DB2312T 088-2023 禽用油乳剂灭活疫苗细菌内毒素含量检验技术操作规程

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DB2312黑 龙 江 省 绥 化 市 地 方 标 准DB2312/T088—2023禽用油乳剂灭活疫苗细菌内毒素含量检验技术操作规程2023-11-30发布 2024-01-01实施绥化市市场监督管理局发布DB2312/T088—2023DB2312/T088—2023II前 言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由绥化市农业农村局归口。本文件起草单位：黑龙江省百洲生物工程有限公司、明水县农业综合行政执法大队。本文件主要起草人：张越、张洪楠、李山峰、汪洋、王海楠、王东升。DB2312/T088—2023DB2312/T088—2023PAGEPAGE1禽用油乳剂灭活疫苗细菌内毒素含量检验技术操作规程范围本文件规定了禽用油乳剂灭活疫苗细菌内毒素含量检验方法，本法为凝胶法是利用鲎试剂检测或量化由革兰氏阴性菌产生的内毒素的方法。本文件适用于兽用生物制品生产企业以及经营企业对禽用油乳剂灭活疫苗细菌内毒素含量范围的检测。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适《中华人民共和国兽药典》（2020版）一部附录“细菌内毒素检查法”。术语和定义《中华人民共和国兽药典》（2020版）一部附录“细菌内毒素检查法”界定的术语和定义适用于本文件。主要技术内容被检疫苗处理1-2024h～48h，待其完全冻结后，将其取出置24h～48h3～43500r/min15min供试品溶液稀释用细菌内毒素检查用水（0.015EU/ml）10倍、1005001000鲎试剂灵敏度复核实验当使用新批号的鲎试剂或实验条件发生了任何可改变实验结果的改变时，应根据《中华人民共和国兽药典》现行版一部附录“细菌内毒素检查法”进行灵敏度复核实验，确定鲎试剂的灵敏度与标示值相符。供试品干扰试验供试品初次进行细菌内毒素实验之前，需根据《中华人民共和国兽药典》现行版一部附录“细菌内毒素检查法”先进行干扰试验，以检测供试品对内毒素检测试验是否有干扰或抑制作用，供试品如对实验有干扰，可通过对供试品进行更大倍数的稀释或通过其他适宜的方法(如过滤、中和、透析或加热处理等)排除干扰。检测步骤实验前准备主要仪器超净工作台、恒温培养箱、干燥箱、旋涡混合仪、离心机、移液枪、无热源枪头（或去热源的刻度吸管外径1×75m25℃干烤1。试剂鲎试剂（0.1ml/支、细菌内毒素工作标准品（10EU/支、细菌内毒素检查用水（内毒素小于0.015EU/ML。操作步骤按照《中华人民共和国兽药典》现行版一部附录“细菌内毒素检查法”进行检验,制备供试品溶0.1ml/支的鲎试20.1ml20.1mlλ的内毒素供试液溶液（分别用相对应的待测稀释倍数下的供试品溶液稀20.ml浓度为20.ml内毒素37℃±160min±2min180°。若管内形成凝胶并且凝胶不变形、不从管壁脱落者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁脱落者为阴性。记录结果。结果判定若阴性对照管均为阴性，阳性对照管均为阳性，供试品阳性对照管均为阳性，判定试验有效。若供试品管均为阴性，判定供试品内毒素含量小于测定值。若供试品管均为阳性，则判定供试品内毒素4检验记录填写检验记录，并建立检验档案，内容包