DB3715-T 41-2023 羊肚菌液体菌种制备技术规程

65.020CCS

B

053715 DB

3715/T

—2023羊肚菌液体菌种制备技术规程 聊城市市场监督管理局 发

布DB

3715/T

41—2023 本文件按照GB/T

—《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由聊城市农业农村局提出、组织实施并归口。中心、山东蒙恩现代有限公司。张素芳、王远亮

、赵岑、何小春、苏静、王凤改、王光勇、付成龙。DB

3715/T

41—20231 范围本文件规定了羊肚菌液体菌种制备的术语和定义、生产要求、生产技术和档案管理等要求。本文件适用于羊肚菌液体菌种的制备。2 规范性引用文件文件。GB

150 压力容器GB

5749 生活饮用水卫生标准GB

50073 洁净厂房设计规范NY/T

食用菌菌种生产技术规程NY/T

1935 食用菌栽培基质质量安全要求3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1液体菌种发酵罐

liquid

strain

fermentation

食用菌液体菌种培养的专用发酵设备，设备应符合

GB

要求。3.2接种抢

inoculation

gun将液体菌种按无菌操作要求由发酵罐接种到固体培养机物料上的工具。4 生产要求4.1人员要求工作人员应该保持个人卫生，进液体菌种发酵车间必须穿戴经灭菌处理的工作服、口罩、鞋、帽。4.2 产地环境要求4.2.1 场所要求

NY/T

528

5749要求。4.2.2 厂房要求采用高温高压灭菌，在

℃，压力约

采用高温高压灭菌，在

℃，压力约

条件下保持

30

。培养基冷却至常温，在无菌条件下将

3～4

块

2

cm

的母种菌块接入摇瓶内。厂房设计应符合

NY/T

要求，发酵罐菌种培养室应符合

GB

50073

要求。冷却区应卫生干净、接种区应正压无菌、培养室应能控温、通风。4.3 生产设备与设施4.3.1 生产设备与用具

GB

要求。应具有备用电源。4.3.2 备、制种用的灭菌设施和常规用具。5 生产技术5.1 工艺流程母种制备

→

摇瓶液体菌种制备

→

发酵罐液体菌种生产

→

放罐接种5.2 母种制备母种制备应符合

NY/T

的规定。5.3 摇瓶液体菌种制备5.3.1 培养基制备培养基按下列配方配制，豆粕

%，葡萄糖

2

%，磷酸二氢钾

0.3

%，硫酸镁

0.15

%，原料应符合NY/T

1935

的规定。取定量的纯水放入烧杯，煮沸后将上述原料按比例依次倒入烧杯中完全溶解,培养液，冷却备用。5.3.2 摇瓶装液量采用

1

000

mL

三角瓶，装液量为

500

mL

用纱布和牛皮纸封口。5.3.3 25.3.4 35.3.5 静置

h

后置于恒温摇床，24

℃～

℃、140

r/min～160

r/min

4

d～6

d养液应澄清透明，无杂菌、无异味；镜检无杂菌、菌丝浅白色且色泽均匀、形态正常；菌丝球密度达70

%～80

%，菌丝球较小且均匀（菌球直径小于

0.5

8

，均匀悬浮于液体培养基中，不分层。5.3.6 DB

3715/T

41—2023摇瓶液体菌种若不能及时使用，可在

0

℃～4

℃度低温保藏不超过

10

d。5.4 发酵罐液体菌种生产5.4.1 杂菌检测接种前

2

d

应对摇瓶液体菌种进行检测，用注射器吸取少量菌液注射到培养基斜面上，36

℃培养24

h5.4.2 罐体清洗及注水生产前，严格检测罐体：内检与外检，及时排查问题，确保安全生产。检查后，罐体注入纯净水，器下沿齐平。5.4.3 磨细玉米面

4

5.6

g/L，全麦粉

1.25

，白糖

5

g/L，葡萄糖

6.25

，磷酸二氢钾

0.325

0.19

g/L，0.15

mL/L纯净水搅拌至无颗粒，倒入罐内，最后加入消泡剂。5.4.4 封罐灭菌气压力介于

0.2

Mpa～0.3

Mpa

124

℃～126

0.14

Mpa～0.15

60

(由外向内关)，灭菌完成。5.4.5

0.05

～0.07

气搅拌，罐内温度降到

℃以下时，关闭冷水管、进气和排气阀，罐体压力保持

0.05

。5.4.6

接种前准备卡环并向外拔出约

1

cm，当排气阀有微弱气体排出时，关闭排气阀，准备接种。5.4.7 接种与培养5.4.7.1接种量接种比例为

1：800。5.4.7.2 杀菌消毒5.4.7.3 接种DB

3715/T

41—2023缓捏软管使菌液流入罐内，完毕后用干净的脱脂棉对接种口内壁清理，关闭接种口阀门。5.4.7.4 培养0.01

15

℃～18

℃培养。再培养

2

d～3

d

即可接种，培养的后

3

d，因菌液粘稠，菌丝量增加，宜适当加大通气量搅拌。5.4.7.5 杂菌检测第

4

d

点燃托板上的脱脂棉对取样口火焰封口。取样完后用干净的脱脂棉对取样口内壁清理。样品在

36

养

24

h，无杂菌出现。5.5 放罐接种5.5.1 菌包培养料准备60

%的麦粒，煮熟煮透无白芯；

%玉米芯，玉米芯颗粒大小在

0.8

cm～1

，玉米芯泡透。将煮熟的麦粒用其干重

1.5

%的轻质碳酸钙和

5

‰磷酸二氢钾拌匀，浸泡过的玉米芯用其干重

2

%的轻质碳酸钙拌匀，再将二者拌匀，含水量以

60

%～65

%为宜。用生石灰调

pH

值到

～11

之间。5.5.2 5.5.2.1

包装规格采用

cm×36

cm×0.5

聚丙烯袋包装。5.5.2.2 菌包重量每包重

0.8

kg

左右。5.5.2.3 封口套环+扣盖。5.5.3 菌袋消毒灭菌

持

60

，升温到

℃保持

min，升温到

121

℃，达到灭菌温度保持

min，再焖置

30

。5.5.4 接种环境应符合

GB

50073

要求。5.5.5 接种枪用酒精灯火焰消毒后使用。5.5.6

0.08

Mpa(送气压力为

气阀微开)，雾化好，菌丝生长快，接种量每包

20

～30

，每接种

1

5.5.7 DB

3715/T

41—2023培养温度为

13

℃～

15

d

左右长满菌袋。5.5.8 5

℃～8

℃条件下可保存

d。6 档案管理应建立羊肚菌液体菌种生产记录（见附录A），定期由