替米考星与泰妙菌素联合对猪肺炎支原体的敏感性

替米考星与泰妙菌素联合对猪肺炎支原体的敏感性

猪冠状病，也称为猪流行病，通常被称为猪哮喘。这是由猪流行病引起的慢性猪呼吸道疾病。它具有高发病率、低发病率、多种流行趋势。它严重影响了猪的生长和饲料的转化率。这是兽医行业经济损失的重要疾病之一。目前，该病仍以抗菌药物防治为主，已应用的抗菌药包括氟喹诺酮类（如诺氟沙星、恩诺沙星、单诺沙星）、四环素类、大环内酯类、林可霉素类等。随着抗菌药物滥用现象的日益严重，支原体对其不敏感，或产生了耐药性，故对联合用药的研究尤其重要，这也是目前临床上应用抗菌药防治呼吸系统疾病的常用方法。替米考星是一种由泰乐菌素半合成的新型大环内酯类畜禽专用抗生素，与临床常用的其他抗生素之间无交叉耐药性。目前已被批准临床使用于牛、山羊、绵羊、奶牛、猪、鸡等动物由敏感菌引起的感染性疾病。但是，由于其对某些革兰阳性菌抗菌活性不够强，且价格较高，在生产应用上受到一定限制，使用单一的抗菌药不利于防治猪肺炎支原体合并其他病原菌形成的混合感染及预防耐药性产生。合理的联合用药可降低成本、提高疗效、减少耐药性。本试验将替米考星与其他抗菌药联合使用，对猪肺炎支原体进行药敏试验，测定其体外抗菌效果，为寻找合理的联合用药方案提供科学依据。1材料和方法1.1试剂和培养基替米考星，其中顺式85.5%，反式13.1%，由湖北中牧安达药业有限公司提供；土霉素，含量98.8%，由扬州联环药业有限公司提供。金霉素、甲氧苄啶、多西环素均由中国兽药监察所提供；泰妙菌素由浙江升华拜克生物股份有限公司提供；酒石酸泰乐菌素，由宁夏多维泰瑞制药有限公司提供；氯化钠、氯化钾等均为国产分析纯试剂，水解蛋白为美国Difco公司生产；酵母浸出物，英国OXOID公司生产；无菌猪血清，江苏省家禽研究所提供。江苏-Ⅱ号培养基，参照金洪效等（1975）方法配制，用于猪肺炎支原体的培养。猪肺炎支原体济南系F64株，由中国兽药监察所提供，华南农业大学兽医学院保存。将冷冻保存的菌液解冻后取1mL接种于5mL液体培养基中，37℃培养4～5d，至培养基着色变黄并呈均匀一致的混浊时，取少量传代观察，其余-20℃冷冻保存。1.2最小抑菌浓度值参照戴自英（1985）的试管2倍稀释法。每次试验设3种对照：培养物对照、培养基对照、抗菌药对照。37℃恒温箱内培养。当对照培养物由橙红色变为桔黄色并有轻微浑浊、对照培养基和抗菌药对照不发生颜色变化、无菌检查无污染时，记下颜色变化的管数，以不发生颜色变化的最小浓度为最小抑菌浓度（MIC）值。再继续观察1周后，取颜色变化最小浓度管的前3管，以1∶5接种于液体培养基内，3d内不发生颜色变化的最小浓度为最小杀菌浓度（MBC）。上述方法每药重复4次，取平均值。1.3猪肺炎产物检测参照戴自英（1985）的棋盘法进行试验。每次试验设3种对照：（1）培养物对照，接种同数量的菌液，不加抗菌药；（2）培养基对照，不接种菌液，不加抗菌药；（3）抗菌药对照，加入抗菌药，但不接种菌液。37℃温箱内培养，每隔24h观察结果，对照培养物由橙红色变为桔黄色后，对照培养基不发生颜色变化。试管内液体呈橙红色的（不变色），为阴性“-”即无猪肺炎支原体生长；液体呈桔黄色的（变色），为阳性“+”即有猪肺炎支原体生长。记录结果。联合药敏试验的结果判断。以部分抑菌浓度指数（FIC指数）作为联合药敏试验的判断依据。FIC指数为甲药联合时的MIC/甲药单独时的MIC+乙药联合时的MIC/乙药单独时的MIC。FIC指数<0.5为协同作用，FIC指数>0.5～1为相加（累加）作用，FIC指数>1～2为无关作用，FIC指数>2为拮抗作用。2结果2.1室外抗菌试验猪肺炎支原体对几种药物的敏感性试验结果见表1。2.2联合用药过敏试验几种药物联合应用对猪肺炎支原体的敏感性试验结果见表2。3讨论3.1替米考星的mic结果表明，猪肺炎支原体济南系F64株对替米考星与泰妙菌素均较敏感，MIC和MBC值均低于泰乐菌素、多西环素、土霉素、金霉素及甲氧苄啶，而测得的替米考星对猪肺炎支原体的MIC值与文献的报道0.078mg/L基本一致。另外，本研究中使用的替米考星含顺式85.5%，反式13.1%，而根据有关报道，对于8种分离菌，顺式结构的替米考星的MIC低于反式结构式的MIC，相差1倍左右。但是对于猪肺炎支原体，异构体之间无明显的差异，无论是顺式还是反式的MIC值均为0.078mg/L。3.2抗菌药物联合用药对猪肺炎产物的mic由表2可知，替米考星分别与土霉素、多西环素、金霉素、甲氧苄啶，泰乐菌素分别与土霉素、多西环素的联合抑菌试验的FIC指数均在1.0以下，说明6组抗菌药物联合用药后对猪肺炎支原体主要表现为协同或相加作用，无拮抗作用，尤其是替米考星与土霉素、替米考星与甲氧苄啶的组合