猪下丘脑内开花样内orexina的分布

猪下丘脑内开花样内orexina的分布

1998年发现的一种神经遗产（也称为残留素和残留因子）是1998年发现的一种神经遗产。它可以调节动物的喂食、睡眠和觉醒周期、神经内政部、生殖和内脏活动。开胃素有开胃素A(33肽)和开胃素B(28肽)两种,它们都是前开胃素原(propreorexin)的蛋白水解产物。人、猪、犬、牛和鼠的开胃素A的氨基酸序列一致;猪和犬的开胃素B序列一致,与人的开胃素B只有1个氨基酸差异。开胃素通过其受体发挥作用。开胃素受体有两种亚型:OX1R和OX2R,属寡受体家族的G蛋白偶联受体(GPCR)。关于开胃素及其受体在人、小鼠、大鼠、绵羊和鸡的分布都有报道。开胃素在脑内主要分布于下丘脑的外侧区,在某些外周器官(胃肠道、胰、睾丸、垂体、松果体和肾上腺等)也存在。开胃素受体的分布更为广泛。但关于猪开胃素及其受体的分布定位仅见Lin等少量报道,未见详细的研究报道。本试验用免疫组织化学方法研究了开胃素A在猪下丘脑各核团内的分布,为探讨开胃素的作用部位及其生理功能提供形态学资料。1材料和方法1.1疫组化染色试剂盒和aec显色试剂1月龄健康苏钟仔猪5头,购自江苏省农业科学院种猪场。即用型SABC免疫组化染色试剂盒和AEC显色试剂均购自武汉博士德生物工程有限公司。开胃素A(C-19)抗血清(SC-8070),由SantaCruzBiotechnologyInc生产,购自上海吉泰科技有限公司。1.2实验方法1.2.1mlk-1的麻醉实验动物腹腔注射20g·L-1氨基甲酸乙酯(5mL·kg-1)麻醉,经心脏灌注用0.1mol·L-1PBS配制的4g·L-1多聚甲醛固定。固定后取下丘脑,置同一固定液中后固定4～6h。1.2.2冰激凌切片固定好的组织块经0.1mol·L-1PBS充分洗涤后,置于用0.1mol·L-1PBS配制的20g·L-1蔗糖溶液,在4℃待其下沉后做冰冻切片。片厚20μm,贴于经多聚赖氨酸处理的载玻片上,室温干燥后置于-20℃冰箱备用。1.2.3不同的免疫组化切片经37℃恒温箱干燥过夜后,按以下程序进行操作:①切片经蒸馏水洗涤5min;②用新鲜配制的0.5%H2O2/甲醇室温处理30min以灭活内源性过氧化物酶,蒸馏水洗涤3次;③正常兔血清封闭(室温,30min);④加一抗:山羊开胃素A抗血清(37℃,置湿盒中)孵育1.5h;⑤加二抗:生物素标记的二抗(37℃)孵育30min;⑥SABC溶液中(37℃)作用30min;⑦显色:AEC显色10～30min。对照实验:用0.1mol·L-1PBS代替一抗,其余步骤不变。1.3观察用Olympus双目显微镜对切片进行观察,并选取典型部位显微拍照。2免疫阳性细胞分布实验结果表明,开胃素A免疫阳性神经元胞体分布于猪下丘脑的视前内侧区、室周核、室旁核、视上核、背内侧核、穹隆周核、乳头体核、前区、外侧区和后区等部位,以下丘脑外侧区、乳头体核和视上核出现的免疫阳性神经元最多,以室周核的最少(图1、图2-1～图2-8)。阳性神经元胞体形态多样,胞浆内有红色颗粒沉着,胞核内无红色颗粒沉着。对照实验结果为阴性(图2-9)。免疫阳性细胞详细分布情况如下:下丘脑外侧区出现大量的开胃素A免疫阳性神经元(图2-1),并且主要分布于穹隆周围区。神经元呈三角形、卵圆形或纺锤状,突起比较明显,以中、小型细胞为主。视上核有大量开胃素A免疫阳性神经元分布,但神经元免疫反应较弱,细胞形态多样,多属小型细胞,分布比较密集。室旁核开胃素A免疫阳性神经元分布较为密集(图2-2),胞体较大,多为卵圆形,突起比较明显。乳头体出现大量的开胃素A免疫阳性神经元,其内侧核和外侧核分布相似,但神经元免疫反应较弱。室周核出现少量开胃素A免疫阳性神经元(图2-3),细胞中等大小。视前内侧区阳性神经元数量较少,散在分布(图2-4),神经元胞体较小,无明显的突起。未定带免疫阳性神经元多呈纺锤形,胞体中等大小(图2-5)。下丘脑后区免疫阳性神经元分布比较稀疏(图2-6),胞体多为圆形或卵圆形。下丘脑前区免疫阳性神经元胞体较大,数量不多。背内侧核免疫阳性神经元中等大小,为单极、双极和多极神经元(图2-7)。穹隆周核免疫阳性神经元围绕穹隆分布,数目不多,呈纺锤状或三角形(图2-8)。3评论员群体在焕脑之外区的生殖调控研究发现在人、鼠、犬、猫和猴脑内,开胃素免疫阳性神经元主要位于下丘脑。绵羊的开胃素免疫阳性神经元分布于下丘脑背内侧核、下丘脑外侧区、未定带和穹隆周核,少数细胞位于下丘脑后区。在大鼠脑内,开胃素神经元胞体仅见于下丘脑,双侧对称地位于下丘脑外侧区,可能主要在穹隆周区。散在的开胃素神经元胞体也见于正中隆起、下丘脑后部、背侧部、背内侧部、弓状核和subincertal核。本研究结果与在啮齿类和绵羊上获得的结果有诸多相似之处,但也存在一些差异,如开胃素A在猪视前内侧区、室周核、室旁核、视上核、乳头体核和下丘脑前区等部位分布,文献中未见报道。实验结果的异同,既说明开胃素在种系发生上具有保守性,也反映出种间存在差异。下丘脑腹内侧核、室旁核和外侧下丘脑区属于下丘脑食欲调节网络的“网络中