酮+PG用氯前列烯醇80ug/只肌肉注射放孕酮栓12天的受体奶山羊，24小时后取栓，取栓后12-36小时内的同期发情率可达92.3%左右，只采用孕酮栓的母羊同期发情率为83.2%。二次PG间隔11天二次注射氯前列烯醇，可将母羊的同期发情率提高到90%以上。受胎率与自然发情接近猪的同期发情单纯用氯前列烯醇性成熟母猪的同期发情率不足40%对后备母猪可在正常初情期前20-40天用促性腺激素P.G.600肌注。一般在注射3～6d后母猪表现发情。第一次激素处理尽管能使绝大多数青年母猪在一定时间内发情，即使不表现发情，一般也会有排卵和黄体形成。但发情时间相差天数可达3～4d。要提高第二个发情期的同期发情率，应在第一次注射促性腺激素后18d注射氯前列烯醇200～300微克，因为此时大多数母猪已经进入发情周期的12d以上，这时，前列腺素对黄体有溶解作用。通常在注射氯前列烯醇后3d母猪表现发情，而且发情时间趋于一致。对经产母猪或性成熟的后备母猪进行同期发情处理就不太容易，因为促性腺激素对有黄体的母猪没有作用。但可以考虑对发情母猪进行单圈配种2周，2周后对全群注射氯前列烯醇。这样在注射激素后，妊娠母猪会流产，因为此时母猪怀孕时间不长，所以很快就会发情。配种未受孕而且发情周期超过12d的母猪都会因黄体退化而同时发情。氯前列烯醇诱导分娩的原理氯前列烯醇进行诱导分娩的原理是其溶黄体、促进黄体酮降解作用，从而降低黄体酮水平；同时能特异地兴奋妊娠子宫，舒张宫体肌肉，促进子宫平滑肌收缩，促进催产素的分泌，而使孕畜流产（妊娠早中期）或分娩（围产期）。对接近预产期的母畜进行诱导分娩，可以较为准确地控制母畜的分娩时间，以确保母畜在有人值守的情况下分娩，从而提高产活仔率，降低难产率。氯前列烯醇在猪场的应用诱导同期分娩，对111-113天的母猪注射氯前列烯醇0.1-0.15mg，可使母猪在注射后24±6小时内分娩。治疗超期怀孕治疗胎衣不下或排出死胎产后注射：预防母猪子宫炎治疗母猪卵巢囊肿羊的人工授精技术

人工授精的意义提高优秀种公羊的配种效能防止传染病避免公母羊体重悬殊造成的配种困难能够有效地进行同期发情集中配种加速品种改良本交与人工授精比较项目人工授精本交一次射精配种母羊数30-501公母比1:10001:40受胎率(估计)%鲜精75、冻精30-4080左右如何在羊场开展人工授精配备人工授精设备人工授精人员培训选好种公羊建立一个人工授精实验室羊人工授精设备清单（一）采精用品1、假阴道部件：假阴道外壳、内胎（每个外壳三条）、集精杯（每个外壳备用两个）、橡胶塞、医用气伐、固定皮圈、保护套2、安装假阴道用品：瓷盘、温度计、石蜡油（或凡士林）、毛巾、75%乙醇棉球、漏斗、玻璃棒、镊子3、羊采精架（二）稀释液配制用品1、主要用品：三角锥瓶（250毫升、4个）、定性滤纸、玻璃漏斗、玻璃棒、量筒（100毫升）、试管架、漏斗架、精液稀释粉（100毫升）2、辅助用品：电炉（500瓦）、注射器（一次性、10毫升）、蒸馏水（500毫升，3瓶）、洗瓶（1个）、石棉网、消毒柜（五）输精用品输精器（10只）、胶头（10个）、酒精棉球、开膣器或羊用内窥镜、输精架或采精架（四）精液品质检查用品显微镜（100-400倍）、显微镜保温板、载玻片、盖玻片、0.5%龙胆紫、计数板、吸管或微量移液器（五）输精用品输精器（10只）、胶头或一次性注射器（10个）、高锰酸钾、开膣器或羊用内窥镜、输精架或采精架、纸巾羊的人工授精操作技术（一）稀释液配用品的清洗与消毒：所有玻璃用品应用洗涤剂洗净后，用清水反复冲洗，避免有洗涤剂残留。用蒸馏水冲洗三次后，涳干水分后，放入消毒柜中干燥。自然放凉后使用。1、基础液配制：（1）先将稀释粉（100毫升用）三角锥瓶中，加入100毫升水中，用玻璃棒搅拌，充分溶解（2）将定性滤纸对折两次，折成锥形，放入漏斗中，并将其放置在三角锥瓶上，将溶解后的稀释液沿玻璃棒倒入漏斗中过滤（3）将石棉网放在电炉上，然后将锥形瓶放在石棉网上，将稀释液加热至沸腾，立即取下（4）稀释液放冷后，加入双抗（青霉素、链霉素），充分溶解，并静置20分钟以上2、稀释液配制：（1）用吸管从中层吸取基础液，冲洗刻度试管并弃去，重复三次。之后从中层取基础液加入刻度试管至8毫升处。（2）将新鲜鸡蛋擦干净，用75%的酒精消毒表面，待干燥后，打开鸡蛋分离出蛋清，将卵黄置于消毒纸巾上，倾斜纸巾使其滚动，将卵黄表面的蛋清吸干，用吸管轻轻挑破卵黄膜，吸取卵黄液加入刻度试管中，使总液体容量为10毫升。用吸管反复吸吐使卵黄液与基础液混匀，贴上标签备用。3、剩余的基础液贴上标签备用：用于冲洗假阴道和输精器械（二）安装假阴道：1、将假阴道各部件充分洗涤干净，用蒸馏水冲洗后，放在有余热的消毒柜中干燥，内胎应用夹子夹好县挂在消毒柜内，安装前将瓷盘用酒精消毒。逐件检查各部件是否有破损、漏水、针眼。2、将内胎光面向里，向外翻到外壳上，并使其周正3、用医用75%乙醇棉球消毒内胎内壁、翻边及集精杯4、待乙醇干燥后，将集精杯安装在假阴道上，用纱布套和固定皮圈固定5、在内胎与夹壁间注入50-55℃热水，约占其体积1/2，并左右平行摇动6、用基础液冲洗内胎内壁及集精杯7、用消毒的玻璃棒醮取少量凡士林或石蜡油，从外口向内均匀涂布，涂布深度为假阴道长度的1/28、加塞、气伐，充气至压力适当（假阴道外口的内胎呈Y型，温度插入时感到有一定阻力）9、用温度计测量假阴道内的温度2分钟。合适的温度为38-40℃，如不合适，再注入适当温度的热水10、用毛巾将安装好的假阴道包好，以使保温备用（三）采精1、安装好假阴道并使其内部温度适当2、将发情旺盛的母羊保定在采精架内3、一切准备就绪后，再将公羊赶至采精场并避免公羊靠近母羊，等待约1分钟左右4、采精员手持假阴道蹲在右侧一旁5、当公羊跳爬母羊臀部后，立即用左手掌扶住包皮导引公羊阴茎，右手将假阴道固定在母羊臀部右侧，使公羊阴茎伸入假阴道内，公羊向上一冲，说明已经射精。待公羊跳下，立即放掉假阴道内空气，并垂直放置。6、取出集精杯，使假阴道内的精液全部进入集精杯中（四）精液稀释1、用吸管将精液移入用基础液冲洗过的刻度试管中，与放稀释液的刻度试管一起放在500毫升33℃水浴中（500毫升烧杯）预温5分钟2、计算稀释后精液容量：一般稀释比例为1:3，如0.7毫升的原精液稀释后体积为0.7×4=2.8毫升3、用吸管将稀释液沿试管壁，缓慢加入精液中，轻轻摇动混匀后，加塞密封（五）精液保存1、将盛放稀释后精液的刻度试管放在500毫升33℃的水浴中，然后再放入2-5℃冰箱中，约40分钟降温至2-5℃后。继续在冰箱中的水浴中保存直到使用。精液保存时间可达72小时。在使用中，保存时间超过24小时，应对精子活力进行检查，以便确定精液处理过程是否有问题和精液能否继续使用2、如果供电不正常或冰箱控温不可靠，可将装稀释过的精液的试管用4层纱布包裹，装入自制的小塑料袋中，然后放入加有碎冰块的广口保温杯中保存。经常检查保温杯中的冰块，及时将溶化的冰水倒掉，添加新的冰块。母羊的发情鉴定——判断母羊的最佳配种时机母羊的生殖生理项目绵羊山羊初情期（月）6-84-7性成熟（月）8-106-8初配年龄10-168-10发情周期(天)16-1720-21发情期(小时)24-3640排卵时间发情结束时发情结束时发情季节秋春秋妊娠期（天）150150产羔数因品种不同因品种不同产后发情下一个发情季节分娩后35天（六）输精1、每天用试情公羊检查母羊群两次，上下午各一次，公羊用试情布兜住腹部，避免发生自然交配2、如果母羊接受公羊跳爬，证明已经发情，应在发现发情后6-12小时内第一次配种，12-18小时后第二次配种。经产羊应于发现发情后6-12小时第一次配种，间隔12-16小时后第二次配种。初配羊应于发现发情后12小时第一次配种，间隔12小时第二次配种。3、将母羊保定在采精架或专用保定架内，外阴部及肛门用0.3%的高锰酸钾冲洗后，用灭菌纸巾擦干4、将开膣器或内窥镜内外用酒精擦拭；用酒精消毒输精器外部，并用稀释液冲洗内管备用5、待酒精完全挥发后，在内窥镜或开膣器外部涂上石蜡油；用输精器吸取稀释后的精液0.05-0.15毫升6、由两位助手抓住母羊后腿，使其离地。操作人员左手分开母羊阴门，将内窥镜插入至阴道底部，打开光源；右手持输精器，找到子宫颈管外口（子宫外口颜色较暗），将输精器前端伸入子宫颈管内1-2厘米，将精液输入，记录输精情况羊的输精山羊冷冻精液技术山羊冷冻精液的意义精液保存时间可达几十年最大限度利用种公羊，有利于以较低的成本对本地山羊进行杂交改良有足够的时间进行后裔鉴定种公羊的产值更高山羊冷冻精液稀释液配方

葡-乳-柠-甘液葡-乳-甘液果-乳-甘液解冻液葡萄糖3.002.00-3.00果糖--1.50-乳糖3.189.0010.50-柠檬酸钠2.00--1.4双蒸水100100100100青链霉素各10万单位各10万单位各10万单位各10万单位毫摩尔浓度526361375356第一液基础液808080卵黄202020第二液第一液454545甘油555稀释液配制用品清单序号用品名用量序号用品名用量1250ml烧杯4个13硫酸纸10cm10张2250ml三角瓶4个14天平(感量0.01g)1台3500ml输液瓶5个15电炉及石棉网1套4100或250ml量筒2个16纯水2000毫升5胶头滴管5支17葡萄糖1瓶6玻璃棒(30cm)4支18柠檬酸钠1瓶7玻璃漏斗4个19果糖1瓶8刻度试管10支20乳糖1瓶95ml一次性注射器10支21甘油1瓶10试管架1个22青链霉素各1瓶11温度计2支23标签纸1张(30份)12定性滤纸1盒24圆珠笔1支采精及精液品质检查用品清单序号名称数量序号名称数量1假阴道外壳10温度计2内胎11500ml烧杯3集精杯12漏斗4气伐13显微镜及保温板5保温棉或毛巾14载玻片及盖玻片各20张675%酒精棉球795%酒精棉球8医用凡士林9镊子(25cm)精液冷冻用品清单序号名称数量序号名称数量1液氮罐及液氮10250ml烧杯2泡沫塑料盒11温度计3铝饭盒12解冻液4氟板13标签5镊子6滴管7细管8微量移液器9纱布袋或塑料筒稀释液的配制基础液的配制：秤量-放入烧杯-加入100毫升蒸馏水-溶解-过滤-加热-放冷第一液配制：用基础液80毫升，加入卵黄液20毫升。（附卵黄的取法）第二液配制：第一液45毫升，用一次性注射器取甘油5毫升，加入混合均匀。解冻液的配制：2.9%的柠檬酸钠液冷冻精液的程序1、精液的采集：山羊采精可采用一次采精两个射精量的方法（间隔时间15分钟）2、品质检查：精液的密度和活力都必须符合要求（密度为密以上，活力0.7以上）。3、稀释前处理：如果用条件可将山羊精液进行清洗，有利于提高解冻后的活力及受胎率。4、稀释：最常使用的是二次稀释法：即第一次在30℃下，用不含甘油的稀释液稀释，降温至2-5℃时，用含甘油的稀释液进行稀释，并平衡2小时。冷冻精液的程序稀释第一次稀释：在30℃温度下，根据计算的稀释倍数进行第一次稀释，一般为1:0.5稀释,放在500毫升的烧杯中与第二液一起缓慢降温至2-5℃。第二次稀释：在2-5℃下进行,一般为1:1稀释5、平衡：是精液与防冻剂（甘油）相互的时间。一般2小时。6、分装：山羊冷冻精液最常用的剂型是细管(0.25ml)和颗粒(0.1ml)两种。冷冻精液的程序7、冷冻：冷源：干冰（-79℃）、最常用液氮（-196℃）冷冻用品：冷冻面：铜网、氟板（聚四氟乙烯）、铝板冷冻槽：广口液氮罐、液氮槽钢匙、镊子、低温温度计冷冻方法：干冰埋藏法液氮熏蒸法不同剂型冷冻方法：颗粒冻精细管冻精8、活力检查：解冻后活力应在0.3以上颗粒冻精制作方法在泡沫塑料盒中注入液氮，并使液氮面距冷冻面1厘米左右将铝饭盒和氟板浸入液氮中片刻将铝饭盒固定在液氮面上2厘米左右高处在氟板的凹槽中，各滴入平衡后的精液0.1毫升（约两滴），全部滴完后，加盖将铝饭盒浸入液氮中片刻，将颗粒冻精倒入浸在液氮中的铝盒内分装到纱布袋中或塑料筒中细管冻精制作细管冻精的分装平衡及上架将冷冻架放入距液氮面10厘米的广口液氮罐中约5分钟将其收集后浸入液氮中保存山羊冷冻精液制作应注意的事项所有接触平衡后的精液的用品都必须处于2-5℃冷冻板必须在预冷（约-110℃）后才能滴冻精液滴冻过程应保证以下几个要求：规格的一致（每个颗粒约0.1ml）或每毫升10个颗粒形状一致呈球形或大半球形无气泡浸入液氮后应沉入底部相互不连结一定要有熏蒸过程所有接触冻精的用品必须经过液氮预冷分装过程中应避免冻精在空气中暴露时间过长（3秒以内）冻精的解冻解冻温度：有冰水解冻，30-40℃解冻，高温（50-75℃）解冻，一般认为山羊冻精的解冻以高温解冻效果最好。解冻方法：湿解冻法：在试管中加入0.5-1ml解冻液，升温到30-40℃，投入一粒冻精，摇动并取出干解冻法：先将试管预热至30-40℃，投入冻精颗粒后，至融化一半时，取出加入20-30℃的解冻液细管冻精解冻：将细管从液氮罐或液氮槽中取出，投入30-40℃的水中至融化一半时取出用手搓至完全融化或用体温解冻解冻后温度：5-8℃解冻后保存：在2-5℃下或冰瓶中可保存12小时以上。冷冻精液的保存冻精（颗粒）应进行标记：公畜名（号）、采精日期、容量保持液氮罐中液氮面高度接触冷冻精液的用品都要进行预冷在冻精进行转移时，应尽可能减少在空气中暴露的时间。如果是颗粒冻精应先移入液氮槽中再解冻。液氮罐应放在凉爽通风处，避免放在高温或通风不畅的地方液氮罐在运输中应防止暴晒和碰撞。山羊冷冻精液制作牛冷冻精液制作八、妊娠诊断1、根据输精情况记录，于配种后第19-22天观察母羊是否返情，如果返情应安排补配。如未返情可基本确定为妊娠2、用妊娠诊断仪于配种后20天后检测以确定母羊是否受孕八、配种情况分析1、检查母羊受孕情况，评估配种技术水平，总结经验2、根据记录查找未受配母羊，并分析未配原因，及时处理SWINEARTIFICALINSEMINATION

猪人工授精技术一、猪的人工授精简介（一）猪人工授精的历史100多年人工授精的历史

1870年意大利科学家Spalanzini用狗作为试验对象，获得了首次人工授精的成功。70年的猪人工授精历史20世纪30年代：在前苏联的集体农庄已经广泛地开展的猪的人工授精最早的专著最早的1956年英国科学家CriesPolge出版了第一部《猪的人工授精》专著我国的人工授精20世纪50年代受前苏联的影响，我国南方各省也广泛地开展了猪的人工授精20世纪90年代初，由于大量引进国外品种，传统的人工授精技术不能适应新猪种的要求，而使许多养猪场重新回到本交配种。20世纪90年代末，由疫病控制、引种和降低配种成本需要，在广东省首先引进国外最新人工授精技术，并取得良好效果。（二）猪的工授精的基本流程精液保存精液品质检查新鲜猪精液精液稀释与分装输精采精精液稀释液（三）猪的人工授精与本交的区别项目本交（自然交配）人工授精公猪配种能力头均负担25～30头母猪配种，年产后代500～600头头均负担500～600头母猪配种,年产后代1万～1.2万头防止传染病能力公母猪接触，易传播疾病公母猪不接触，不易传播疾病配种频率配种频率容易过高，公猪利用年限短采精频率与其生精能力相匹配，公猪利用年限长配种受胎率不能经常检查精液质量，受胎率不可靠，平均受胎率低用于输精的每份精液符合要求才可输精，受胎率高期望受胎率85%左右大于92%产仔数一般精液可靠，产仔数略高于本交配种容易程度公母猪体重悬殊时，配种困难。公母猪圈距离不能太远容易，不受体重影响，公母猪圈舍距离不受限制（四）最新人工授精与传统人工授精的区别项目最新人工授精传统人工授精采精用品集精容器、过滤网、手套均为一次性用品,勿需消毒集精容器、过滤网、手套均重复使用，必须严格消毒稀释液用商品稀释粉配制稀释液,稀释液质量稳定可靠临时称量配制，不准确，稀释液质量不可靠保存容器恒温冰箱内保存,温度恒定,精液保存期长井内或室内保存，温度不恒定,保存期短,操作不方便有效精子一次输精总精子数30亿一次输精总精子数5～15亿精液的量70～100毫升10～30毫升输精容器一次性输精袋、输精瓶,操作容易,安全多次性注射器,易形成涡流损伤精子、易污染输精器一次性泡沫头输精器,不损伤子宫,不倒流多次性橡胶管,易损伤子宫,易倒流受胎率期望受胎率92%以上期望受胎率85%左右可操作性操作简便、规范，技术易掌握操作复杂繁琐，不易掌握，问题多（五）猪的人工授精大件耐用品及费用一台单目显微镜一台恒温冰箱恒温载物台一台恒温消毒柜一台恒温水浴锅一台热封口机电子秤一个假母猪（六）猪人工授精的优越性有效减少传染病公母猪的不直接接触，避免了通过交配传播传染病问题有利于提高猪群品质最优秀的种公猪但到更充分的利用，使采用最优秀的种公猪更经济，大大提高了种猪群的总体质量配种受胎率可靠全部用于输精的精液均经过质量检查以最快的速度进行后备公猪的配种能力鉴定解决了因公母猪体重悬殊而造成的配种困难方便了母猪自繁自养通过购买精液配种，可经济地实现种母猪的自繁自养节约了公猪饲养成本猪场种公猪的存栏数量只有本交的1/10，大大降低了培育或购买种公猪的数量，节约了费用；同时也降低了饲养种公猪的成本。提高了健仔率混合精液配种可在不增加种公猪数量的情况，增加卵子受精的机会，提高了母猪的产仔数和健仔率可治疗不发情强制人工授精，可以对长期不发情的母猪进行诱导发情解决了配种在时间和空间上的限制精液的保存和运输，使猪场间“种公猪”的交流成为可能，解决了纯种公猪数量少造成近交的问题（七）猪场人工授精失败原因分析人工授精设备及用品不完善、选用设备不合理消毒卫生不严格或流于形式有效精子数太少，配种时机掌握不准稀释液配制不规范，没有合适的保存方法操作不规范满足感和走捷径传统的人工授精的缺陷1、重复使用的手套和过滤网及集精杯极易因消毒不彻底而污染精液2、用手将柔软的输精器送入母猪生殖道内易使生殖道受污染3、用注射器输精易形成“涡流”而使精子受到损害（八）怎样在猪场中开展人工授精人工授精员上岗前必须进行必要的培训本交+授精在一个配种情期内，首次采用本交，二次配种采用人工授精部分人工授精先对部分母猪进行人工授精：在发情好的、健康的、经产的父母代母猪中开展提高输入的精子数初学者开展人工授精时，一次输精的精子数比推荐量高一倍，以确保可靠性受胎率和产仔数评估在全面开展人工授精时，应对猪场开展的人工授精进行全面的评估。以后应定期对人工授精成绩进行评估。半年后全面推广用5-6个月时间逐步达到全面开展人工授精（九）猪的人工授精的限制不要期望大幅度提高受胎率和产仔数如果种公猪都是健康的，则人工授精与本交相比，并不能提高母猪的受胎率和产仔数精液不能长期保存猪精子对低温耐受力差，因此精液冷冻保存效果较差，且成本高。一般只采用常温保存，保存时间为3-7天人工授精人员必须进行一定的培训必须有相应的设备条件、实验室及耗材操作必须谨慎如果操作不当可能影响受胎率和产仔数甚至会造成母猪不育规模越大人工授精的意义就越大(十)人工授精的投资设备费6000元实验室10平方米采精室10平方米(十一)人工授精站的经营模式个体小规模：2-3头公猪，1-2位授精员中型规模：5-8头公猪，3-5位授精员大型规模：10头以上，设立分站，定期进行猪场授精员及分站授精员培训(十二)人工授精的关键性环节公猪的调教（调教在假母猪上采精）采精（获得公猪的精液）输精时间掌握二、人工授精器械及设备（一）采精用品采精室防护栏假母猪、防滑垫、水龙头、水管、扫把、刷子集精杯、集精袋、过滤网、橡皮圈、纸巾、一次性手套加温壁橱采精室与实验室采精室的设计假母猪设计采精室及假母猪消毒纸巾一次性PE手套过滤网集精保温杯（二）精液品质检查用品人工授精实验室100、400倍显微镜（必备）载物台加热板载玻片、盖玻片、玻璃棒、纸巾、擦镜纸计数板、计数器吸管（100、200倍）、微量移液器、移液管3%氯化钠溶液分光光度计或比色计恒温加热板及显微镜如果有条件可进行实验室升级，增加设备电子秤比色仪微移液器带恒温台的双目显微镜（三）人工授精实验室人工授精实验室一角（四）稀释液配制用品软水机(或软水):生产纯水用来冲洗器皿电脑程控三重消毒柜分析天平、托盘天平：称量药品量筒或量杯或电子天平(500或1000毫升):量纯水各种容器如锥形瓶、大烧杯、输液瓶常用药品(或精液稀释粉)精液稀释粉电子秤（五）精液稀释、分装及保存用品恒温水浴（34-37℃）、温度计1000毫升烧杯或塑料杯分装架输精瓶或精液袋及操作台（泡沫塑料板）精液分装管、5毫升一次性注射器泡沫塑料箱恒温冰箱（15-18℃）精液分装及运输容器袋装精液瓶装精液泡沫塑料运输箱电子恒温运输箱各种精液容器精液袋分装管精液的分装（六）输精用品输精器：多次性输精器、一次性输精器输精瓶或输精袋（不采用注射器）纸巾润滑剂--红霉素软膏或专用润滑膏洗瓶、软水、75%酒精恒温干燥箱自来水、纯水各种输精器三、人工授精操作（一）公猪的调教1.公猪的调教注意事项要有足够的耐心采精室要能防止公猪逃跑谨慎接近公猪，保证安全必要时采精员亲自饲喂和管理待调教公猪公猪没有爬上假母猪前不过分靠近公猪公猪爬上假母猪后从后面靠近公猪，并轻轻按摩其包皮采精成功后应在第二、三天同一时间重复一次2.调教公猪爬跨假母猪的方法将发情母猪尿或分泌物涂在假母猪的后部，然后让公猪与接触、熟悉，待其爬跨后从后侧上前采精用发情母猪尿涂在布上，让公猪嗅闻，并逐步诱导其爬上假母猪先将发情母猪赶入采精室，并在其背部搭上麻袋，让其爬跨发情母猪，并抓耳拉下，待其达到性高潮时，用麻袋遮住公猪眼，赶走发情母猪，将麻袋搭在假母猪上，诱导公猪爬跨假母猪用发情母猪作台畜采精一次（二）采精前的准备1.人工授精用品清洗与消毒量筒、三角瓶用洗涤剂洗过，冲净，用装有蒸馏水的洗瓶冲洗其内壁四次，并将外壁冲洗干净，空水后放入消毒柜，用100-125℃温度消毒1小时。多次性输精器：用过立即用自来水冲洗内外，甩去水分,用75%酒精冲洗一遍，再用蒸馏水冲洗三遍，放入消毒柜中，100℃消毒1小时。精液分装管：用过后立即用蒸馏水冲洗，并用75%酒精冲洗，可与输精器一起放入消毒柜中，在100℃温度下消毒1小时。大烧杯、集精杯：用自来水、洗涤剂洗净，冲洗后，凉干，用前与精液分装管一起放入消毒柜中，温度调至38℃，预温5分钟。2.采精前准备（一）清洗双手用电吹风或恒温箱加热集精杯，防止集精杯过冷将恒温载物台电源打开，并在上面放上一张干净的载玻片准备精液稀释液:在三角瓶中加入稀释粉，然后按说明量取1000ml或500ml蒸馏水，加入使其完全溶解（冬季也可先放入水浴中加热），也可在套有一次性塑料膜的烧杯中配制稀释液精液稀释液放入33-35℃的水浴锅中预温溶解预温至34℃3.采精前准备（二）集精杯的准备将集精杯加温在集精杯中放入两层食品袋并将袋口翻向保温杯外，用干净玻璃棒使食品袋与集精杯内壁贴服将一张专用滤网放在保温杯上用一根橡皮筋将滤网固定在保温杯口上，并使网面下陷将一张纸巾盖在保温杯上，将保温杯盖轻轻盖上在进入采精室后，右手戴两层无毒的聚乙烯塑料手套带两张纸巾将集精杯放入实验室与采精室之间的窗内集精杯的安装过程（二）采精操作采精的目标用最简单的方法采集到全部含较多精子的精液采集到的精液最大限度地不受到任何污染尽可能使精液不受到外界气温的影响1.采精操作（锁定龟头）将橡胶垫放置于假母猪后，检查假母猪是否松动，并将假母猪擦拭干净尽可能安静地将公猪赶到采精室清除公猪肋部和腹部的脏物，用右手按摩公猪包皮尽可能多地排放包皮腔中的尿液,并用纸巾拭干必要时剪掉包皮附近的阴毛诱导公猪爬跨假母猪公猪阴茎勃起后，脱去外层手套,蹲(或坐)在假母猪左侧,右手呈空拳,拳心向上,使阴茎进入空拳中,并立即锁定阴茎的龟头(注意不要抓握阴茎体部),顺其向前冲力,将阴茎尽可能地拉出。2.采精操作(收集精液)左手打开集精杯盖,取下上面的纸巾公猪开始射精后，不要立即收集,待公猪射出部分精亮的液体后,再开始收集含精多的部分如果仍有包皮中的尿液顺阴茎流出,可用纸巾将其吸附,避免流入集精杯中，或者暂时将龟头部位抬高当公猪开始环顾四周时,说明公猪射精即将结束。注意不要过早终止射精，以免影响公猪的健康采精后，去除滤网橡皮筋，将食品袋口收紧放在杯口上，用集精杯盖压上面将精液放入采精室与实验室之间的窗口内,将公猪赶回圈内公猪精液的收集过程采精的手势带安全栏的采精区塑料假母猪3.采精要点在喂食后2-3个小时后采精最高采精频率为隔日一次，最好每3天采一次精每天采精时间要固定，以形成良好的条件反射：最好在每天的9点到10点左右采精前应将公猪的两肋和下腹部及包皮周围污物清除按摩包皮腔，使其中的尿液尽可能排净当包皮腔中的尿液顺阴茎流下时，应用纸巾将其吸附，避免其流入精液中不要收集最初射出的精液（含菌量高）如果可能尽量只收集浓份精液不要过早终止采精，以防公猪不适（三）精液处理1.精液处理(等温与容量测定)避免精液温度变化太快，防止阳光直射或紫外线照射从恒温干燥箱中取出1000毫升的大烧杯，将盛有精液的食品袋放入大烧杯中将精液放在电子天平上称重（除去杯重）记录精液容量如果必要可将大烧杯放入水浴中与稀释液等温检查水浴恒温箱中的水温是否为34℃（以温度计为准）2.精液处理(活力测定)轻轻摇动精液并检查精液色泽、气味活力检查：轻轻摇动精液，用微量移液器或1ml注射器加吸咀取25ul精液，放于预热到38℃的载玻片中间，盖上干净的盖玻片。放在恒温载物台上没有恒温载物台的实验室，可先将一个厚玻璃板和载玻片预温至38℃,,用微量移液器取25ul鲜精，再将恒温干燥箱中的厚玻片和载玻片取出，将精液滴于载玻片中间，盖上盖玻片立即推入，调好焦距，再改用400倍观察活力。做好活力检查结果记录必要时进行精子的密度检查3.精液处理(精液稀释)非商业性供精站，可不进行密度测定，只要精液色泽正常，每份精液中鲜精不少于20毫升，可保证足够的有效精子数精液稀释：将预温后的稀释液缓慢加入大烧杯内的精液中，使总体积分装份数相当，并轻轻摇动或搅拌。4.精液处理(精液分装)精液分装：将大烧杯放于搁物架上，从恒温干燥箱中取出分装管，将玻璃管一端放入精液中，并将精液搅动。用一支5ml一次性注射器装上一个移液器吸咀，将吸咀插入分装管的另一端，拉动活塞，使精液进管内下降至离管口10cm处，关闭阀门；将分装管一端插入精液袋内，打开阀门，使精液进入袋内；当一袋达到刻度时，关闭阀门，将分装管插入另一袋内，打开阀门。同时将已装满的一袋用封口机封口。将封口好的精液袋放在一个泡沫塑料盒中，使其缓慢降温，室温在20-30℃的情况下，可在盒中放置30分钟，然后放入恒温冰箱中5.精液处理(精液保存)每天两次将精液袋颠倒两次，再放入恒温冰箱中恒温冰箱应保持17±1℃精液保存时间不一般不超过3天（72小时），超过时间一般丢弃，如果考虑继续使用，应取样检查活力。将厚玻璃及载玻片、盖玻片预热到38℃，用针头从精液袋封口处刺一小口，用微量移器取20ul放于载玻片中央，盖上盖玻片立即进行观察可用泡沫塑料盒运输精液或专用电子恒温冰箱运输精液（四）精液品质检查精液品质检查的重要性是人工授精的一大优越性确定精液有无进行稀释和保存的必要性检查公猪有无问题精液品质检查的项目直观检查项目：色泽气味射精量微观检查项目：活力密度畸形率精液品质检查色泽与气味检查活力测定—估测容量测定—称重密度测定—比色活力评分方法整个视野中有明显的大的运动波很好5分出现一些运动波和精子成群运动好4分出现成群运动（50%前进运动）较好3分无成群运动，部分呈直线运动一般2分只有蠕动差1分无精子活动0分精子密度测定简易方法用2.5ml注射器取2ml3%氯化钠溶液，注入一次试管中用取样器取摇匀的原精50ul,擦去外部精液，注入试管中，混匀用取样器取稀释后的精液50ul，加入计数板与盖玻片之间的接缝中，使其吸入用10×10倍显微镜观察5个中方格的精子数。以头部为准，在格线上的数上不数下，数左不数右。原精密度（亿/ml）=5个中方格总精数×0.02密度测定方法精液密度杯法取2ml生理盐水加入密度杯中再取50ul摇匀的精液加入密度杯中混匀在灯光下观察最上一层能看清连续的三条线，并确定其位置号查对位置号所相对的密度值畸形率测定畸形率=畸形精子/视野中总精子数×100%各种畸形精子判定精液质量的标准色泽、气味正常无异物射精量在50毫升以上鲜精活力在0.6以上，保存精液活力0.5以上畸形率低于20%（五）精液的稀释与保存稀释方法总精子数=原精体积（重，克）×原精密度（亿/ml)可分份数=总精子数（亿）/每份精液精子数（亿）总稀释后体积=可分份数×每份体积总稀释后体积=原精体积（重，克）×原精密度（亿/ml)×

每份体积/每份精液精子数1.精液稀释要点在采集精液后，应尽早进行稀释如果要进行保存，稀释倍数不应低于1:3，但也不能高于1:9,较高的稀释倍数有利于保存。稀释液与精液应尽可能等温，最大温差不超过1℃。应将稀释液缓慢加入精液中非商业人工授精站精液的稀释非商业人工授精并不强调每头公猪精液所提供的鲜精份数，而是更注重受胎率，所以一般只要确保足够的有效精子数就可行了稀释倍数的确定可根据最近两天内需要输精的母猪头数来确定如两天内输精的母猪数为8头，那么最少应准备16份精液。如果是来自两头公猪的精液（如果是生产商品猪可将两头猪的精液进行混合）。原精液总共为400毫升；每份精液为100毫升，共需16×100=1600毫升，应将400毫升精液总量稀释到1600毫升。小型商业化人工授精站也可参考此法（五）母猪发情生理母猪生殖系统母猪的生殖系统子宫颈的环状皱褶牛的子宫颈阴道部新型输精器在子宫颈内的位置母猪的发情生理瘦肉型猪初情期时间约在5.5-6月龄初配母猪应在第二至三个情期（初情期后21-42天左右），体重达110公斤以上。发情周期18-23天，发情期2-3天排卵时间在发情后36-48小时左右，持续6小时，交配会使排卵提前4小时左右分娩后发情在仔猪断奶后5-7天母猪发情的主要征状烦躁不安，鸣叫，食欲减退，（部分猪）流泪，爬跨其它母猪外阴红肿变得松弛分开外阴部可见到阴道分泌的粘液当按压其背部或人骑在母猪背上时，母猪站立不动,同时表现为耳竖起,背弓起，尾竖起，颤抖，对外阴和侧腹部的刺激敏感不发情母猪处理公猪气味刺激群养应激：运输、换圈、停喂注射催情针、绒毛膜激素、孕马血清、氯前列烯醇强制输精中草药：催情散羊红膻100克淫羊藿50克阳起石50克研末，开水冲后，放凉饮用益母草100克淫羊藿50克枸杞子50克红花25克煎水加红糖200克，黄酒或啤酒250毫升饮用发情鉴定的主要方法公猪试情外部观察压背试验发情鉴定—公猪隔栏试情压背试验和发情母猪的外阴母猪发情检查发情