薏苡仁中甘油三油酸酯的含量测定

薏苡仁中甘油三油酸酯的含量测定

椰子仁是中国的药店2000年版的一部分，具有健脾除湿、除关节疼痛、清热排脓的功效。现代药理研究表明,薏苡仁中的薏苡仁油具有抗肿瘤的作用,其抗肿瘤的活性成分为甘油三酯类组分,其中有甘油三油酸酯,甘油三亚油酸酯,1,2-油酸-3-亚油酸-甘油三酯,1,2-亚油酸-3-油酸-甘油三酯等,中国药典2000年版一部中未收载薏苡仁的含量测定方法,而且目前没有关于薏苡仁中活性成分含量测定的文献报道。为更好地控制药材的质量,本实验测定了甘油三酯类组分中的甘油三油酸酯用于控制本品的质量。方法提取简单,重复性好,可作为薏苡仁药材的质量控制指标。1蒸发光散射分离器Agilent1100系列液相色谱仪(美国安捷伦公司),AlltechELSD-2000型蒸发光散射检测器(美国奥泰公司)。乙腈、二氯甲烷均为色谱纯。甘油三油酸酯对照品(Fluka公司,批号2045347,标示纯度99.0%以上)。10批薏苡仁均为市售品(表2)。2方法和结果2.1高效液相色谱法的确定因本品主要成分为甘油三酯,其极性较小,而分子量较大,如采用气相色谱分离,则需经皂化及甲脂化后才能实现,为能检测样品中所含实际成分的量,故选用常用的,分离效果好的高效液相色谱法。因甘油三酯在紫外区基本无吸收,曾采用紫外检测器进行检测(用203nm作为检测波长),结果因响应值太小,基线噪音大,故未采用,后改为通用型检测器蒸发光散射检测器进行检测,结果较为理想。2.2乙腈-二氯甲烷法色谱柱为Discovery●C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-二氯甲烷(59∶41),流速为0.5mL·min-1,柱温为25℃;ELSD参数:漂移管温度70℃,氮气流速1.2L·min-1。2.3对照溶液的制备精密称取甘油三油酸酯对照品适量,加流动相制成每1mL含0.14mg的溶液,即得。2.4流动相与续滤剂的制备取本品粉末(过三号筛)0.6g,精密称定,精密加入流动相50mL,称定重量,浸泡2h,超声处理30min,取出,放冷,称重,用流动相补足损失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。2.5标准曲线的建立在上述条件色谱下,精密量取甘油三油酸酯对照品溶液(0.1378mg/mL)2,3,5,7,10,15,20,25μL注入液相色谱仪,测定峰面积,以进样量(μg)的对数(X)为横坐标,峰面积的对数(Y)为纵坐标,作标准曲线,并以最小二乘法计算得回归方程:Y=1.6278X+3.4128,r=0.9989,结果显示进样量在0.276～3.446μg内有良好的线性关系。2.6精密度测试取同一供试品溶液10μL重复进样6次,测定峰面积积分值,其平均值为2778.03,RSD为0.9%。2.7重复试验取供试品溶液6份,按样品含量测定项下的方法进行测定,其平均含量为7.8647mg·g-1,RSD为0.7%。2.8方法的线性范围、方法取同一份供试品溶液,在制备后每隔一定时间按上述色谱条件进样分析,测定其峰面积积分值,结果本品在室温下放置41h内基本稳定,其RSD为1.2%(n=6)。2.9加样回收及标准品溶液制备精密称取已知含量样品9份,精密加入甘油三油酸酯对照品适量,按供试品溶液的制备法制备,测定峰面积并计算含量,平均回收率为101.83%,RSD=1.1%,见表1。2.10样品的质量分析按上述方法测定不同来源的薏苡仁药材共10批样品,结果见表2。3色谱柱的选择3.1分离模式及流动相的选择曾采用硅胶柱,用正相色谱模式进行分离,当使用极性已很小的正己烷、正己烷-异丙醇(95∶5)洗脱时,所需测定成分出峰仍很快,不能得到很好分离,故未采用,经查阅有关文献,分离甘油三酯类成分现常采用非水反相色谱模式,经比较几种文献报道分离效果较好的流动相系统(乙腈-四氢呋喃;丙酮-乙腈;乙腈-二氯甲烷等)后,以乙腈-二氯甲烷系统分离效果最好。3.2不同色谱柱的比较比较了C18,C8,苯基柱等,结果以C18的分离效果最好,又比较了4种不同填料的C18色谱柱,结果均能得到较好的分离,本实验中选用Discovery●C18色谱柱。3.3实验中比较了丙酮、正己烷、石油醚(60～90℃)和流动相提取对本品指纹谱的影响,并