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文档简介
ICS
21
蓝莓常见品种鉴定技术规程
分子标记法
辽宁省市场监督管理局 发
布
...................................................
.............................................................
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............................................................
....................................................
...................
..................................................
本文件按照
《标准化工作导则
归口管理部门通讯地址:辽宁省林业和草原局(沈阳市和平区太原北街号),联系电话:
本文件适用于分子标记技术构建个常见蓝莓品种指纹图谱过程中分子数据采集和
LY/T
聚合酶链反应(
,是以为模板,在聚合酶、引物、
1~6
A
B
℃进行长期保存。
mg
×
,将上清液移至新的离心管中;
×
×
×
i)
冲液(TE),室温放置
×
离心
,将溶液收集到离心管中,以待检测。
V
吸取
检测浓度和是否有
的反应体系:正反向引物(
)各
、模板
ng
℃预变性
将洗净晾干的玻璃板用水平灌胶的方式组装玻璃板,铁夹固定,取
TBE
烯酰胺,
去离子水于烧杯中,加入
TEMED
聚丙烯酰胺加
TEMED)LY/T
方边缘,将电源线正极接下槽,负极接上槽。电压为
V,根据指示剂位置调整时间,电泳到样品与
定胶:将在一起的丙烯酰胺长玻璃板入塑料浅中,加入定液,将璃板在摇
预冷显色液的塑料盘中,并于摇床上缓慢摇动持续显色,直至全部条带出现;
在选取的个常见蓝莓品种中,对对核心引物个蓝EAB
F
将需要进行品种鉴定的材料根据操作程序进行样品准备、提取、质量检测、扩增与
高压灭菌锅(
℃~
℃,最大工作压力
);凝胶自动扫描仪(百万像素);高速冷冻离心机(最大离心力不小于
g);扩增仪(
℃~
℃);多功能酶标仪;恒温水
g
mm
试剂盒、液氮、无水乙醇、琼脂糖、
bp
bp
EDTATEMED)、
g
g
L
g
L
EDTA
L
TBE缓冲液
g三羟基氨基甲烷,
g
EDTA
L
TBE缓冲液
TBE
L
g
mL)
TBE
TEMED
、加水
L
g
L
g
LFCCACCTTCGGTGGTCTCCCRTGGCAGCAGTTGAGGGAACAFTCTCCCTTCTCTCTCTGCACGRACTGTGTTTGTACTTCCGCCCTF:
TGCTTTCCCATTGACCTGCCR:
AGGACGAGATTTG
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