茶色素对吗啡依赖小鼠脑内ne、da、5-h和-内啡肽的影响

茶色素对吗啡依赖小鼠脑内ne、da、5-h和-内啡肽的影响

茶色素是提取的含有多酚类化合物的提取物。近年研究发现,其具有调节血脂、抗氧化、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、调节免疫、抗菌、抗病毒等药理作用。有文献报道,茶色素对吗啡依赖小鼠有戒毒作用,戒毒的详细机制未见文献报道。因此,本文对茶色素对吗啡依赖小鼠的戒毒作用机制进行探索。1实验动物中心提供HPLC-ECD-6A高效液相色谱仪(岛津制作所);GC-2010γ放射免疫计数器(中佳光电仪器分公司)。昆明种小鼠,♀♂各半,由中国人民解放军军事医学院实验动物中心提供,许可证号:SCXK-(军)2007-004;茶色素,江西江绿集团有限公司提供,含多酚类化合物70%;盐酸吗啡注射液(东北制药集团沈阳第一制药有限公司,批号100509-1);注射用盐酸纳洛酮(重庆药友制药有限责任公司,批号10040330);盐酸可乐定片(常州制药厂有限公司,批号11012213);β-内啡肽放免药盒(北京华英生物技术研究所)。2方法2.1纳络酮对小鼠体质量的影响将昆明种小鼠48只分为正常对照组,吗啡依赖组,茶色素12.5,25,50,100,200mg·kg-1治疗组,盐酸可乐定阳性药组8个组。正常对照组小鼠,皮下注射0.9%氯化钠注射液,其余7组小鼠皮下递增注射吗啡,第1～5天吗啡用药剂量分别为10,20,30,40,50mg·kg-1,bid(8:00,20:00),第6天8:00给予吗啡50mg·kg-1。然后给吗啡第6天8:00正常对照组小鼠皮下注射0.9%氯化钠注射液,其余7组小鼠皮下注射吗啡50mg·kg-1。2h后正常对照组和吗啡组小鼠灌胃纯化水,阳性药组灌胃0.2mg·kg-1可乐定溶液,茶色素各剂量组小鼠灌胃给予相应浓度的茶色素溶液。20min后各组小鼠均腹腔注射纳络酮5mg·kg-1催瘾,测定15min内小鼠出现的跳跃反应次数,记录注射纳络酮前、后30min小鼠体质量损失。眶静脉采血,分离血清-20℃下保存,动物处死,分别取出下丘脑,大脑(分成2份),脑干,称重,-80℃下保存待用。2.2观测指标2.2.1跳跃反应和体重差异的观察腹腔注射纳络酮5mg·kg-1后,观察15min内小鼠跳跃次数。记录注射纳络酮前、后30min小鼠体质量损失。2.2.2大脑皮质中nh-1,3,5-o-1,4-l-1,4-l-1,4-四甲基苯磺酸酯,5,5-l-1,4-1,4-四甲基苯磺酸酯,5,5-l,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-四甲基苯磺酸酯,5-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,5-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,4-1,4-1,4-4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-4-3,4分别在下丘脑、脑干中加入200μL冰冷的0.1mol·L-1高氯酸溶液,大脑皮质中加入350μL冰冷的0.1mol·L-1高氯酸溶液,匀浆,高速离心,取上清液20μL进样。用HPLC-ECD系统检测,记录峰面积,根据标准曲线定量。2.2.3-ep测定在一半大脑中加入生理盐水0.5mL·(0.1g)-1,匀浆,离心,取上清液。用放免法测定β-EP。以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动γ-计数仪器直接读出结果。2.3统计分析结果采用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析,数据以x¯±sx¯±s表示,组间比较采用单因素方差分析检验。3结果3.1茶色素对咯-1、3g-1的影响与吗啡组比较,茶色素12.5,25,50,100mg·kg-1剂量组均显著降低吗啡依赖小鼠的跳跃次数(P<0.01),但茶色素200mg·kg-1剂量组无效,茶色素各剂量组对吗啡依赖小鼠的体质量没有显著影响。见表1。3.2茶色素对测脑皮质da含量的影响采用高效液相色谱法测定下丘脑,脑干和大脑皮质中NE、DA、5-HT含量,结果见表2。由表2可见:茶色素50mg·kg-1组可以显著降低吗啡依赖小鼠下丘脑中NE的含量,12.5,25mg·kg-1组间没有显著性差异;茶色素50mg·kg-1组可以显著降低吗啡依赖小鼠下丘脑中DA的含量(P<0.05)。12.5,25,100mg·kg-1组间没有显著性差异。茶色素各组对吗啡依赖小鼠大脑皮质DA的含量没有影响;统计结果显示,茶色素对吗啡依赖小鼠下丘脑、脑干和大脑皮质5-HT含量没有显著性影响(P>0.05)。3.3茶色素对小鼠大脑皮质内-ep含量的影响与正常对照组比较,吗啡组小鼠大脑皮质内β-EP含量显著增加(P<0.01)。与吗啡组比较,茶色素12.5,25,50,100mg·kg-1各组可显著降低小鼠大脑皮质内β-EP含量(P<0.01)并使其达到正常对照组水平,茶色素200mg·kg-1组未能降低小鼠大脑皮质β-EP含量(P<0.05)。见表3。4茶色素对咯-1对建克氏原螯虾体内5-ht的氧化本实验结果表明,茶色素使吗啡依赖小鼠的跳跃次数减少,说明其对吗啡依赖小鼠催促戒断症状有抑制作用。大量研究表明,吗啡依赖小鼠戒断后,脑内DA、NE、5-HT含量骤增。DA能激活中枢系统的奖赏效应;去甲肾上腺素能系统涉及阿片躯体戒断症状的表达。吗啡的急性应用能降低神经元外去甲肾上腺素水平,而在阿片戒断时几个脑区有神经递质释放的增加;可乐定或β受体拮抗剂普萘洛尔,能减弱阿片戒断症状;5-HT在脑功能中有多种作用,但与药物依赖有关的主要是食欲和成瘾性,减弱5-HT功能的药物能阻断吗啡形成的位置偏好。许多研究表明阿片类药物的耐受和依赖作用与5-HT活性变化有关,如急性或慢性接受吗啡处理的动物,5-HT的代谢和合成增加。不同脑区内单胺递质的含量有所差异。在实验中,同时测定的3个脑区中NE、DA、5-HT的含量。下丘脑中3种单胺递质含量最高。NE只在下丘脑中可以检测到,在其余2个脑区中含量均低于检测限。DA则在下丘脑和大脑皮质中分布较多,脑干中检测不到信号。5-HT则在3个脑区中均有分布,含量为下丘脑>脑干>大脑皮质。实验得出,茶色素50mg·kg-1组可以显著降低吗啡依赖小鼠下丘脑NE、DA的含量,茶色素对吗啡依赖小鼠下丘脑、脑干和大脑皮质5-HT含量没有影响。由此推测,茶色素对吗啡依赖小鼠戒断作用可能与其下调下丘脑中NE、DA含量有关。现已发现β-EP作用于μ受体产生奖赏效应致欣快与满足感,从而产生药物依赖,阿片类药物拟β-EP,可以调解焦虑情绪的发生。本实验中茶色素12.5～10