针灸治疗单纯性肥胖患者的肠道菌群分析

针灸治疗单纯性肥胖患者的肠道菌群分析

胖是由能量代谢平衡失衡、摄入过多和（或）能耗不足引起的，以及体内脂肪的过度积聚引起的体重超过特定区域的营养和代谢障碍引起的。我国成人超重率为22.8%,肥胖率为7.1%,肥胖症已经严重影响人们的生活。近年报道发现肥胖与肠道菌群失调密切相关,而针灸减肥以其副反应小、安全等优势受到国内外广泛关注。但针灸减肥是否能调控肠道菌群,尚缺乏研究。本文通过对单纯性肥胖患者进行针灸治疗,选取临床治愈及显效患者,以及年龄、性别相匹配的健康志愿者,分析其肠道菌群的变化规律。现将报告如下。1数据和方法1.1病例选择选择标准本研究的全部病例均来源于2009年5月～2010年10月成都中医药大学附属医院针灸门诊收治的患者36例,其中男12例,女24例,年龄20～60岁,平均年龄39.89±12.88岁。参照1997年第五届全国肥胖病研究学术会议制定的单纯性肥胖症诊断标准,纳入病例。入选者纳入标准:体重指数(BMI)≥25kg/m2;治疗前3个月没有服用减肥药;排除标准:合并有心脑血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病;长期使用激素类药物、口服避孕药者;肥胖呈急性过程,过敏体质或晕针者。1.2穴位同证治疗对单纯性肥胖患者首先进行辨证分型,基于中医诊断结果选取中脘、水分、气海、天枢、大横、水道、肾俞、脾俞等穴位,并随证加减。留针30分钟,隔天针灸1次,10次为1疗程。间隔5天后,开始下一个疗程,共治疗3个疗程。在治疗前及每个疗程后收集患者大便标本,进行肠道菌群培养,同时记录体重。1.3体质量下降疗效疗效评定标准:按照《中药新药治疗肥胖病的临床研究指导原则》中单纯性肥胖病的疗效评定标准。近期痊愈:体质量下降已达到标准体质量或超质量范围内,有关症状消失,持续3个月以上。显效:体质量下降5kg以上或脂肪百分率下降5%以上,有关症状基本消失。有效:体质量下降3kg以上或脂肪百分率下降l%以上,有关症状减轻。无效:体质量下降未达3kg及脂肪百分率下降未达1%,有关症状未减轻。2实验方法菌群检测与方法,参考丁维俊等的文献完成操作。2.1样本收集和保存在清晨收集患者和健康志愿者的粪便标本约0.5g置于盛有4.5ml硫乙醇酸盐转运液试管中,将标本冻存于-150℃的冰箱中保存备用。2.2前及治疗后的大样选择针灸治疗痊愈/显效者的患者治疗前及治疗后的大便样本。同时选取年龄、性别与生活状态相匹配的健康志愿者,收集其大便标本,完成实验研究。2.3厌氧培养箱dy-型医用培养箱(HHB11420型,江苏连云港市墟沟电器厂);厌氧培养箱(DY-Ⅱ型,浙江义乌冷冻机总厂);隔水式电热恒温培养箱(pc370型,上海跃进医疗器械厂)、电热恒温水浴箱(SSH-W21～600型,天津市泰斯特仪器有限公司)。2.4培养基的设置将样本置于37℃的电热恒温水浴箱解冻,称取0.1g置于盛有0.9ml稀释液的试管中做对数稀释,然后做系列对数稀释到10-7。选取不同浓度的稀释液进行接种培养。需氧菌:需氧菌总数(营养血平板)选择10-4、10-5、10-6稀释度;大肠杆菌(EMB培养基)选择10-3、10-4、10-5稀释度;肠球菌(EC培养基)选择10-1、10-2、10-3稀释度。厌氧菌:厌氧菌总数(GAM培养基)选择10-5、10-6、10-7稀释度;双歧杆菌(改良BS琼脂)选择10-4、10-5、10-6稀释度;乳酸杆菌(LBs乳酸杆菌培养基)选择10-4、10-5、10-6稀释度;类杆菌(卡那霉素-万古霉素血琼脂)选择10-4、10-5、10-6稀释度。用移液器吸取不同稀释度的细菌样本液各20μl,滴于培养基表面,每个稀释度作3个平行样,将已接种好的培养皿分别放入37℃需氧和厌氧培养箱中培养24～72h。2.5单位cfu的对数值lg菌落计数:计数培养皿表面的菌落数×稀释倍数,即得到每g粪便标本的菌落形成单位(CFU)的对数值(lg)表示。种类鉴定:根据细菌形态学、菌落、菌细胞和菌落形态、染色性及生化实验鉴定特征,需氧菌和真菌的鉴定参考《临床微生物学和微生物检验》,厌氧菌鉴定参考白杰氏细菌鉴定手册。2.6xs检验采用SPSS11.5统计分析软件。各数据用x¯±sx¯±s表示,组内比较采用配对T检验,组间比较采用成组T检验,并给出相应P值,以P<0.05作为有显著性标准。3结果3.1“虚”以湿阻、脾肾两虚、胃热湿阻以及阴虚内热型本次收集的36例单纯性肥胖症患者,其主要证型有脾虚湿阻、脾肾两虚、胃热湿阻及阴虚内热型。经过3个疗程的治疗,临床痊愈1例,显效13例,有效12例,无效10例,有效率72.22%。3.2针刺治疗前后,双歧杆菌和乳酸杆菌检测结果比较见表1～3。表1显示,针刺治疗前与健康组比较肥胖患者肠道菌群:需氧菌总数、厌氧菌总数、大肠杆菌、类杆菌,均减少(P<0.01)。肠球菌增加(P<0.01);双歧杆菌与乳酸杆菌的检测结果显示两组间没有显著性差异(P>0.01)。如表2所示,针刺治疗前后,肥胖患者肠道菌群:需氧菌总数、肠球菌、厌氧菌总数,均显著减少(P<0.01);类杆菌明显增加(P<0.01)。值得注意的是,双歧杆菌、乳酸杆菌未见趋势线变化。表3显示针刺治疗后,肥胖患者肠道菌群与健康组比较显示:需氧菌总数、厌氧菌总数、大肠杆菌均减少(P<0.01)。4国外情况分析单纯性肥胖是热量摄入超过消耗而导致脂肪组织过剩,肥胖症不仅影响了形体美,而且与许多致命性疾病相关,因此对于肥胖症的治疗已经成为国内外医学界的研究课题。中医认为,肥胖病多为本虚标实之候,本虚多为气虚,标实为痰湿内停,本病与脾关系最为密切,但病久则累及于肾。针灸减肥的机制,主要是通过针刺腧穴,疏通经络,加强脾肾的功能,扶正祛邪,从而达到减肥的目的。针灸减肥的机理研究发现针灸可能通过对中枢“食欲调节网络”的多方位调节、对机体消化吸收与代谢功能的调节、以及对机体消化吸收功能的调节而达到减肥的作用。在针灸减肥临床上还没有统一的辨证分型,有的报道没有分型,有的分3个型,有的分10多个型,有的证下还有型。但多以1997年召开的第五届肥胖病研究学术会议上通过的5型分型法,即脾虚湿阻型、胃热湿阻型、肝郁气滞型、脾肾两虚型及阴虚内热型。而在本次收集的病例中发现肥胖患者的证型有:脾虚湿阻型、脾肾两虚型、胃热湿阻型及阴虚内热型,与报道一致。其中,脾虚湿阻型的单纯性肥胖症的患者最多,达到18例,这可能与肥胖症发生的病机有关。李晶等认为脾虚痰湿是肥胖病发生的实质,脾运失健,所纳入之谷不能转化成营养物质运送到周身,反酿成痰湿,痰湿日积月累则成肥胖。但因为每个证型的人数较少,故本次实验没有以证型分组。近年来,肠道菌群与肥胖的关系是西医研究的热点。人类消化道有约1×1014个活细菌,其种类有100种以上。人类的消化道就如同自然界一样也属于一个生态系统,在胃肠道不同的部位,栖息着不同种类、数量的细菌,它们相互间的比例有着很大的差别,而且容易受到各种因素的影响而发生变化。研究显示肥胖会影响肠道微生物多样性和群落结构。戈登等发现肠道无菌鼠食量比普通鼠多29%,但脂肪却少40%;将正常鼠和肥胖鼠的肠道菌群移植入无菌鼠后,尽管其食量有明显下降,植入肥胖鼠肠道菌群者体重增加47%,植入正常鼠肠道菌群者也增加27%。本实验首次基于对单纯性肥胖患者和健康人大便中肠道菌群在数量上的差异,探讨针灸减肥过程中肠道菌群的变化规律。通过对这14例病例的大便标本进行细菌培养的结果发现单纯性肥胖患者和健康人比较,其肠球菌明显高于健康组,而类杆菌低于健康组;在治疗三个疗程后肠球菌明显减少,类杆菌明显增多,且治疗后肠球菌及类杆菌的数量与健康组无明显差异。但这与刘祥等报道的乳酸杆菌对脂肪积累和肥胖起抑制作用有一定差异。这可能与活菌培养法检测肠道菌群的工作量大,标本放置时间较长,导致其他菌群不能完全保存,而肠球菌具有正常人肠道内定植,环境表面存活时间较长,抵抗力及耐药性较强的特点有关。袁杰利等发现屎肠球菌对高血脂大鼠的血脂具有调节作用,而本次实验发现肠球菌对肥胖有促进作用,对其原因笔者将做进一步的研究。但是此次实验结果发现肥胖患者与健康人的肠道菌群确实存在差异,与相关报道的研究结果一致,但是对于肠球菌和类杆菌等指标,目前还缺少相关报道。实验结果提示针灸减肥过程