天然锁阳与栽培锁阳对小鼠老化相关酶及果蝇寿命的影响

天然锁阳与栽培锁阳对小鼠老化相关酶及果蝇寿命的影响

锁阳是锁定科的根生植物锁阳科。蒙古语名“铀高度重视”。它具有“共同的一天”、消食和健身的作用。用于治疗头痛、阳痿、股关节、膝关节、早泄和其他疾病。据文献报道锁阳主要化学成分有鞣质、氨基酸及23种微量元素,具有抗衰老作用。近年来由于过度采挖,使天然锁阳资源遭到严重破坏。有关专家为此进行了人工栽培锁阳的试验,为研究人工栽培锁阳的可行性,我们进行了如下实验。1材料和机器1.1材料天然锁阳:采自内蒙古伊克昭盟杭锦旗;栽培锁阳:采自内蒙古伊克昭盟东胜市曼赖乡;人参:市售。1.2动物昆明种小鼠(〈京动字〉)(第8806M035号)由内蒙古大学实验动物中心提供。1.3a、过氧化氢酶活性及cat测定SOD测定试剂盒(批号:20000327)、MDA测定试剂盒(批号:20000308)、过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒(批号:20000314)(南京建成生物工程研究所生产);其它试剂为分析纯。1.4tu-1221型的紫外分光光度计十万分之一电子天平(METTLERAE240瑞士);百分之一电子动物天平(METTLERPE6000瑞士);TU-1221型紫外分光光度计(北京);SC-15型恒温水浴箱(上海天平仪器厂);离心机。2方法和结果2.1小鼠血清中mda、cat活力测定2.1.1分组及给药方法:取小鼠60只(20±2g)雌雄各半,随机分为6组:阳性对照组(0.1g/20g);天然锁阳高剂量组(0.5g/20g);天然锁阳低剂量组(0.25g/20g);栽培锁阳高剂量组(0.5g/20g);栽培锁阳低剂量组(0.25g/20g);空白对照组(同体积水)。以上各组连续给药5天,于第5天给药40分钟后,分别进行以下实验。2.1.2小鼠血清中SOD的测定:小鼠眼眶取血,离心10分钟(2000转/min)。取血清5μl,加SOD试剂,充分混匀,37℃恒温水浴40分钟,加入2ml显色剂,用紫外分光光度计在540nm处测其吸光度,根据公式:SOD活力(NU/ml)=对照管吸光度−测定管吸光度对照管吸光度÷50％×(ΝU/ml)=对照管吸光度-测定管吸光度对照管吸光度÷50％×稀释倍数算出血清SOD活力,并且将结果进行t检验。结果见表1。由实验可看出给药组小鼠血清SOD活力与空白组有显著性差异,天然锁阳与栽培锁阳有提高小鼠血清SOD活力,促进小鼠清除超氧阴离子自由基(O-2)的作用。而天然锁阳与栽培锁阳在此方面的作用无显著性差异。2.1.3小鼠血清中丙二醛含量的测定:小鼠眼眶取血,2000转/min离心10分钟,得到血清。取100μl血清与4mlMDA试剂加入试管,充分混匀,在95℃水浴40分钟,3500~4000转/min离心10分钟,在紫外分光光度计532nm处测定吸光度,同法测定标准对照管、空白对照管吸光度后,按公式计算结果:丙二醛含量(nmol/ml)=测定管吸光度−测定空白管吸光度标准管吸光度−标准空白管吸光度×10(nmol/ml)=测定管吸光度-测定空白管吸光度标准管吸光度-标准空白管吸光度×10nmol/ml×样品测定前稀释倍数,将结果进行t检验,结果见表2。实验结果表明:给药组和空白组小鼠血清中MDA含量有显著性差异。天然和栽培锁阳能降低小鼠血清中MDA含量,天然和栽培锁阳对小鼠血清中MDA的影响无显著性差异。2.1.4小鼠血红细胞中CAT活力测定:小鼠眼眶取血,加双蒸水配成1∶50的溶血液。取溶血液20μl,将预温至25℃的CAT试剂3ml(底物溶液吸收值在0.5~0.55)加入比色皿中,紫外分光光度计240nm处测定吸光度,记下OD1值,1分钟时立即再测1次吸光度,记下OD2值、计算公式:CAT活力=logOD1[注1]OD2×2.303[注2]60[注3]×A[注4]÷B[注5]=logΟD1[注1]ΟD2×2.303[注2]60[注3]×A[注4]÷B[注5][注1]OD1:240nm处零时吸光度,OD2:240nm处1分钟时吸光度。[注2]2.303从自然对数换算成常用对数log时必须乘以2.303。[注3]60秒。[注4]A为血红蛋白稀释倍数。[注5]B为每ml血红蛋白克数。*Hb测定:取Hb稀释液5ml(配制方法见文献5)加全血20μl,混匀,在540nm处测定吸收值,血红蛋白g/L=吸光度×367.7将结果进行t检验,结果见表3。实验结果:给药组对小鼠血红蛋白中过氧化氢酶活力无明显作用,与空白组相比无显著性差异。天然锁阳和栽培锁阳对小鼠血红蛋白中过氧化氢酶活力影响无显著性差异。2.2培养基配方对果蝇生长和免疫的影响新孵化的果蝇80只,雌雄各半,分别置培养管中培养。培养方法参照(4)略作修改,培养温度为25℃,湿度60%~70%,基础培养基配方为:玉米粉8.4%,酵母粉0.84%,蔗糖6.2%,琼脂粉0.625,苯甲酸钠0.1%,受试药物按比例加入培养基,每日观察果蝇生长情况,定期更换培养基,记录果蝇死亡日期并进行t检验。试验表明:锁阳可延长果蝇生存时间,且栽培锁阳与天然锁阳对果蝇寿命的作用无差异。3锁阳清除羟自由基的作用衰老现象是一个复杂的生物代谢过程。从分子生物学水平来看,英国人Harman提出了自由基学说。自由基为细胞代谢过程中连续不断产生的具有高度活性的物质,它对机体具有损害作用。自由基及其诱导的氧化反应会引起膜损伤和交联键的形成,其结果降低了酶的活性,使核酸代谢发生误差,溶酶体内衰老色素堆积,致使细胞老化,从而引起人体衰老。通过实验,我们发现天然锁阳和栽培锁阳能够提高SOD活性、清除自由基,降低MDA含量、提高LPO酶活性,起到抗衰老的作用。SOD是体内重要的含Zn、Fe、Mn的蛋白质,SOD的活力增强,能够增强机体对自由基的防御能力,延缓了生物的老化。实验表明,天然锁阳和栽培锁阳都能显著提高小鼠血清中SOD的活力,两者相比无显著性差异。MDA是机体脂质过氧化作用重要的代谢产物,它能引起细胞代谢或功能障碍引起细胞损伤。MDA的高低间接的反应了机体细胞受自由基攻击的损伤程度。天然锁阳和栽培锁阳能够明显减少小鼠血清中MDA的含量,即减少了细胞的损伤程度。CAT是机体内重要的抗氧化酶,能够分解氢氧自由基(OH)。通过实验,我们对小鼠血红细胞中过氧化氢酶(CAT)的活力进行了测定。结果发现,天然锁阳和栽培锁阳对CAT的活力无明显影响,但据文献报