南京地区健康青年验健康青年验健康人群鼻咽部肺炎链球菌的分离鉴定

南京地区健康青年验健康青年验健康人群鼻咽部肺炎链球菌的分离鉴定

1968年首次报道并确认了抗青霉（pmi）菌，世界上也发现了pmi菌。1997年第20届国际化疗会议资料显示,PRSP感染占肺炎链球菌分离比例,美国为40%,西班牙为50%,南非为55%,日本为37%,韩国为77%,中国香港为45%。PRSP的发生率在不同国家甚至在同一国家的不同地区均有明显差异。我国尚无全国性统一监测。对于健康人群鼻咽部肺炎链球菌定植状况的调查资料也非常有限,仅有北京等个别地区的监测报告,且研究对象大多局限于儿童。及时掌握本地区人群上呼吸道的肺炎链球菌的定植率和耐药率对于制订合理的抗生素应用策略和指导临床治疗均有重要意义。为此,我们调查了南京地区部队健康青年军人鼻咽部肺炎链球菌的定植情况及耐药状况。材料和方法一、材料表面(一)慢性呼吸道疾病2002年3月-2003年7月采集南京市城(郊)区的部队和军事院校健康青年军人,男女不限。所有受试者均无慢性呼吸道疾病;采集前3个月内均无呼吸道感染,未使用抗生素。(二)抗菌、抗氧等三九集团无菌鼻咽拭子、Columbia基础、Mueller-Hinton培养基和奥普托辛(OP)纸片均购自英国OXOID公司。青霉素和阿莫西林为苏州第二制药厂产品;头孢噻肟为三九集团深圳九新药业产品;红霉素为大连美罗大药厂产品;氧氟沙星为苏州长征-欣凯制药厂产品;万古霉素为美国礼来公司产品。二、方法(一)columinia羊血接种将一次性无菌鼻咽拭子轻轻伸入采集对象的鼻咽部位轻拭数下,并立即接种到培养基上(Columbia基础+5%脱纤维羊血)。37℃过夜孵育。通过典型菌落,α-溶血,胆汁溶菌,OP敏感,菊糖分解和肉汤混浊等指标鉴定肺炎链球菌。(二)蘑菇保存使用菌种保存培养基(脱脂奶粉100g+蒸馏水100ml,高压灭菌后0.5ml/安瓿分装)保存分离菌株于-70℃冰箱中。(三)检测方法规范采用琼脂稀释法测定青霉素、阿莫西林、头孢噻肟、红霉素、氧氟沙星和万古霉素等6种抗菌药物的MIC。琼脂稀释法严格按照NCCLS推荐的方法进行,判定价值参照NCCLS2002年标准。其中,青霉素MIC标准,敏感:≤0.06mg/L;中介:0.12～1mg/L;耐药≥2mg/L。质控株肺炎链球菌ATCC49619跟随整个实验过程,结果完全合格。三、统计分析所有数据均输入Excel表格并作分析。结果一、肺炎球形分离共采集南京市散布于7个城(郊)区的22个连队健康军人鼻咽拭子共1022份。其中,男999份,女23份,平均年龄(22±4)岁(16～39岁)。每个连队抽取40～50名军人为受试对象。从1022份鼻咽拭子中,共分离出112株肺炎链球菌,分离率为10.9%。22个连队中,18个连队检出肺炎链球菌,分离率介于2%～38%之间;4个连队未检出肺炎链球菌。二、广告过敏的结果(一)高耐激素菌株用琼脂稀释法测定,2/112(1.8%)的菌株低耐青霉素(MIC为0.125和0.5mg/L),青霉素对其他110株菌的MIC在0.004～0.062mg/L之间,未发现高耐青霉素菌株。所有菌株对阿莫西林、头孢噻肟和万古霉素均敏感。3/112(2.7%)的菌株低耐氧氟沙星(MIC均为4mg/L)。47/112(42%)的菌株高耐红霉素,其中仅1株MIC为1mg/L,其余均>512mg/L,见表1。2株青霉素低耐菌株宿主来自2个不同连队,均为男性战士,20岁,军龄分别为15个月和5个月。一般资料及各种抗菌药物药敏结果见表2。(二)抗菌药物的耐药112株菌中,42.0%(47/112)的菌株对所测的6种抗菌药物中的1种耐药。其中,40.2%(45/112)的菌株单耐红霉素,并广泛分布于15个连队。2株青霉素耐药株中,有1株同时耐红霉素和氧氟沙星。耐药肺炎链球菌鼻模拟菌株肺炎链球菌通常定植在人的鼻咽部。据国外文献报道,肺炎链球菌的定植率,健康成人约5%～10%,健康儿童约20%～40%。在幼儿园、军营和监狱中,个体之间的菌株传播要比一般人群更容易发生。本研究以青年健康军人为对象,在1022份鼻咽拭子标本中,共分离出肺炎链球菌112株,分离率为10.9%。由此可知,南京地区健康青年军人鼻咽部肺炎链球菌定植率处于中等水平。某些连队分离率高达38%,其连队内部可能存在个体间菌株传播。用琼脂稀释法进行6种抗菌药物的MIC测定,结果表明,2/112(1.8%)的菌株低耐青霉素(MIC,0.125和0.5mg/L),青霉素对其他110株菌的MIC在0.004～0.062mg/L之间,未发现高耐青霉素菌株。据文献报道,发生耐药肺炎链球菌鼻咽部定植的独立风险因子如下:3个月内接受过抗生素治疗者;年龄<5岁儿童;进入托儿所的儿童;中耳或鼻窦来源的肺炎链球菌菌株等。本研究对象很少具备以上风险因子,这可能是本试验耐青霉素肺炎链球菌比率低的原因。所有菌株对阿莫西林、头孢噻肟和万古霉素均敏感。2.7%的菌株低耐氧氟沙星,与欧美及国内研究结果类似。42%的菌株高耐红霉素,涉及范围广,耐药严重度高于许多欧美国家(耐药率介于15%到49%),而与国内文献报道相似,这种现象的发生可能与大环内酯类