hplc测定玉龙美腮颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量

hplc测定玉龙美腮颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量

七宝美赞是在明代邵英节传的七宝美赞基础上发展起来的，经过最新的现代科学工艺，开发出具有调理肝肾功能的药物。七宝美髯颗粒由滋补肝肾类药组成,有制何首乌、当归、补骨脂、枸杞子、菟丝子、茯苓等中药,经提取加工制成,用于肝肾不足、须发早白、头眩耳鸣、腰酸背痛等症。其中,补骨脂与枸杞子、菟丝子、怀牛膝,同为臣药,能双补肾之阴阳,补骨脂素、异补骨脂素为补骨脂的主要活性成分。目前虽有七宝美髯颗粒的质量研究,但尚未对该药中的补骨脂活性成分进行测定,为了进一步完善七宝美髯颗粒的标准,更好地控制该制剂的质量,本文采用液相色谱法对制剂中的补骨脂素与异补骨酯素。1药品与药品层面高效液相色谱仪(Shimadzu20A);电子天平(MetlerAB265-S);紫外分光光度计(岛津UV-2450);补骨脂素(批号:110739-200309)、异补骨脂素(批号:110738-200410)对照品购自中国食品药品检定研究院;七宝美髯颗粒(批号:120305,120612,120820);制何首乌、当归、补骨脂、枸杞子、菟丝子、茯苓、牛膝均购自广州市同健医药连锁有限公司;甲醇(色谱纯,OCEANPAK);水为纯化水。2方法和结果2.1流动相、检测波长色谱柱:DiamonsilC18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-水(55∶45);流速:1.0mL/min;检测波长:246nm;柱温:室温;进样量:10μL。2.2溶液的制备2.2.1成分配液的制备精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品分别为10.6mg和11.3mg,置100mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成浓度分别为106μg/mL和113μg/mL的储备液。精密吸取储备液5mL置25mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,得到浓度分别为21.2μg/mL和22.6μg/mL的补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品溶液。2.2.2样品溶液的制备精密量取本品2.0g置10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。2.2.3阴性对照溶液取处方中除补骨脂外的其余中药,参考2010年版中国药典,按七宝美髯颗粒的工艺制备不含补骨脂的阴性对照制剂,按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。2.3对照品溶液的确定分别以补骨脂素对照品溶液、异补骨脂素对照品溶液在200～400nm波长范围内扫描,结果补骨脂素对照品在波长为246nm处有最大吸收,异补骨脂素对照品溶液在247nm处有最大吸收。故以247nm作为补骨脂素、异补骨脂素的检测波长。2.4柱温的选择和柱压的确定固定色谱柱和梯度条件,设定不同柱温考察其对所得色谱图的影响,结果见表1。虽然较低的柱温有利于补骨脂素和异补骨脂素两峰的分离,但是本地区在多数天气情况下20℃的柱温,需要配备可降温的柱温箱,柱压较高也不利于仪器的维护,因此选择30℃为柱温,分离可满足定量分离需要,柱压适中。在夏天,实验室超过30℃时,如果柱温箱不能降温,建议保持空调降温。2.5色谱图的保留时间精密量取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液注入液相色谱仪中,按照色谱条件分别进样,进样量为10μL,记录色谱图,在与对照品色谱图主峰相同的保留时间上,供试品溶液有对应峰显示,阴性对照溶液无对应峰。结果表明,阴性溶液对检测结果无干扰,结果见图1。2.6标准曲线的绘制精密吸取补骨脂素、异补骨脂素对照品储备液适量,用甲醇分别稀释成浓度为10.6、15.9、21.2、31.8、42.4μg/mL和11.3、16.9、22.6、33.9、45.2μg/mL,注入液相色谱仪中,按前述色谱条件测定,以峰面积(Y)为纵坐标,进样量(X)为横坐标,绘制标准曲线,回归方程分别为:补骨脂素:Y1=2900.9X1+3.5×10-11(r1=0.9999),异补骨脂素:Y1=77.356X1+3.3014(r2=1.0000)。结果表明补骨脂素浓度在10.6～42.4μg/mL时与峰面积呈良好线性关系,异补骨脂素浓度在11.3～45.2μg/mL时与峰面积呈良好线性关系。2.7进样和色谱条件取同一对照品溶液进行试验,每次进样10μL,按“2.2.1”项下的色谱条件重复进样6次,记录主峰面积。补骨脂素、异补骨脂素的RSD分别为1.24%和0.98%。结果表明仪器精密度良好。2.8补骨脂素、异补骨脂素的rsd测定精密吸取同批的供试品溶液10μL,分别于0、1、2、4、6、12、24h时进样,测定主峰面积,补骨脂素、异补骨脂素的RSD分别为1.55%和1.18%。结果表明溶液在24h内稳定。2.9补骨脂素含量测定按照拟定的含量测定方法,对同一批样品(批号:120612)制备供试品溶液,平行操作6份,结果测得补骨脂素平均含量为0.24mg/g,RSD为1.86%;异补骨脂素平均含量为0.26mg/g,RSD为2.13%,表明本测定方法具有较好的重复性。2.10加样回收率和精密度精密吸取已知含量的同一批样品(批号:120612)1.0g,置10mL量瓶中,共9份,分别精密加入一定量的补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品,按供试品溶液制备方法制备并测定,补骨脂素和异补骨脂素的平均回收率(n=9)分别为99.61%和98.94%,RSD分别为0.81%和1.03%。结果表明本方法具有良好的回收率。2.11样品含量测定分别取七宝美髯颗粒3批,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按照色谱条件进样测定,记录色谱图,计算样品含量,结果见表2。3对苯乙烯hplc含量测定的意义目前七宝美髯颗粒质量标准仅限于对制何首乌进行鉴别研究,对2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯进