黄芪多糖对溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群失调的调整作用

黄芪多糖对溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群失调的调整作用

近年来，蝗性胃炎的发病率有所增加。临床上常用柳树磺酰胺（sasp）和糖皮质激素治疗，但副作用大，容易复发。减少或避免治疗新型药物的副作用已成为研究的重点之一。本实验根据部分补益类中药具有扶植肠道正常菌群生长、调节菌群失调、提高定植抗力功能,可起到益生元的作用的机理,选取黄芪多糖作为治疗药物,从微生态学角度探讨其对溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群失调的调整作用。1实验材料1.1实验动物Wistar大鼠60只,体重180~220g,雌雄各半,由牡丹江医学院动物实验中心提供。1.2培养基和培养基乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸标准品(美国Sigma公司),丽珠肠乐(珠海丽珠集团丽珠制药厂),培养基(青岛海博生物有限公司),2,4,6三硝基苯磺酸(TNBS)(Sigma公司),黄芪多糖(上海日升生物技术有限公司)。2实验方法2.1治疗前药试验组10只60只大鼠随机分为模型组(10只),正常对照组(20只),自然恢复组(10只),丽珠肠乐组(10只),黄芪多糖中药组(简称中药组)(10只)。2.2大鼠结肠tnbs和乙醇液的制备除正常对照组外,其余各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.2ml/1009)将大鼠麻醉,固定。将外径2.0mm、长约15cm的输液管(输液管先用液体石蜡油润滑),从大鼠肛门逆行插入结肠内深约8.0cm处,一次性将100mg/kgTNBS和50%乙醇的TNBS/乙醇液0.25ml注入大鼠结肠内,用棉签堵住大鼠肛门,轻揉大鼠腹部lmin,使TNBS/乙醇液均匀地与大鼠结肠粘膜接触。然后将大鼠头向下,身体倾斜45°,放置lmin,再将大鼠放平。对照组用同样方法,0.25ml生理盐水灌肠,均自然清醒。3d后,处死造模组大鼠和10只正常对照组大鼠,剪取直肠和结肠组织,清洗后肉眼观察结肠组织,并取肠段(10%甲醛溶液中固定)作组织切片以确定造模是否成功。2.3灌胃药物治疗中药组采用黄芪多糖进行灌胃治疗(黄芪多糖浓度为0.2g/ml生药量),丽珠肠乐组用丽珠肠乐灌胃治疗,自然恢复和正常对照组用生理盐水灌胃,以上各组灌胃量均为每次0.3ml,每天两次,连续7d后处死进行指标检测。2.4指标检测2.4.1发酵在距大鼠回盲部末端10cm以内,无菌采取盲肠内容物0.1g,将上述采集的标本,应用无菌生理盐水进行10倍系列稀释至10-9倍。不同稀释度标本滴种培养48h后进行菌落计数。2.4.2色谱分析测定无菌条件下取0.05g盲肠内容物,立即放入无菌玻璃试管中,溶于1ml蒸馏水中,加50%硫酸0.1ml、乙醚0.5ml盖紧塞子,取1μl作色谱分析。将样本注入进样器后,仪器自动采集数据并送到1200工作站积分处理并作出色谱图,其中记录各有机酸的出峰顺序、保留时间、峰高、峰面积百分比。2.4.3菌落计数压将大鼠在无菌条件下取肝组织0.lg,置于无菌匀浆器中,加0.9ml生理盐水匀浆,将标本稀释至10-3,用微量加样器吸取标本20μl滴种在中国兰培养基上,置于37℃温箱中培养24h后进行菌落计数。3统计分析工具实验数据结果采用表示,试验数据使用SPSS16.0数据分析软件作统计分析,P>0.05表示差异不显著,P<0.05表示差异显著,P<0.01表示差异极显著。4结果4.1急性炎细胞感染模型组肉眼观察显示结肠粘膜充血、水肿、糜烂、出血、溃疡,显微镜下显示隐窝有急性炎细胞浸润,固有膜内有慢性炎细胞浸润。正常对照组大鼠结肠粘膜组织肉眼观察和显微镜下均显示正常。4.2不同统计学处理的差异p>0.05从表1可以看出,模型组与正常组相比,双歧杆菌和乳酸杆菌数量明显下降,肠杆菌和肠球菌数量显著上升,且差异具有统计学意义(P<0.05)。经7d治疗后,中药组与丽珠肠乐组双歧杆菌和乳酸杆菌的数量均明显上升,肠球菌和肠杆菌的数量明显下降,相比自然恢复组具有显著差异(P<0.05),中药组与丽珠肠乐组之间的差别具有统计学意义(P<0.05),其对肠道微生态失调的调整作用中药优于丽珠肠乐。4.3下降且降低从表2可以看出,模型组与正常组相比,乙酸含量显著下降,且差异具有统计学意义(P<0.05)。经7d治疗后,中药组与丽珠肠乐组乙酸含量显著上升,与自然恢复组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。4.4不同中药组与丽珠肠乐组肠杆菌数量变化比较从表3可以看出,模型组与正常组相比,肠杆菌数量明显上升(P<0.05)。经7d治疗后,中药组与丽珠肠乐组肠杆菌数量显著上升下降,相比自然恢复组具有显著差异(P<0.05),中药组与丽珠肠乐组之间的差别具有统计学意义(P<0.05),中药组降低肠杆菌易位的作用优于丽珠肠乐组。5讨论5.1赖同时依赖关系与赖后相互制约机体与其正常菌群作为一个整体存在,它们既相互依赖又相互制约。黄芪多糖对双歧杆菌、乳酸杆菌数量的升高具有明显促进作用,可以降低肠杆菌、肠球菌的数量,可见黄芪多糖可以显著改善肠道微生态失调。5.2黄棕榈糖对厌氧菌代谢产物中醋酸含量的影响5.3不同时期自然恢复组与自然恢复组的比较经过7d治疗,大鼠肝脏细菌易位数量大幅度下降,与同时期自然恢复组相比,差异有极显著性,说明黄芪多糖能有效控制肝脏的需氧菌易位。其机制可能是通过增强网状内皮系统的吞噬能力和机体免疫力来完成的。5.4扶正固本类中药黄芪多糖与丽珠肠乐对微生态失调大鼠均具有调整菌群失调的作用,但从检测指标的结果比较中可以看出黄芪多糖的作用优于丽珠肠乐(活菌制剂),其原因可能与中药双向性调节有关。