转基因教学课件

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转基因这是转基因吗？！转基因

转基因又称基因工程、基因改造，是将外源基因（一般为其他物种的基因）导入到目的生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的的一种技术。

常用的方法包括基因枪、电破法、脂质粒等。

转基因最初用于研究基因的功能，即把外源基因导入受体生物体基因组内（一般为模式生物，如拟南芥或斑马鱼等），观察生物体表现出的性状，达到揭示基因功能的目的。什么是转基因？转基因拟南芥（Arabidopsisthaliana）是一种十字花科植物，二年生草本，高7～40厘米，花期3～5月。广泛用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究，已成为一种典型的模式植物，其原因主要基于这种植物具有以下特点：（1）形态个体小，生活力强，种子量大；（2）生长周期快，从播种到收获种子一般只需6--8周；（3）基因组小（2n=10），是目前已知植物基因组中最小的，但是具有完成“复杂”的植物生长发育的所有基因；（4）拟南芥是自花授粉植物，易于获得纯合突变体。转基因转基因

转基因植物（transgenicplant）是指将从动物、其他植物或微生物中分离出的目的基因，导入到植物的基因组中，并且可以稳定遗传给下一代的一类植物，可以是原有性状发生改变，如抗虫、抗病、抗逆、高产、优质等。

常用的植物转基因方法有花粉管通道法、农杆菌介导转化法、基因枪介导转化法、细胞融合法等。涉及到的研究技术有：植物抗虫基因工程、抗病基因工程、植物抗逆基因工程、植物品质改良的基因工程、植物叶绿体基因工程和植物生物反应器等等。转基因

植物转基因方法包括农杆菌介导转化法、基因枪法和花粉管通道法。（1）农杆菌介导转化法：将目的基因插入到农杆菌的基因组中，借助农杆菌对植物的感染，实现外源基因向植物细胞的转移与整合；（2）基因枪介导转化法：利用基因枪，将包裹了沾有目的基因的金属颗粒高速打入植物组织和细胞中；（3）花粉管通道法：在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞并整合到基因组中。植物转基因的常用方法转基因农杆菌介导转化拟南芥实验原理拟南芥的培养：将拟南芥种子经10%双氧水消毒后接种于MS培养基上，于22℃、光照10h培养1-2周，长出无菌苗后转移至坧石和土（3：1）混合物上培养。注意：湿度要大一些。转化原理1.农杆菌对双子叶植物的创伤部位侵染广泛，在某些条件下对单子叶植物也有一定的感染性。2.根癌农杆菌含有Ti（tumor-inducingplasmid）质粒，Ti质粒上的T-DNA（transferredDNA）在Vir区（virulenceregion）基因产物的介导下可以插入到植物基因组中，诱导在宿主植物中瘤状物的形成。因此，将外源目的基因插入到T-DNA中，借助Ti质粒的功能，使目的基因转移进宿主植物中并进一步整合、表达。转基因农杆菌介导法:

农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠痪瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T—DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T—DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T—DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。转基因实验基本流程YEB:特定的培养基kan:卡那霉素转基因基本步骤1．农杆菌准备2．外植体的准备（愈伤组织、悬浮细胞系、幼嫩茎段或叶片）;3．用MS-AS液体培养基稀释原菌液15倍（1.5ml/20ml）或离心后稀释3倍;4．外植体与菌液共培养20分钟;5．放置在带滤纸的培养皿上（注意充分吸干多余的菌液）;6．将外植体接种到MS-AS固体诱导培养基，培养2－3天;7．移至含卡那霉素（Kan）300mg/L和羧苄青霉素（Cb300mg/L）的固体筛选培养基上进行Kan抗性愈伤组织的筛选;8．隔20天，进行第二次筛选；9．抗性愈伤组织在固体筛选培养基上分化成苗；10．在生根培养基上生根，获得完整的再分化植株。转基因实验试剂1．含有双元载体的农杆菌GV3101悬浮液（对数生长期）：将目的基因构建到双元载体上，之后，将重组的双元载体转入农杆菌GV1301并用卡那霉素（50mg/ml）筛选含有重组双元载体的菌落。将农杆菌接种在LB液体培养基（含有庆大霉素25mg/L用于筛选Ti质粒，卡那霉素50mg/L用于筛选T-DNA）中，28℃，180r/min条件下震荡培养至对数生长期，T-DNA28180r/min在4℃和-20℃分别保存菌株备用。

2．浸染液：1/2MS，1×B5维生素，5%蔗糖，50ml/LSilwetL-77，0.044mMbenzylaminopurine（10ml/Lof1mg/mlstockinDMSO）

。或使用只加入5%蔗糖和50-500ul/LSilwetL-77的水溶液作为浸染液。（本实验选用此种浸染液）

（5%蔗糖200ml10ulSilwetL-77）转基因实验材料农杆菌GV3101重组菌株，重组双元表达载体pCAMBIA1300，拟南芥实验步骤1．在转化前三天，接种含有双元载体的农杆菌到5ml含有抗生素（庆大霉素20mg/L，卡那霉素50mg/L）的LB液体培养基中，28℃下震荡培养2天。

2．两天后，将1ml培养的农杆菌转移到100ml含有抗生素的LB液体培养基中，28℃继续震荡培养24小时。（前面步骤由实验技术人员准备：保证每组有约80ml-100ml的农杆菌，事先分装到两个50ml的离心管中。）

3．将农杆菌转入离心管中，6000rpm/min，室温条件下，离心10分钟，然后将上清倒出。

转基因4．将沉淀用200ml浸染液重悬，形成均匀的农杆菌悬浮液（OD600=0.8左右），并将农杆菌悬浮液转移到一个敞口的器皿中（500ml烧杯）。

5．选取初果期的健壮植株，带盆钵一起倒扣于盛有农杆菌悬浮液的容器上方，将整个花序浸入上述农杆菌悬浮液中约20-30秒，注意叶片尽量不与浸染液接触。同一个烧杯中的农杆菌悬浮液可以转化10株或者更多株拟南芥。在此过程中，尽量避免将蛭石倒入农杆菌悬浮液中。

6．将盆钵取下，横放于暗箱中约24小时。注意保持一定的湿度。

7．24小时后将处理过的拟南芥植株放于22～25℃的光照条件下使其正常生长。

8．大约三周后收取成熟种子。转基因注意事项1.在箱底撒水保湿，然后将花盆平放到箱子中，并用塑料袋罩住箱子暗培养16-24h（过夜）后，将拟南芥放置于塑料培养池内，并浇足horgland营养液，恢复正常培养。

2.为了提高转化率，去除塑料袋3d后，用吸管吸取适量重悬目的质粒的新鲜转化液，逐个醮沾花蕾。

3.

转化后拟南芥的培养恢复正常管理，一旦再出现侧蘖或主苔出现分枝，及时剪除。

4.转化5-6周后，为了加速拟南芥成熟可以适量少浇营养液。待拟南芥个别角果开始枯黄后，可将其角果剪下放于培养皿内干燥。拟南芥角果大部分。

5.枯黄后，即可收取全部种子存于1.5ml的EP管中（在盖上扎一小孔以便干燥）。种子完全干燥后，放于1.5ml新EP管中4℃短期保存。如需要可放于-20℃冰箱内长期保存。

转基因基因枪法的原理及优缺点

基因枪法的原理

基因枪法（genegun）又称微弹轰击法。其基本原理是将外源DNA包被在微小的金粒或钨粒表面，然后在高压的作用下，微粒被高速射入受体细胞或组织，微粒上的外源DNA进入细胞后，整合到植物染色体上，得到表达，从而实现基因的转化。

基因枪法的优、缺点

基因枪法的优点

（1）无宿主限制。基因枪法本质上是一种物理过程，没有宿主限制，对单子叶和双子叶植物都能进行有效地转化。以原生质体为受体的PEG转化法、电击法、脂质介导转化法和显微注射法等虽然可以用于单子叶植物的转化，然而，以原生质体作为受体材料要求受体系统具有良好的再生性能，这对于大多数禾谷类作物来说是较困难的，而且其再生的周期比较长，再生过程容易产生变异。

转基因基因枪法的缺点

由于基因枪轰击的随机性，外源基因进入宿主基因组的整合位点相对不固定，拷贝数往往较多，这样转基因后代容易出现突变、外源基因容易丢失，容易引起基因沉默等现象的发生，不利于外源基因在宿主植物的稳定表达。而且基因枪价格昂贵、运转费用高。

（3）可控度高，采用高压放电或高压气体驱动的基因枪，可根据实验需要，将载有外源DNA的金属颗粒射入特定层次的细胞（如再生区的细胞），使转化细胞能再生植株，从而提高转化频率。

（4）操作简便、快速。农杆菌介导法需要进行农杆菌感受态细胞的制备、共培养、抑菌等操作步骤，PEG转化法、电击法等需要进行原生质体分离与培养的繁琐工作，而基因枪法是一种物理过程，只要在无菌的条件下将载有外源基因的金属颗粒轰击受体材料，就可以进行筛选培养，因此它操作简便、快速。

（2）靶受体类型广泛，不受组织类型限制，几乎所有具有潜在分生能力的组织或细胞都可以用基因枪进行轰击转化。目前用于基因枪转化的受体材料十分广泛，其中包括原生质体、悬浮细胞、根或茎的切段、叶圆片、成熟胚、幼胚、分生组织、愈伤组织、胚芽鞘等几乎所有具有潜在分化能力的组织或细胞。

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花粉管通道法：在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。该方法于80年代初期由我国学者周光宇提出，我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握。该技术的原理主要是授粉后使外源DNA能沿花粉管渗入，经过珠心通道进入胚囊，转化尚不具备正常细胞壁的卵、合子或早期胚胎细胞。转基因花粉管通道导入方法

花粉管通道操作方法通常有:微注射法、柱头滴加和花粉粒携带。其中，最初的操作方法是柱头滴加法，在以后的实践中，又根据植物的花器结构特征等，开发了一些新的花粉管通道导入外源DNA的技术方法，如子房注射法，即对于子房较大的受体，在授粉后使用微量注射器沿子房纵轴插入一定深度注射外源DNA溶液；或采用花粉粒携带法，即用待转基因的溶液处理花粉粒，用这种携带有外源基因的花粉粒授粉。转基因花粉管通道法应用前景

植物进行外源基因转化总体上可分为3个转化系统:载体转化系统、直接转化系统和种质转化系统。花粉管通道法属于种质转化系统，它与其他转化方法比较，主要优点为:①保留了常规育种的基本特点（可直接按照育种要求选择转化后代）。②直接得到转化种子，无须进行繁琐的组织培养，并免除了从离体原生质到再生植株漫长的人工培养过程，比常规有性杂交有更快的速度，也减少了基因型的影响。③操作简便经济，无需昂贵的仪器和化学药品，育种研究人员可直接在大田操作。④进入体基因组的是部分DNA片段或目的基因，因此导入的DNA易于整合，转移基因所控制的性状在受体株中易于稳定。转基因⑤具备基因工程的先进性，不仅可以导入供体的总DNA，而且可以导入含有目标基因的质粒，甚至可将化学诱变剂导入胚囊。⑥在转基因构建中，有可省略抗生素标记基因，因而在转基因产品中，将不会含有抗生素表达，安全性可能更好。总之，花粉管通道法现已被誉为流行的转基因方法的一种，成为国内外农业生物技术研究中的热门课题，在其他涉及植株再生的转基因方法遇到困难时，研究者往往利用花粉管通道法来改变现状。

花粉管通道法属于常规育种范畴的技术手段之一，将完整的基因组导入受体基因组，会引起性状的大量分离，需经多代自交纯化，才能得到目标性状纯合稳定的后代，所以时间相对久一些。同时，花粉管通道法只能用于开花植物，且只有花期可以进行转育，导入总DNA片段的转育株会带有少量非目的性状的DNA片段，其效果也受结实率与转化率的限制，如前人研究中运用花粉管通道法转化外源DNA转化成植株率一般仅为1%~10%；还有，花粉管通道法的外源基因整合机理还不清楚。因此，花粉管通道法技术还并不十分成熟，在一定程度上限制其广泛应用。

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转基因动物研究可能集中在以下几个方面转基因动物技术的不断完善。如改进现有的显微操作技术和提高外源基因整合率；广泛开展用基因敲除技术并建立转基因小鼠和探索大鼠的胚胎干细胞培养方法和建立基因敲除的转基因大鼠模型的方法。深入开展转基因的表达调控研究。从转单基因的动物的组织特异性表达调控，发育阶段的时空调控到建立携带多个基因的转基因动物模型，以研究基因间相互作用和多级调控。建立拼接特定的组织特异性启动子的单、双基因的转基因动物。建立用于药物研究和适合基因治疗的转基因动物模型也将成为今后发展的重要方向。转基因动物转基因技术的常用方法世界上已报道了多种生产转基因动物的方法，主要有4类：①融合法，包括精子融合法，微细胞介导融合等。②化学法，包括DNA―磷酸钙沉淀法、DEAE―葡聚糖法、染色体介导法等。③物理法，包括显微注射法、电脉冲法、细胞冻存法等。④病毒感染法，包括重组DNA病毒感染、重组RNA病毒感染等。但真正成熟并可以稳定生产转基因动物的方法只有三种，即核显微注射DNA法、精子介导法和核移植法等基因转移方法。转基因（1）核显微注射法

核显微注射法是动物转基因技术中最常用的方法。它是在显微镜下将外源基因注射到受精卵细胞的原核内，注射的外源基因与胚胎基因组融合，然后进行体外培养，最后移植到受体母畜子宫内发育，这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段。-这种方法的缺点是效率低、位置效应（外源基因插入位点随机性）造成的表达结果的不确定性、动物利用率低等，在反刍动物还存在着繁殖周期长，有较强的时间限制、需要大量的供体和受体动物等特点。转基因（2）精子介导的基因转移

精子介导的基因转移是把精子作适当处理后，使其具有携带外源基因的能力。然后，用携带有外源基因的精子给发情母畜授精。在母畜所生的后代中，就有一定比例的动物是整合外源基因的转基因动物。同显微注射方法相比，精子介导的基因转移有两个优点：首先是它的成本很低，只有显微注射法成本的1／10。其次，由于它不涉及对动物进行处理，因此，可以用生产牛群或羊群进行实验，以保证每次实验都能够获得成功。（3）核移植转基因法

体细胞核移植是近年来新出现的一种转基因技术。该方法是先把外源基因与供体细胞在培养基中培养，使外源基因整合到供体细胞上，然后将供体细胞细胞核移植到受体细胞――去核卵母细胞，构成重建胚，再把其移植到假孕母体，待其妊娠、分娩，便可得到转基因的克隆动物。转基因

核显微注射法又称DNA显微注射法显微操作仪将外源基因直接用注射器注入原核期细胞（原核期细胞：受精卵的两个核未融合时期的细胞）中，利用外源基因整合到DNA中，发育成转基因动物。转基因

优点：

缺点：

贵重精密仪器，技术操作较难，并且外源基因的整合位点和整合的拷贝数都无法控制，易造成宿主动物基因组的插入突变，引起相应的性状改变，重则致死。

这种方法的特点是外源基因的导入整合效率较高，不需要载体，具有导入部位较明确、操作较简便等特点。它可以直接获得纯系，所以实验周期短。（纯系：一般由所有有关基因均为纯合体的个体进行自交，或是通过长期的连续近亲交配而产生。）

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1.受精卵的显微注射：（1）防止注射针孔过大（大于2μm）或不通。（2）防止刺入核仁等粘度较大的部位，以免拔针时带出核内容物，造成卵细胞溶解。（3）注射量不能过多，最好控制在1～2pl范围内。（4）注射时间不可过长，以免影响卵细胞的生长发育。注意事项适用范围受精卵细胞、悬浮细胞、贴壁细胞转基因

2.培养细胞显微注射：（1）注射时间应快速（0.5～1秒），注入量根据注入细胞不同及注入部位不同而进行调节。（2）有些仪器可通过计算机屏幕选择靶细胞后，在计算机控制下自动进行注射，每小时注射细胞数可达3000个以上。（3）采用具有多能干细胞功能的胚细胞注入基因后，改变其性状，然后移植于卵泡中，可产生嵌合小体。（4）某些新型的激光共轭聚焦显微镜可以通过激光聚焦，将基因物质导入细胞的特殊部位，较常规显微注射更为简便。转基因

外源基因整合到受体基因组的时机，将决定转基因动物是否发育成嵌合体，如整合发生在第一次卵裂前，即发生在DNA合成的S期，外源基因将随染色体的分离均匀的分布到每一个细胞，得到的转基因动物是纯合体，反之，得到的将是嵌合体。显微注射转基因的实践证明，受精卵DNA合成的S期是显微注射的适宜时机。但由于整合需要一段时间，等目的基因整合至染色体后，受精卵早已分裂多次，故很难得到纯合体。如鱼类在原肠胚早期才开始整合，而此时细胞已多值几千，此时转植基因在每个细胞内的整合情况不可能一致，所以第一代转基因鱼总是嵌合体。哺乳动物受精卵的单细胞期阶段较长，还有可能得到纯合体的转基因动物。也可在囊胚期进行，得到的是嵌合体转基因动物。转基因

精子介导法：

精子介导的基因转移是把精子作适当处理后，使其具有携带外源基因的能力。然后，用携带有外源基因的精子给发情母畜授精。在母畜所生的后代中，就有一定比例的动物是整合外源基因的转基因动物。

同显微注射方法相比，精子介导的基因转移有两个优点：首先，它的成本很低，只有显微注射法成本的1/10。其次，由于它不涉及对动物进行处理，因此，可以用生产牛群或羊群进行实验，以保证每次实验都能够获得成功。转基因大多数转基因动物的制作效率还低，寻求一种简便高效可广泛应用于各种哺乳动物、鸟类、鱼类的转基因方法仍是必要的。精子载体法提供了一条新的基因转移途径。这种方法几乎可以在所有动物上应用，成本低、效率高，对卵原核无损害，符合生理受精过程。Maione利用人工授精程序就可以生产转基因动物。1971年，Brackett等开始了精子介导外源DNA转移的先驱工作：当兔子精子暴露于纯化的SV40-DNA中后，在镜子的头部检测到放射性物质。他们的结果表明异源的DNA分子可以结合进入哺乳动物的精子，在2-细胞胚胎期检测到这些DNA，说明这些精子在受精过程中能将外源DNA携入卵细胞。

转基因意大利学者Lavitrano等在小鼠上进行的研究，他们将获得的小鼠附睾精子与线粒体或环状pSV2CAT质粒一起37℃孵育30分钟后，再与成熟卵子进行体外受精，这样得到胚胎在2-细胞期移植入受体鼠的输卵管内，在受体鼠产出的250只体外受精有30只为阳性个体。从一只阳性小鼠总DNA构建的基因组文库中重新克隆了pSV2CAT，并且对该克隆HineⅡ的两条酶切片段的核苷酸序列测定验证了杂交信号本质上pSV2CATDNA。试验还发现阳性个体中转入的基因可以稳定的整合入生殖细胞系，而且在转基因家系的后代个体的组织器官中，特别是在尾组织和肌肉组织中可检测到CAT基因的表达。

通过以上的科学实验，可以看到精子介导的转基因技术为人类改变自己和创造新物种提供了可行的方案之一。转基因

转基因反转录病毒载体法：

将外源基因替换病毒基因组的反式元件，通过顺式元件的调控序列和感染成分重组病毒载体，然后注射到MII期的卵母细胞，体外受精和筛选。即将目的基因重组到逆转录病毒载体上，制成高浓度的病毒颗粒，人为感染着床前或着床后的胚胎，也可以直接将胚胎与能释放逆转录病毒的单层培养细胞共孵育以达到感染的目的，通过病毒将外源目的基因插入整合到宿主基因组DNA中去。

转基因区分“顺式作用元件”和“反式作用因子”

顺式和反式顺式（cis-）指的是“分子内”，也就是说顺式作用就是自己作用于自己，就像顺式作用元件就是一段DNA序列作用于自己临近序列，调节它的表达，比如我们常说的增强子，沉默子等等。反式（trans-）指的是：分子间“的作用，所以反式作用因子，就是一个蛋白质分子，是由A基因编码的，但是可以作用于B基因，调节基因的表达。但是也存在少量“顺式作用因子”其次说说因子和元件:因子（factor）在分子生物学中就是特指DNA片段产生的物质，换句话说就是特指蛋白质，比如调节因子、转录因子等等。元件（element）指的是DNA或RNA上具有某种特定功能的序列，换句话说就是DNA或者RNA的一段。转基因转基因CRISPR/Cas9技术

CRISPR（ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats）RNA，是最近几年才发现的原核生物中的调控RNA，用以抵御病毒和质粒入侵。在II型CRISPR系统中，CRISPRRNA（crRNA）与转录激活crRNA（Trans-activatingcrRNA，tracrRNA）退火形成的复合物能特异识别基因组序列，引导Cas9核酸内切酶在目的片段生成DNA双链断裂（double-strandbreaks，DSBs）。CRISPR-Cas系统的高效基因组编辑功能已被应用于多种生物，包括人、小鼠、大鼠、斑马鱼、秀丽隐杆线虫、植物及细菌。多个科研小组的研究都显示，与锌指核酸酶（ZFNs）和转录激活样效应核酸酶（Transcriptionactivator-likeeffectornucleases，TALEN）相比较，CRISPR-Cas系统介导的基因组靶向实验在真核细胞中具有相似甚至更高的效率。转基因CRISPR/Cas9系统可广泛应用于基因组工程，如基因抑制，基因敲除，基因敲入，基因修复等。CRISPR/Cas9体系为基因组工程研究提供了一项简便而强大的工具。作为一种新的基因编辑技术，CRISPR/Cas9有以下特点和优势：1、操作简单，靶向精确性更高。2、CRISPR/Cas9系统是由RNA调控的对DNA的修饰，其基因修饰可遗传。3、基因修饰率高，基因调控方式多样，例如敲除、插入、抑制、激活等4、可实现对靶基因多个位点同时敲除。5、无物种限制。6、实验周期短，最快仅需1个月，节省大量时间和成本。转基因

CRISPR（clustered，regularlyinterspaced，shortpalindromicrepeats）是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。目前，来自Streptococcuspyogenes的CRISPR/Cas9系统应用最为广泛。Cas9蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前最高效的基因组编辑系统[1]。通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造，将其连接在一起得到sgRNA（singleguideRNA）。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力，但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行操作。转基因目前常用的Cas9研究方法是通过普通质粒，质粒构建流程

虽然普通质粒很多时候也能达到实验效果，但是质粒转染具有效率低，作用时间短暂性等缺点。病毒的出现解决了质粒这些问题，常用的病毒主要有慢病毒和腺病毒，慢病毒常用质粒见addgene（lentiCRISPRv2，lentiGuide-Puro，lentiCas9-Blast），慢病毒可以整合入宿主基因组中，长期稳定的表达，但是由于慢病毒克隆能力有限而CAS9本身分子量比较大（大于4kb），且长期插入可能导致乱切，脱靶等，同时慢病毒包装最终获得的滴度不高等原因，腺病毒更有优势，腺病毒克隆能力强，获得的病毒滴度也高。同时相对于普通质粒来说，作用是时间也比较长，可以达到更理想的敲除效果。转基因Cas质粒转基因某公司生产的四种CAS9普通质粒转基因转基因技术的伦理争论

从某种意义上说，一项新技术所带来的利益和风险都是由社会造成的。关于转基因技术是否安全的结论，取决于该项技术所带来的风险在多大程度上被人们认为是可以接受的，取决于特定社会的人们究竟把哪些价值目标（

由于社会资源的有限性，这些价值目标的实现往往要以暂时放弃或牺牲其他同样重要的价值目标为代价）

置于优先的地位来加以考虑。而关于价值目标的优先性的考虑，主要是一个伦理和政治，而非科学问题。因此，关于转基因技术的争论，便不可避免地要与相关的伦理和政治问题纠缠在一起。从形式上看，关于转基因技术的伦理争论主要涉及三类伦理问题:（1）代内伦理问题，关注的主要问题是如何在不同的利益主体（

如跨国公司与消费者、跨国公司与发展中国家、跨国公司与规模较小的农业公司）

之间公平地分配转基因技术所带来的利益与风险；

（2）代际伦理问题，即如何在当代人与后代人之间公平地分享和承担转基因技术所带来的利益和风险；（3）环境伦理问题，即如何保证转基因技术的应用不损害生态系统的平衡与稳定。转基因什么是伦理？

所谓伦理，就是指在处理人与人，人与社会相互关系时应遵循的道理和准则。是指一系列指导行为的观念，是从概念角度上对道德现象的哲学思考。它不仅包含着对人与人、人与社会和人与自然之间关系处理中的行为规范，而且也深刻地蕴涵着依照一定原则来规范行为的深刻道理。是指做人的道理，包括人的情感、意志、人生观和价值观等方面。是指人际之间符合某种道德标准的行为准则。转基因

转基因食品（geneticallymodifiedfood）就是利用现代分子生物技术，将某些生物的基因转移到其他物种中去，改造生物的遗传物质，使其在形状、营养品质、消费品质等方面向人们所需要的目标转变，从而形成的可以直接食用，或者作为加工原料生产的食品。没有任何报导证实转基因食品对人类有不良影响。广泛的科学共识是：对于食用者，市场上转基因作物的食品没有比常规食品会造成更大风险。什么是转基因食品？转基因关于转基因食品的常见问题1．什么是转基因生物和转基因食品？

转基因生物可被定义为遗传物质通过非自然交配和/或非自然重组的方式发生改变的生物体（即植物、动物或微生物）。这种技术通常称为“现代生物技术”或“基因技术”，有时也称为“重组DNA技术”或“基因工程”。通过这种技术可将选定的个体基因由一个生物体转移到另一个生物体，也可在不相关的物种之间进行转移。从或使用转基因生物生产的食品一般称为转基因食品。2．为什么生产转基因食品？

转基因食品得以开发和销售是因为对这些食品的生产者或消费者存在着某些感知的好处。这是指将其转变为一种价格较低、利益更大（在耐用或营养价值方面）或二者兼具的产品。最初，转基因种子开发者希望其产品能被生产商所接受，因此集中于能给农民（以及普遍食品业）带来直接好处的创新办法。以转基因生物为基础开发植物的目标之一是改进作物保护。目前市场上的转基因作物主要目的在于通过增强对由昆虫或病毒引起的植物病的抗性或通过增强对除草剂的耐受性提高作物保护水平。转基因3．对转基因食品安全性的评估是否不同于传统食品？

一般来说，消费者认为传统食品长期以来已经有良好的安全消费记录，是安全的。每当使用基因技术引进前便已存在的传统育种方法开发食用的新生物品种时，都会改变生物的某些特征，这种改变可能是好的也可能是坏的。国家食品当局可能被要求检查这类从新生物品种获得的传统食品的安全性，但情况并非总是如此。

相反，多数国家当局认为必须对转基因食品进行具体评估。目前已经建立了特定系统，对与人类健康和环境都有关的转基因生物和转基因食品进行严格评价。对传统食品一般不进行类似的评价。因此，目前这两类食品的销售前评价程序有显著不同。转基因４．转基因食品安全吗？

不同的转基因生物包括以不同方式插入的各种基因。这意味着应逐案评估各别转基因食品及其安全性，并且不可能就所有转基因食品的安全性发表总体声明。

目前在国际市场上可获得的转基因食品已通过安全性评估并且可能不会对人类健康产生危险。此外，在此类食品获得批准的国家普通大众对这些食品的消费未显示对人类健康的影响。不断利用以食品法典委员会原则为基础的安全性评估并酌情包括上市销售后监测，应构成评价转基因食品安全性的基础。５．预计转基因生物领域会有哪些进一步发展？

未来的转基因生物可能包括对植物疾病或干旱具有更强抵抗力的植物、营养水平更高的作物、生长特性增强的鱼种。非食用的转基因生物可包括能产生药学上重要蛋白质，如新疫苗的植物或动物。转基因关于转基因的流言你信了几个？转基因[假]欧美人不吃转基因食品[流言]欧美不消费转基因食物。[真相]美国94%的大豆种植面积为转基因大豆，人均大豆油消耗高于中国，大豆油主要以混合植物油、氢化植物油的形式销售；加工食品中大豆蛋白的应用也十分广泛。欧盟对于转基因作物上市的决定相对北美国家来说，更加