宫颈癌病毒抗病毒的研究进展

宫颈癌病毒抗病毒的研究进展

宫颈是女性肿瘤的第二周，也是女性健康的“第二杀手”。我国每年新增宫颈癌病例约13.5万［1］。HPV感染非常普遍,有性活动的人员在一生中大约有70%~80%的概率被感染［2］。目前对HPV感染尚无有效的治疗措施,预防HPV感染及对已感染人群进行定期监测是目前宫颈癌的主要防治方式［3］。近十年,宫颈细胞学筛查的普遍应用,使得癌前病变得以早期发现和治疗,宫颈癌发病率和死亡率已明显下降。但宫颈癌的发病逐渐趋于年轻化,并且年轻宫颈癌的死亡率有明显升高趋势［4］。抗癌药物的研究一直是医学研究的热点,随着分子生物学和分子药理学在中药抗肿瘤作用机制阐述中的应用,中药抗宫颈癌的研究水平也有了显著提高,并展示出了广阔的前景。一、hpv早期基因HPV是小环状双链DNA病毒,在自然界中以裸核休眠状态存在。即便在无宿主的寒冷的条件下HPV也能独立存活数月。HPV为高特殊种群选择性宿病毒,人类是目前所知道的唯一病毒宿主。它具强烈嗜上皮性、高度组织和宿主特异性,可致人类皮肤及黏膜异常增生。HPV包括了六个早期调控基因,分别为HPV早期编码基因E1、E2、E4、E5、E6、E7和两个L1、L2晚期基因。早期基因与DNA复制、转录调节和细胞转化有关;晚期基因编码衣壳蛋白并促进病毒DNA进入细胞。其中E6和E7两个早期基因被认为与子宫颈癌关系最为密切,称为致癌基因,是宫颈癌发生的主要原因。HPV感染属于常见的性传播感染,直接的皮肤接触是传播的最有效的途径,会阴部的接触是获得HPV的必要条件,而性交并不是必要的,并且病毒不通过血液或体液传播。二、hpv感染机制70年代末ZurHausen首先提出HPV与宫颈癌发病可能有关的假说,1995年国际癌症协会(IARC)专题讨论会上确定HPV感染是宫颈癌发生的必要条件。20世纪80年代2008年诺贝尔奖获得者德国科学家哈拉尔德·楚尔·豪森确定HPV是宫颈癌发生因素,宫颈癌疫苗随之得到开发。在宫颈癌的发生中,HPV感染是必要条件,免疫力低下、性生活紊乱、多孕多产、合并其他生殖道感染、吸烟、长期口服避孕药、性生活过早(<16岁)及肿瘤家族史等因素是重要的辅助因素。大部分HPV感染均有自限性,病毒进行其正常完整的繁殖周期,60%以上机体在六个月左右能依靠自身免疫机制逐渐将HPV感染清除;当病毒或宿主的基因发生突变或宿主的防御机制发生缺陷时,则可诱导HPV-DNA片段整合到宿主细胞的DNA上,使得相应基因调控失调,30%以上会进展到高度的上皮病变,约不到10%会发展成宫颈癌。HPV繁殖停止在复制周期的某一时相,导致HPV持续感染,持续性或者反复性的HPV(特别是高危型HPV)感染,使发生宫颈原位癌的机率大大增加［5］。三、中药、进行药物作用中医药的抗病毒的治疗观念不是建立在病原学基础上,而是基于病原所引发的人体病变的整体认识,即整体观。中医药主要通过各种方法和途径,改善被病毒干扰和破坏的生理状态,提高生命活动的整体质量,进而增强机体抗病力,形成不利于病毒复制的内在环境;通过其解毒、补虚、祛瘀的基本策略达到直接消灭病原体和调动人体免疫力进行吞噬的目的,起到抗病毒、清除病毒的作用。近年来,许多中药被证实有抗病毒之功效,并逐步研发为成药、针剂应用于临床。张志远等［6］报道,中药干预无症状艾滋病(HIV)感染者,主要以中药免疫调节为主,以中药抗病毒为辅,兼顾HIV常见并发症的治疗,毒性低,临床应用不良反应较少,可减轻化学抗病毒药物的不良反应。江勤等［7］研究黄蜀葵花总黄酮(TFA)的体外抗病毒作用,发现TFA对单纯疱疹病毒Ⅰ型和单纯疱疹病毒Ⅱ型均有一定的病毒抑制作用。周艳萌等［8］以HepG2.2.15细胞(人肝癌细胞)为靶细胞,给土贝母皂苷后通过检测细胞表面及培养液中表面抗原(HBsAg),e抗原(HBeAg)和HBV-DNA,观察土贝母皂苷抗乙型肝炎病毒(HBV)效果,发现土贝母皂苷各浓度组对HBsAg,HBeAg表达均有明显抑制作用。刘晓玲等［9］研究表明苦参系列生物碱对引起病毒性心肌炎最常见的柯萨奇B3病毒(CVB3)具体外抗病毒作用,槐果碱对CVB3病毒的繁殖有抑制作用,在一定浓度下可降低心肌酶的释放。Ko等［10］研究发现穿心莲提取物对甲型流感病毒H1N1株有抑制作用等。四、其他因素:pv负荷量和患者经口给予的作用中医学无HPV感染及宫颈癌的概念及名词。根据疾病特点及白带增多、血性白带、五色带下、接触性出血等症状,HPV感染及宫颈癌归属于中医“带下”“五色带下”范畴。本病的发生是由于“毒邪侵淫,结聚于子门”。针对HPV感染患者,在其发展为宫颈癌前,积极应用中医药未病先防、已病防变的思想,可有效降低宫颈癌发病率。近十年来中医药治疗在宫颈癌HPV感染的防治上发挥着其特有的功用。姚冬梅［11］应用含砷中药复方“二黄散”(由雄黄、黄连、白矾、冰片、铅粉等组成)治疗宫颈hr-HPV(高危型人乳头瘤病毒)感染合并CINⅠ(轻度宫颈上皮瘤病变)或CINⅡ(中度宫颈上皮瘤病变)的患者,hr-HPV转阴率为47.9%,空白对照组转阴率为5.9%。徐如意等［12］应用鱼腥草联合中药汤剂对81例宫颈CINⅠ并HPV阳性伴宫颈炎的患者进行观察治疗,鱼腥草组HPV转阴率62.86%,并能有效治疗宫颈炎。耿晓星等［13］应用青黛紫草合剂治疗宫颈hr-HPV合并CINⅠ、CINⅡ,HPV转阴率为76.5%;hr-HPV转阴率为47.9%,空白对照组转阴率为5.9%;彭丽霞等［14］通过对100例HPV感染者使用复方沙棘籽油栓治疗前后HPV检测对照研究,发现沙棘籽油栓对HPV转阴促进明显,治疗6个月HPV转阴率为85.33%。中医药抗宫颈癌HPV感染的作用,主要有以下相关研究。1.降低HPV病毒负荷量:人体在感染HPV的同时又对其有清除作用,因此还有其他因素参与到HPV的持续感染及整合过程中,部分学者研究表明HPV负荷量可能是其中一个重要衡量因素。研究表明,CINⅡ-CINⅢ(重度宫颈上皮瘤病变)和宫颈癌患者HPV病毒负荷量明显高于CINⅠ和慢性宫颈炎患者［15］。姜星等［16］通过对269个病例阴道镜下多点取活组织病理检查,分析发现CIN(宫颈上皮瘤病变)的HPV-DNA含量明显高于慢性宫颈炎,持续性高病毒负荷量对宫颈癌的发生及宫颈病变的进展有一定的促进作用。台湾地区的Sun等［17］报道,高病毒负荷量的人群罹患宫颈上皮内瘤变和宫颈浸润癌的几率高于低病毒负荷量的人群。HPV负荷量分布可能与宫颈病变级别呈正相关［18－19］随着HPV明确为宫颈癌病因,近年来HPV病毒负荷量逐渐成为研究热点,有研究等［20－22］认为检测HPV的病毒负荷量亦将有助于提高HPV-DNA检测、宫颈高度病变的阳性预测值。中药有助于降低HPV病毒负荷量,从而防治HPV持续感染。孔徐萍等［23］应用扶正解毒方(主要由白头翁,黄柏,薏苡仁,紫草,马齿苋,白花蛇舌草,党参,白术,桂枝,茯苓组成)联合银尔舒(活性银离子抗菌凝胶)治疗高危型HPV感染后16、18型HPV病毒负荷量的变化及临床疗效,发现扶正解毒方能有效治疗慢性宫颈炎合并HPV感染,能降低HPV病毒负荷量,从而有效治疗减少HPV-DNA复制,改善临床症状及促进宫颈糜烂面愈合。程艳香等［24］应用含砷复方中药二黄散(由雄黄、黄连、白矾、冰片、铅粉组成)对慢性宫颈炎的临床疗效,发现感染高危型HPV病毒的患者治疗后病毒负荷量明显下降。楼姣英等［25］研究清毒栓治疗宫颈高危型人乳头瘤病毒(hr-HPV)感染,发现清毒栓能有效降低宫颈hr-HPV感染负荷量;治疗前后临床症状积分自身比较有极显著有效差异,清毒栓能有效改善宫颈hr-HPV感染患者的临床症状。2.改善宫颈局部免疫微环境:在免疫缺陷的个体中,当宫颈高危型HPV感染遇到局部皮肤黏膜表面有微小损伤时,HPV感染基底层细胞后可潜伏于基底角化细胞间,在表皮细胞层进行自我复制,合成产生病毒颗粒并持续感染,机体免疫防御和免疫监视功能被削弱,易发生HPV持续反复感染导致相关疾病及宫颈癌发生。例如,HIV感染者易合并HPV感染;患有恶性淋巴瘤、霍奇金病及糖尿病等免疫缺陷疾病的患者HPV发病率明显高于常人;某些免疫抑制剂的应用亦可促使HPV感染相关疾病的发生,且不易治愈;有研究表明［26］一种HPV-16的中和性抗体与HPV造成的宫颈损害程度密切相关,在清除HPV-16感染的妇女血清中检测到高滴度的抗HPV-16E7抗体,而在持续性感染的患者中该抗体多呈阴性;有研究表明［27］宫颈局部可检测出一定的免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)和分泌性免疫球蛋白A(SIgA)。王智宇等［28］研究表明,较正常人早期宫颈癌患者的细胞免疫功能较低,术后证实有脉管瘤栓或淋巴结转移的患者细胞免疫功能更低。综上所述,宿主的细胞免疫及体液免疫都对HPV感染的转归起决定性作用,宿主对HPV的免疫反应,直接影响到HPV感染是否被清除或者转化为持续性感染。陈瑜等［29］研究表明人子宫颈癌异常表达“程序性死亡配体-1(PD-L1)”与肿瘤内浸润的淋巴细胞凋亡及CD8+T细胞数量减少有关,PD-L1经死亡受体-1(PD-1)促进活化的CD4+T和CD8+T细胞凋亡,使得子宫颈局部微环境免疫监视功能下降,是宫颈癌发生发展的重要原因。程艳香等［30］研究发现中药“二黄散”(雄黄,黄连)外用于hr-HPV阳性患者宫颈表面后,HPV滴度明显下降,6个月后用药组转阴率72.36%,白介素4(IL-4)和白介素10(IL-10)水平均下降,血清干扰素γ(IFN-γ)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平上升,其可能作用机制是二黄散促进了Th2类向Th1类细胞因子转化,重建细胞免疫功能,恢复Th1/Th2的免疫平衡状态从而清除高危HPV病毒。曹颖等［31］通过临床研究表明中药清毒栓可能通过上调阴道免疫微环境IFN-γ水平起到抗病毒的作用;通过实验研究的发现中药清毒栓、中药单体榄香烯及干扰素均可通过调节抗原呈递通路相关分子的蛋白及基因表达,起到促进抗原呈递的作用,可能是以清毒栓中药物抗宫颈癌、抗HPV病毒的作用机制之一。五、中药防治高节点免疫微环境随着HPV的研究深入,宫颈癌的预防、治愈均成为可能,但目前仍缺乏针对HPV感染公认有效的治疗手段。现代医学主要治疗方案主要包括免疫治疗、局部物理治疗、手术治疗,不能完全彻底清除HPV病毒的感染,且是否有益于HPV的彻底清除仍不明确。目前预防性疫苗已经应用于临床,由于诸多因素,尚待完全引入我国;疫苗只对具体某亚型有效,使用范围有限,其接种年龄及适用范围亦存在争议。对宫颈癌前HPV感染相关疾病,中药具有多靶点效应,这正是中药在防治HPV感染中的优势。高病毒负荷量增加了HPV病毒整合事件的发生［32］,增加了宫颈原位癌的发生率,中药可降低HPV病毒负荷量,有效抑制HPV