诊断学-临床常用免疫学检测

临床常用免疫学检测临床常用免疫学检测包括第一节、

体液免疫检测（Ig、C3)第二节、

细胞免疫检测第三节、

肿瘤标志物检测第四节、

自身抗体检测(RF/ANA/抗ds-DNA)第五节、

感染免疫检测（ASO)第六节、

移植免疫检测第七节、

其他免疫检测

免疫的概念与免疫应答反应免疫（immunity)是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理反应。

免疫防御（immunologicaldefence)

免疫自稳(immunologicalhomeostasis)

免疫监视(immunologicalsurveillance)

免疫的概念与免疫应答反应免疫应答(immuneresponse)是指机体免疫系统接受抗原刺激发生一系列反应，并以排出或分解该抗原为目的的反应过程。

识别阶段

活化阶段

效应阶段临床常用免疫学检测免疫功能体液免疫免疫球蛋白补体细胞免疫T细胞B

细胞NK

细胞临床常用免疫学检测感染免疫学肿瘤标志物自身抗体移植免疫细菌感染免疫病毒感染免疫寄生虫感染性传播疾病免疫体液免疫检测第一节免疫球蛋白(Ig)分类：免疫球蛋白按功能和理化性质不同分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE免疫球蛋白(Ig)IgG含量最多、最主要，占Ig的70%~80%，唯一通过胎盘IgM是有效的凝聚和溶解细胞的因子。最早；最先IgA血清型和分泌型两种IgD功能尚不完全清楚IgE与I型变态反应有关

（0.002%)参考值IgG7.0—16.6g/LIgA0.7—3.5g/LIgM0.5—2.6g/LIgE0.1—0.9mg/L多克隆（Polyclonal)增高：IgGIgAIgM均增高单克隆（Monoclonal)增高：仅某一种Ig增高而其他种不增高增高临床意义多克隆性增高

慢性感染、慢性肝病、自身免疫性疾病（chronicinfection,chronichepatitis,AID)单克隆性增高

免疫增殖性疾病（proliferativedisease)增高临床意义IgG感染性疾病自身免疫病IgA粘膜炎症皮肤病变IgM毒血症感染性疾病早期IgEI型变态反应性疾病寄生虫感染降低临床意义先天性体液免疫缺陷和联合免疫缺陷（先天性无、低丙种球蛋白血症等）获得性肾病综合征（大量流失蛋白）、淋巴瘤、病毒感染、免疫抑制剂应用新生儿和婴幼儿

较低M蛋白（Mprotein)概念M蛋白或称单克隆免疫球蛋白（monoclonalIg)，是一种单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。【参考值】阴性

（蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法）图1-4为多发性骨髓瘤病人的血清蛋白电泳图谱M蛋白临床意义多发性骨髓瘤良性M蛋白血症恶性淋巴瘤半分子病轻链病重链病巨球蛋白血症补体（complement，C）概念：补体是具有酶原活性的糖蛋白，分3组：9种补体成分（C1~C9）；B、D、P、H、I因子；补体调节蛋白，如C1抑制物、C4结合蛋白、促衰变因子等。作用：参与灭火病原体的免疫反应，也可破坏自身组织或自身细胞造成免疫损伤总补体溶血活性（CH50）在50%溶血附近，“S”形曲线最陡，接近一条直线。在此范围内补体活性稍有变动，溶血程度就有明显变化，即是以50%溶血作为反应的终点比以100%溶血作为终点更为敏感，因为该试验被称为补体50%溶血试验，即CH50试验。CH50【参考值】试管法：50-100kU/L【临床意义】主要反映补体经典途径的综合水平增高

见于急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤。降低

见于急性肾小球肾炎、自身免疫性疾病（如SLE）感染性心内膜炎、慢性肝病、肝硬化、遗传性补体成分缺乏症等。补体C1q测定补体C1q是C1的重要组成部分，C1（C1q+2C1r+2C1s）【参考值】：0.18-0.19g/L(ELISA)【临床意义】增高

骨髓炎、RA、痛风等。降低

SLE、混合型结缔组织病、重度营养不良、重度

联合免疫缺陷等。补体C3测定主要由肝脏合成的β2-球蛋白，C3在补体系统各成分中含量最多，是经典途径与旁路途径的关键物质。它也是一种急性时相反应蛋白。【参考值】成人C3：0.8-1.5g/L补体C3测定【临床意义】增高

作为急性时相蛋白，在急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应、急性组织损伤时增高。降低

原料不足：如营养不良合成降低：如慢性肝病消耗：自身免疫性疾病丢失：大面积烧伤等先天性：遗传性C3缺乏症细胞免疫检测第二节淋巴细胞T、B、NK细胞基于其特异的表面标志和功能，又分为若干亚群。细胞免疫检测T细胞免疫检测B细胞免疫检测自然杀伤细胞检测（NKcell）细胞因子检测（cytokine)T细胞分化抗原测定T细胞膜表面有多种特异性抗原WHO（1986年）统称其为白细胞分化抗原（clusterdifferentiation,CD）应用单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后，再与荧光标记二抗（兔或羊抗鼠IgG）反应，在流式细胞仪中计数CD阳性细胞的百分率T细胞分化抗原测定(流式细胞术）CD3+——总T细胞

正常值：61%—85%CD3+CD4+——T辅助细胞（Th）

正常值：28%—58%CD3+CD8+——T抑制细胞（Ts）

正常值：19%—48%CD4+/CD8+正常值(0.9-2.0)/1临床意义CD3+降低：见于自身免疫性疾病，如SLE、类风湿关节炎。CD3+/CD4+降低：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、艾滋病、免疫抑制剂使用等。CD3+/CD8+降低：见于自身免疫性疾病、变态反应性疾病。Th/Ts比值增高：自身免疫性疾病、病毒性感染、变态反应。降低：艾滋病（<0.5)、恶性肿瘤进行期或复发时。CD3+、CD4+、CD8+均高：T细胞型急性淋巴细胞白血病B细胞分化抗原检测CD19为全部B细胞共有的表面标志，B细胞活化后不消失，是最重要的B细胞标记分子。CD22为成熟B细胞的表面标志【临床意义】升高：见于急/慢性淋巴细胞白血病。降低：见于无丙种球蛋白血症、使用化疗或免疫抑

制剂后。自然杀伤细胞免疫检测自然杀伤细胞（NK）介导天然免疫应答，它不依赖抗体和补体即能杀伤靶细胞自然杀伤细胞（NK）活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一细胞因子检测细胞因子（cytokine，CK）是一类由免疫细胞（淋巴细胞、单核巨噬细胞等）和相关细胞（成纤维细胞、内皮细胞等）产生的调节细胞功能的高活性、多功能、低分子蛋白质，属于分泌性蛋白质，不包括免疫球蛋白、补体和一般生理性细胞产物。IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF、IFN肿瘤标志物检测第三节肿瘤标志物肿瘤标志物（tumermarker，TM)是由肿瘤细胞本身合成、释放，或是机体对肿瘤细胞反应而产生或升高的一类物质。存在于血液、细胞、组织或体液中肿瘤的发展与诊断一般肿瘤细胞在癌前病变时，会产生表达肿瘤异常蛋白质。多数肿瘤从癌前病变发展到0.5cm以上的展位性病变需要5y—10y的时间。如果能够在这段时间内运用肿瘤标志物检测技术，早期检测到患者血液中肿瘤所表达的异常蛋白质，就可以早期发现、早期诊断，并获得早期治疗的良好效果。世界卫生组织（WHO）指出：若能早期诊断并及时治疗，90%-95%的肿瘤是可以治愈的TM分类蛋白质类：如AFP、CEA和PSA等。糖脂类：如CA19-9和CA-50等。酶类，如PAP、NSE和AFU等。激素，如HCG、雌激素受体等。其它肿瘤标志物，如核酸、多胺等。甲胎蛋白（AFP）测定甲胎蛋白（AFP）是在胎儿早期,由肝脏和卵黄囊合成的一种血清糖蛋白，出生后，AFP的合成很快受到抑制。细胞恶变后又重新具有分泌AFP的能力对诊断肝细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值参考值血清<25μg/L(RIA、CLIA、ELISA）临床意义1.原发性肝细胞癌，血清AFP增高，常>300μg/L。2.生殖腺胚胎肿瘤(睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤等)、胃癌或胰腺癌时

。3.病毒性肝炎、肝硬化时

，通常AFP<300μg/L。

4.妊娠时3-4个月,7-8个月达高峰,分娩后3周恢复正常。异常

：提示胎儿神经管畸形。癌胚抗原（CEA）胎儿性蛋白，出生后含量极低。广谱、无鉴别价值【参考值】<5μg/L(RIA、CLIA、ELISA）临床意义1.CEA升高主要见于胰腺癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等患者。2.动态观察一般病情好转时,CEA浓度下降,病情加重时可升高.3.结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病、肺气肿及支气管哮喘等也常见CEA轻度升高。4.吸烟影响。前列腺特异抗原（PSA）测定前列腺分泌的单链糖蛋白，存在于前列腺管道的上皮细胞内【临床意义】1.前列腺癌升高，切除术后降低。2.如切除术后不降低则表示复发或转移。前列腺增生或严症时轻度增高。3.当tPSA处于4.0-10.0μg/L时,fPSA/tPSA比值＜0.1提示前列腺癌。4。肛门指检、前列腺按摩、膀胱镜等会升高。其他肿瘤标志物糖链抗原19-9（CA19-9）—胰腺癌、胆囊癌癌抗原125（CA125）—卵巢癌癌抗原15-3（CA15-3）—乳腺癌神经元特异性烯醇化酶—小细胞肺癌肿瘤标志物的合理选用同一种肿瘤可含多种标志物，而一种标志物可出现在多种肿瘤。胃癌：CEA+CA199乳腺癌：CA153+CEA+CA199卵巢癌：CA125+CA724+TPS+AFP第四节自身抗体检测概念自身免疫耐受

Autoimmunetolerance自身免疫

Autoimmunity自身免疫病

Autoimmunedisease,AID自身免疫病检测【临床意义】自身免疫性疾病主要免疫学特征为血清或其它体液中出现高滴度的自身抗体和致敏淋巴细胞，因此通过对自身抗体的检测，可以辅助自身免疫性疾病的诊断。类风湿关节炎（RA）以手脚小关节发病血清和关节滑膜液中类风湿因子一、类风湿因子（RF）RF是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，是一种以变性IgG作为靶抗原的自身抗体RF主要为IgM型抗体，但也有IgG，IgA、IgD、IgE型抗体存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内类风湿因子（RF）--临床意义类风湿关节炎（RA）的阳性率为70%。IgG-滑膜炎、血管炎和关节外症状IgM、IgA-骨质破坏有关，早期升高提示病情严重，预后不良。特异性不高，其他自身免疫疾病、某些感染也见阳性二、抗核抗体（ANA）经典的ANA是以细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称。但现在的概念更为广泛，扩展到整个细胞成分，包括细胞核和细胞浆。无器官与种属特异性。主要是IgG。检测方法：间接免疫荧光法（IIF）SLE抗核抗体（ANA）—临床意义ANA阳性最多见于未治疗的SLE或MCTD，阳性率达95%以上ANA阴性对排除SLE的阴性预告值较高，是SLE最佳筛选试验其他疾病中也可出现阳性。常见ANA荧光图谱及

临床意义核均质型核膜型颗粒型核仁型常见ANA荧光图谱临床意义高滴度核均质型——SLE高滴度核膜型——SLE（活动）高滴度颗粒型——MCTD高滴度核仁型——PSS三、可提取性核抗原

抗体谱测定简称ENA，由多种相对分子质量不同的多肽构成成分主要有ds-DNASm核糖体

Scl-70Jo-1SS-ASS-B、RNP等利用免疫印迹试验可对这些抗原的自身抗体进行检测核型、ENA成分与疾病的关系（P425)可提取性核抗原抗体谱抗Sm抗体:SLE标记抗体抗RNP抗体:MCTD阳性率最高抗SS-A/抗SS-B:干燥综合症（SS）标记性抗体抗Jo-1抗体:最常见于多发性肌炎（PM）与皮肌炎（DM）抗Scl-70:抗体为进行性全身硬化（PSS）的标志抗体四、抗DNA抗体抗DNA(抗体分为:抗ds-DNA:抗双链DNA抗体，见于SLE活动期，阳性率70%-90%。阳性与SLE活动期及狼疮性肾炎发病机制有关。抗ss-DNA：抗单链DNA抗体，见于SLE，阳性率70%-95%，尤其是合并狼疮性肾炎。第五节感染免疫检测一、细菌感染免疫检测血清抗链球菌溶血素“O”测定伤寒、副伤寒沙门菌免疫测定流行性脑脊髓膜炎免疫学测定布氏杆菌病凝集试验幽门螺杆菌抗体测定血清抗链球菌溶血素“O”

（ASO）测定溶血素“O”是由A群溶血性链球菌产生的【参考值】

乳胶凝集法（LAT）：阴性【意义】增高

常见于A组溶血链球菌感染相关疾病，如活动性风湿热、风湿性关节炎、风湿性心肌炎、链球菌感染后急性肾小球肾炎等。ASO在A组溶血链球菌感染后1周开始升高，4~6周达高峰，可持续几个月或几年。伤寒、副伤寒沙门菌免疫测定—肥达反应（WR）肥达反应：利用伤寒和副伤寒沙门菌液为抗原，监测人

体有无相应抗体的一种凝集试验。伤寒沙门菌感染后，菌体“O”抗原和鞭毛“H”抗原能刺激人体产生相应抗体副伤寒杆菌分甲乙丙三型【参考值】伤寒WR—H<1:160;O<1:80

副伤寒WR—甲乙丙均<1:80二、伤寒、副伤寒【临床意义】动态观察WR，持续超过参考值或较原效价升高4倍以上。

O升高，H正常(感染早期\其它沙门菌交叉反应)

O正常，H升高(预防接种、非特异性回忆反应）

O升高，H升高伤寒可能性大二、病毒感染免疫检测TORCHT=Toxopasma，弓形虫O=other(syphilis)，其他病毒R=RubellaVirus,风疹病毒H=Herpessimplex，单纯疱疹病毒因此命名为TORCH检查为妇产科产前的常规检查项目二、病毒感染免疫检测TORCH感染后可造成孕妇流产、死胎，出生后有严重的智力障碍，生活不能自理，造成极大的精神及经济负担由于成人TORCH感染临床症状不明显，无法自我感觉到是否受到感染，因此孕前及孕早期诊断对优生优育十分重要。世界上许多发达国家已经将TORCH列为孕期常规检查项目，在优生优育方面发挥重要作用二、病毒感染免疫检测—临床意义TORCH感染后，患者特异性抗体IgM、IgG可迅速升高，IgM出现早，可持续6-12周，而IgG出现晚，但可持续终生。因此，我们常把IgG阳性看作是既往感染，而IgM阳性则作为初次感染的诊断指标。【临床意义】1.风疹病毒检测

主要损害五官神经系统和智力，新生儿致畸致残80%。2.单纯疱疹病毒Ⅰ型及Ⅱ型损害神经系统3.巨细胞病毒

神经系统和智力障碍

4.弓形虫

，影响出生后远期智力障碍。二、病毒感染免疫检测汉坦病毒抗体IgM测定

又称肾综合征出血热病毒抗体检测特异性IgM-感染后2~4天检出，7~10天达高峰。

流行性乙型脑炎病毒抗体测定恢复期血清抗体滴度比急性期高4倍柯萨奇病毒抗体和RNA小RNA病毒轮状病毒抗体和RNA测定婴幼儿腹泻约有50%由其所致三

、寄生虫感染免疫检测日本血吸虫抗体测定IgE、IgM阳性提示病程处于早期，早期诊断的标志IgG是恢复期。囊虫抗体测定IgG阳性见于囊虫病疟原虫抗体和抗原测定

抗体阳性提示近期有疟原虫感染。四、性传播疾病免疫检测（一）衣原体抗体测定

包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体，沙眼衣原体是性传播疾病中常见的病原体之一。（二）支原体的血清学测定

对人致病的主要是肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体和生殖道支原体。（三）梅毒螺旋体抗体测定

定性试验：快速血浆反应素试验、不加热血清反应素试验及性病研究实验室试验；

确诊试验：梅毒螺旋体血凝试验及荧光螺旋体抗体吸收试验。四、性传播疾病免疫检测（四）淋球菌血清学测定和DNA测定

协同凝集试验及PCR试验（五）人获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定

筛选试验：ELISA和快速蛋白印迹法；确诊试验：蛋白印迹法和RT-PCR。四、人获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定—临床意义筛选试验阳性的患者，加以确认试验阳性，若伴有临床症状，可诊断为艾滋病筛选试验阳性的患者，加以确认试验阳性，若无临床症状，则为HIV感染者第六节移植免疫检测移植免疫检测概念

在组织移植或器官移植中，受者接受供者移植物后，受者的免疫系统与供者的移植物相互作用而发生的免疫应答，成为移植免疫。移植免疫检测移植类型根据移植物来源不同分为自体移植同系移植同种（异体）移植异种移植移植免疫检测排斥反应：排斥反应的靶抗原即为组织相容性抗原。组织相容性抗原分为：主要组织相容性抗原、次要组织相容性抗原、其他参与排斥反应发生的抗原排斥反应类型：宿主抗移植物反应（HVGR)；移植物抗宿主反应(GVHR).移植免疫检测HLA是由基因复合体所编码复杂系统，主要包括HLA-A、HLA-B、HLA-D、HLA-DR。受体与供体HLA-A、HLA-B、HLA-D、HLA-DR完全匹配者，移植物的存活率显著高于不匹配者或部分匹配者。其中HLA-DR尤为重要HLA配型分子生物学技术有：PCR-限制性片段长度多态性、PCR-序列特异性引物、基因芯片等。第七节其他免疫检测一、循环免疫复合物检验概念：体内游离抗原与相应的抗体形成抗原抗体复合物，即免疫复合物（immunocomplex，IC)。血循环中的免疫复合物（circulatingimmunocomplex,CIC)为相对分子量小的复合物（<19S）可在被检测。CIC增高—见于自身免疫病、感染、肿瘤、移植、变反应等。二、冷球蛋白检测冷球蛋白是指温度低于30℃时易自发沉淀，加温后又可溶解的免疫球蛋白。不包括冷纤维蛋白原、C-反应蛋白与清蛋白的复合物以及肝素沉淀蛋白等。

【临床意义】