动物细胞融合与单克隆抗体（46张）

2.2动物细胞工程选修3现代生物科技专题专题2细胞工程2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体一、动物细胞融合请同学们阅读课本P52(一)、概念：

动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞。

动物细胞融合过程示意图不同DNA的两个细胞有丝分裂两个完整的杂交细胞（二）、过程：诱导细胞融合⑴.原理：

与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性。⑵.诱导方式：物理法：电激、振动、离心化学法：聚乙二醇（PEG）生物法：灭活的病毒例如：仙台病毒(三)、动物细胞融合的应用1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、人—鸡、人—蛙、酵母菌—鸡、人—胡萝卜等3、重要用途：制备单克隆抗体。灭活病毒诱导细胞融合的原理：P52生物技术资料卡病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。思考题1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？酶解法，如纤维素酶或果胶酶2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？无需，因为动物细胞无细胞壁离心、电激等物理方法；PEG等化学方法4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？还可以利用灭活的病毒进行诱导有5、动物细胞融合完成的标志是什么？细胞核融合7、动物细胞融合技术的意义？利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞,制造单克隆抗体研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段6、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能8、动物细胞融合有哪些方面的应用吗？突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）、化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜流动性、细胞增殖细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目克服远缘杂交不亲和性的障碍二者的区别除表中所列外，还有培养基的类型和成分，所用的酶等的不同，但二者均需在无菌条件下进行。特别提醒

二、单克隆抗体2.抗体是由何种细胞产生的？效应B细胞（浆细胞）3.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗?每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。4.简述获得抗体的传统途径？从动物血清中分离抗体动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。1、什么是抗体？刺激浆细胞动物体

抗原抗体6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题？5.这种方法获得的抗体有什么缺陷？产量低，纯度低，特异性差体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能够无限增殖杂交瘤细胞人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。二、单克隆抗体1、制备过程：免疫小鼠培养骨髓瘤细胞融合骨髓瘤细胞B淋巴细胞注射特定抗原蛋白选择培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体克隆杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体制备过程示意图多种杂交细胞

单克隆抗体制备过程

注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养或注射到小鼠腹腔单克隆抗体诱导其融合的方法有哪些？两次筛选分别有什么目的？本过程利用了哪些原理？为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？2、有关问题（1）、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理(2)、B淋巴细胞的特点（3）骨髓瘤细胞的特点？一种B淋巴细胞产生一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外不能无限增殖。能无限增殖（4）杂交瘤细胞特点B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到杂交瘤细胞，既能无限增殖，又能产生特异性抗体2、有关问题(5)、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体（6）在整个制备的过程中要经过几次筛选？两次筛选。第一次在B细胞和骨髓瘤细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞；第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。3、单克隆抗体的应用：

①作为诊断试剂。具有准确、高效、简易、快速的优点②用于治疗诊断和运载药物。生物导弹与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。【易误警示】解答单克隆抗体的有关题目时要特别注意以下几点：(1)所用B淋巴细胞是否是经过免疫的B淋巴细胞。(2)细胞融合之后需要经过两次筛选，方可获得能产生单一抗体的杂交瘤细胞。(3)利用单克隆抗体制成的“生物导弹”，其选择性是由抗体决定的，与药物无关。1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？提示：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。

2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？思考与探究P55课后习题1.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A.②④B.①③⑤

C.①②③④

D.②③C2.动物细胞融合和植物原生质融合决定于()

A.细胞膜的流动性B．细胞膜的选择透过性

C.细胞质的流动性D．细胞质酶的活性A3.“生物导弹”是指 （）A.单克隆抗体B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞D.在单克隆抗体上连接抗癌药物

D4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是 （）

A．PEG

B．灭活的病毒C．电刺激D．离心B5、动物细胞融合技术最重要的用途是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞B6.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （）

A.B淋巴细胞B.T淋巴细胞C.骨髓瘤细胞D.杂交瘤细胞DB体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC

4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1).该实验方案的目的是：________________(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？(3).A是从小鼠的脾脏中取得__________该细胞能够产生______。(4).图中B为________________过程，常用_________________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。(5).C过程指细胞培养，该过程包括________培养和__________培养两个阶段B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的

细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）d过程是一个_____________过程，该过程的进行常用_____________或_____________的诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成

种类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是

，其特点是_________________________________________。B

淋巴细胞抗原

细胞融合

聚乙二醇灭活的病毒

选择性3既能无限增殖又能产生特异性抗体

杂交瘤细胞关于单克隆抗体的生产和应用，错误的是(

)A.对小动物注射特定抗原以获取所需的B细胞B.融合并筛选特定的杂交瘤细胞，原代培养产生遗传物质改变后才能进行传代培养C.特定的单克隆抗体可制成试剂，用于检测人体是否受某种抗原的感染D.治疗癌症的“生物导弹”原理之一是利用单克隆抗体的特异性识别癌细胞B下列针对单个杂交瘤细胞的叙述正确的是(

)

①需经筛选过程方可获得②具有双亲细胞的遗传物质③可分泌多种特异性抗体④外培养条件下可大量繁殖．A.①③④B.②③④C.①②③D.①②④D生产单克隆抗体时，要在培养基中加入特定的试剂筛选出杂交瘤细胞．下列可作为这种试剂的是(

)A.能选择性地抑制骨髓瘤细胞DNA复制的试剂B.能激活B淋巴细胞的原癌基因的试剂C.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质合成的试剂D.能抑制B淋巴细胞DNA复制的试剂A能选择性地抑制骨髓瘤细胞DNA复制的试剂，使得小鼠骨髓瘤细胞及自身融合细胞都不能在培养基上生长，而B淋巴细胞以外培养条件下不能无限制增殖，故在选择培养基上能生长的就是杂交瘤细胞，A正确单克隆抗体制备过程中，未涉及到的生物学原理是()A.高度分化的动物细胞核具有全能性B.细胞膜具有一定的流动性C.肿瘤细胞在体外培养时可以无限增殖D.一个浆细胞只能产生一种抗体下列关于单克隆抗体的叙述，正确的是(

)A.培养杂交瘤细胞获得单克隆抗体的过程体现了动物细胞核的全能性B.将抗原注入小鼠体内，小鼠发生免疫反应产生的抗体也称为单克隆抗体C.用灭活的仙台病毒作诱导剂，得到两两融合的细胞均为杂交瘤细胞D.筛选获得所需的杂交瘤细胞后，可在体内或体外培养，进而获得单克隆抗体DA下列有关单克隆抗体制备及其应用的叙述，不正确的是(

)A.制备单克隆抗体运用的技术有动物细胞融合和动物细胞培养B.需要用选择培养基筛选杂交瘤细胞C.需要从杂交瘤细胞中筛选出能产生特定抗体的细胞D.利用生物导弹治疗癌症就是利用了单克隆抗体清除癌细胞植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不相符的是(

)A.原生质体融合和动物细胞融合--生物膜的流动性B.紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养--细胞分裂C.植物组织培养和动物细胞培养--细胞的全能性D.纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理--酶的专一性CD如图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程，有关叙述不正确的是(

)

A.图中实验小鼠注射的甲是能与抗人体胃癌抗体特异性结合的抗原B.利用聚乙二醇、灭活的病毒和电激等方法均可诱导细胞融合获得乙C.用特定的选择培养基对乙筛选，融合细胞均能生长，未融合细胞均不能生长D.丙需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选后可获得大量能分泌所需抗体的丁C用特定的选择培养基对乙筛选，融合具有同种核的细胞和未融合细胞均不能生长，只有融合的杂种细胞能生长，C错误利用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体．下列相关叙述正确的是(

)A.用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体B.体外培养单个浆细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体C.将等量浆细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱导融合后的细胞不一定为杂交瘤细胞D.用该抗体与SARS核衣壳蛋白特异性结合的方法不一定能诊断出该病毒感染者C“生物导弹”是指(

)A.连接单克隆抗体的T淋巴细胞B.连接抗癌药物的单克隆抗体C.产生特定抗体的B淋巴细胞D.产生特定淋巴因子的T淋巴细胞B下列有关现代生物科技的叙述中，错误的是(

)A.植物体细胞杂交技术克服了不同生物远缘杂交不亲和的障碍B.动物细胞融合技术开辟了制备单克隆抗体的新途径C.利用基因工程技术可以使哺乳动物生产人类所需的药品D.动物体细胞核移植技术体现了动物体细胞具有全能性D关于单克隆抗体的应用不正确的是(

)A.具有准确、高效、简易、快速的特点B.可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病C.可制成“生物导弹”D.不能单独使用，必须与药物结合使用D下列关于细胞工程的有关叙述，不正确的是(

)A.利用花药离体培养得到单倍体植株，从紫草的愈伤组织中提取紫草素，利用细胞工程培育“番茄-马铃薯”杂种植株，都利用了植物组织培养技术B.在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中会发生细胞脱分化，可能会发生染色体变异或基因突变C.动物细胞融合与植物体细胞杂交相比，诱导融合的方法，所用的技术手段，所依据的原理均相同，都能形成杂种细胞和杂种个体D.单克隆抗体的制备过程中诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞的方法有物理或化学方法、灭活病毒C用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是(

)A.将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B.从小鼠的胰脏中提取出B淋巴细胞C.用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D.第二次筛选的目的是选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，培养后提取单克隆抗体B新技术的建立和利用对生物学的发展至关重要．下列技术(或仪器)与应用匹配正确的是(

)A.PCR技术--扩增蛋白质B.杂交瘤技术--制备单克隆抗体C.光学显微镜--观察叶绿体的基粒D.花药的离体培养--培育多倍体植物B生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话．如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下提供的“复生”野驴个体的方法中能够成功的是(

)A.将野驴的体细胞取出，利用细胞培养技术，可培育成新个体B.将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体C.取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体D.将野驴的一个基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体CA某实验室做了如图所示的实验研究．下列相关叙述，正确的是(

)

A.过程④产生的单抗，不需细胞膜上载体蛋白的协助就能释放到细胞外B.与纤维母细胞相比，过程①形成的诱导干细胞的全能性较低C.过程②是诱导干细胞的结构和遗传物质发生稳定性差异的过程D.每个Y细胞只产生一种抗体，故过程③不需用选择性培养基进行筛选D下列技术或方法与原理相符的是（）A．人参细胞培养和杂交瘤细胞的培养--细胞全能性B．植物组织培养和制备单克隆抗体--细胞增殖C．纤维素酶、果胶酶处理植物细胞壁--酶的高效性D．原生质体融合和动物细胞融合--细胞膜的流动性下列关于动物细胞融合与单克隆抗体制备的叙述中，正确的是（）A．动物细胞经PEG诱导融合后再通过培养能得到优良动物个体B．单克隆抗体最广泛的用途是体外诊断试剂C．杂交瘤细胞实质上就是癌变的浆细胞D．单克隆抗体和传统方法生产的抗体化学本质不同B下图是研究人员利用供体生物DNA中无限增殖调控基因制备单克隆抗体的思路流程．下列相关叙述正确的是（）CA．酶a、酶b作用位点分别为氢键和磷酸二酯键B．Ⅰ是经免疫的记忆细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞C．筛选出既能无限增殖又能产生专一抗体的Ⅱ必须通过分子检测D．上述制备单克隆抗体的方法涉及转基因技术和动物细胞核移植技术D下列关于生物工程的叙述，正确的是（）A．在花药离体培养形成愈伤组织的过程中，有可能发生基因的突变和基因重组B．检测目的基因是否导入了受体细胞的方法一般是检测该基因的表达产物C．植物的单倍体育种和多倍体育种都利用了植物组织培养技术D．单克隆抗体的特异性强，但不能单独直接消灭体内的癌细胞已知细胞合成DNA有D和S两