霉菌的形态观察

山东大学实验报告年月日姓名系年级学号组别科目题目霉菌的形态观察同组者：霉菌的形态观察一.实验目的1．掌握配制马铃薯培养基（PDA）的一般方法。2．学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。3．了解并掌握四类霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青霉）的基本形态。二.实验原理1.霉菌霉菌是可产生复杂分枝的菌丝体，其菌丝分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约3～10μm），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。本实验采用毛霉、青霉，曲霉，根霉四种常见的霉菌作为菌种进行观察。2.小室培养法观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，沿琼脂边缘接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。三．实验器材1.菌种曲霉（Aspergillussp.），青霉（Penicilliumsp.），毛霉（Mucorsp.）和根霉（Rhizopussp.）培养48h的马铃薯琼脂（PDA）斜面培养物。2.培养基及试剂马铃薯琼脂（PDA），20%甘油（无菌），乙醇。3.仪器及其它用品无菌操作台，解剖刀，镊子，无菌吸管，U型玻璃棒，普通光学显微镜，擦镜纸，绸布，酒精灯，载玻片，接种针，培养皿等。四．操作步骤1.培养基的配制按附录所示配方称取PDA各组分，先将马铃薯去皮，切成小块称取20g煮沸20min，然后先用1层纱布滤去未溶解的固体，再用6层纱布过滤，将滤液体积用无菌水调至100mL，然后再加入糖及琼脂，加塞后用牛皮纸包好，准备灭菌。2.培养基及装置的灭菌（1）灭菌准备准备12个平皿，在其中10个平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一U形玻棒，其上放一洁净载玻片和三块盖玻片，盖上皿盖后再与另外2个空平皿一起用牛皮纸包好；在100mL锥形瓶中用甘油配制20%的甘油，加塞包好；最后取2mL移液管两支并用牛皮纸包好。（2）灭菌将上述用牛皮纸包好的仪器与试剂连同配好的PDA培养基一并放入灭菌锅中110℃灭菌20~30min3.琼脂块制备分别取已灭菌并溶化冷却至约50℃的马铃薯琼脂培养基6～7mL注入两个灭菌空平皿中，使之凝固成薄层。在两个凝固后的平板背部用记号笔画下约1×1cm4.接种在无菌操作台上，先用镊子将载玻片放于U型玻璃管上，然后用解剖刀取一小块儿琼脂块，置于载玻片上，用接种环分别从斜面培养物上挑取很少量的4种菌的孢子，分别接种于培养小室中琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。最后用移液管在培养小室中的圆滤纸上加2mL灭菌的20%的甘油（用于保持平皿内的湿度)，盖上皿盖并贴上标签，每一种菌接种两个小室（其中毛霉接种4个小室）。5.恒温培养将接种后的平皿正置于28℃培养箱中恒温培养7天6.镜检在显微镜下直接观察小室培养后的载玻片，用低倍镜即可较为清晰的观察到霉菌的菌丝体及孢子，根据所学的四种菌的基本特征对四种菌进行观察比较与区分，必要时可以采用高倍镜对菌进行观察。五．实验结果记录

1.四种霉菌的形态特征毛霉、根霉、青霉、曲霉的形态特征比较菌种形态特征根霉菌丝无隔、多核、分枝状，有匍匐菌丝和假根。在假根的上方直立地生长出一至数根孢囊梗，其顶端膨大成球形孢子囊。囊的基部有囊托，中间有球形或半球形囊轴。囊内产大量孢囊孢子，有性生殖时由不同性别的菌丝或匍匐菌丝上生出配子囊，配子囊双双异宗配合形成一接合孢子。曲霉营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端膨大成球状顶囊，表面辐射出一层或两层小梗，小梗上着生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连。毛霉菌丝无隔、多核、分枝状，无假根或匍匐菌丝。菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊，无囊托。青霉菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。小梗顶端有孢子。2.四种霉菌的图示图1根霉的形态（10×40）图2黑曲霉的形态（10×10）图3黑曲霉的形态（10×40）图4黑曲霉足细胞（10×40）图5毛霉的形态（10×40）隔分生小梗隔分生小梗图6青霉的形态（10×40）六、实验小结通过本次实验，学会了小室培养培及马铃薯培养基的配制方法。另外，通过观察霉菌的形态并且有特别的关注不同霉菌的细节及不同之处，比如菌丝是否有隔，孢子囊形态等特征，细心比较各种霉菌细节状态的不同，掌握了霉菌的一些基本形态特征，扩展了视野。七、思考题1、黑曲霉和黑根霉在形态特征上有何区别？①菌丝：根霉无隔有假根，曲霉无隔有足细胞。②孢子梗：根霉位于假根上，曲霉由气生菌丝分化而来。③孢子囊形态：根霉孢子囊表面平滑，曲霉表面不平滑，呈絮状。2、如果要求对某放线菌或霉菌不同发育时期（基内菌丝→气生菌丝→孢子丝或繁殖菌丝）进行连续观察，写出实验方案。①选取对数期菌落进行同步培养，分化出处于同一生长阶段的菌。②接种，若放线菌则在平皿上插上至少7下培养，每隔一天在相