经典名方经典的药食两相萃取相抑菌性和抗氧化性研究

经典名方经典的药食两相萃取相抑菌性和抗氧化性研究

丁香是一种喜光、湿、光、影的。它具有很强的抗寒性。现有的栽培品种可以安全地生活在北方，正常生长、开花和果实。丁香还具较强的耐旱性,对土壤要求不严,能耐瘠薄,除强酸性土壤外,其能在各类土壤上正常生长。丁香寿命较长,有数百年的古树,主要分布在亚洲温带地区及欧洲东南部。丁香提取物可用于果蔬以及肉制品的保鲜,是值得研究和开发的天然防腐源。丁香提取液还用于酱油保鲜,不仅达到很好的抑菌效果,还赋予酱油一种特殊的香味。丁香的甲醇、丙酮提取液对番茄灰霉病菌(Botrytiscirerea)菌丝的生长表现出较强的抑制作用,可用于番茄的表面杀菌和保鲜;此外还可对草莓进行涂膜低温保鲜,可以抑制呼吸强度,减少Vc等营养物质的损耗,显著延缓果实在贮藏间的品质降低,有效减少贮藏期间烂果的发生。厚朴(MagnoliaofficinalisRehd.etWils.)主要分布在湖北恩施、五峰、湖南永州的道县、江华、双牌县、四川都江堰、浙江景宁的丽水县和广西桂林的资源县等。厚朴(CORTEXMAGNOLIAEOFFICINALIS)是常用中药,具有行气燥湿、降逆平喘之功效,用于治疗脘腹胀痛、宿食不消、呕吐泻痢、气逆喘咳等症。厚朴提取物对芝麻油和猪油等油脂都有较强的抗氧化性。另外,厚朴酚具有很强的清除氧自由基的活性,对动物组织具有抗氧化作用以及抗衰老效果。和厚朴酚是一种联苯酚类化合物,作为厚朴的主要有效成分之一,具有广谱抗菌性,对大肠杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌等引起人类疾病的细菌和植物病原真菌均具有较强的抑制作用,且对水果采后致腐真菌有抑制作用。有关丁香和厚朴的抑菌性和抗氧化性研究有一些报道,但其不同溶剂萃取物的抑菌性和抗氧化性研究不多。为此,笔者通过对丁香和厚朴的不同溶剂萃取物抑菌性和抗氧化性进行研究,以期更好地了解其抑菌成分和抗氧化成分的存在部位,为更好地开发丁香和厚朴天然食品防腐剂和抗氧化剂提供参考。1材料和方法1.1材料表面1.1.1wi、化学、maagoliae丁香(FLOSCARYOPHYLLI)、厚朴(CORTEXMAGNOLIAEOFFICINALIS),购自河南千方药业有限公司。1.1.2聚乙酸乙酯、氯化钠、蛋白、脂质酸钠、脂酸乙酯盐、脂质中酸乙酯、氯化钠、蛋白、脂质酸钠、脂质酸钠、脂质酸钠、脂质酸钠微胶囊的生产乙醇、石油醚、葡萄糖、牛肉膏、氢氧化钠、乙酸乙酯、氯化钠、蛋白胨、琼脂,均为市售分析纯;二苯基苦味酰基自由基(DPPH),购自Sigma-Aldrich公司。1.1.3菌株和微生物实验室金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、黄曲霉(Aspergillusflavus)、黑曲霉(Aspergillusniger)、黑根霉(Rhizopusnigricans)、毛霉(Mucormucedo),均由河南工业大学微生物实验室提供。1.1.4仪器、仪器和仪器SF-320型高速万能粉碎机(河南周口制药机械厂);RE-52旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);101FX-1电热鼓风干燥箱(上海树立仪器仪表公司);150AB生化培养箱(上海树立仪器仪表公司);XFS-280M手提式压力蒸汽灭菌器(浙江新丰医疗器械有限公司);天浮牌系列电子天平(天平金羊天平仪器厂);722N型可见分光光度计(上海菁华科技仪器公司);743Rancimat油脂氧化稳定测定仪(瑞士万通公司)。1.2方法1.2.1马铃薯汁的制备①细菌培养基(牛肉膏蛋白胨培养基):将牛肉膏3.0000g,蛋白胨10.0000g,氯化钠5.0000g,琼脂20.0000g,蒸馏水1L,调pH为7.2～7.4,0.1MPa(121℃)高压灭菌20min,备用。②真菌培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基PDA):将马铃薯去皮,洗净,切成小块,称取300.0000g,放入1L水中煮沸20min,双层纱布过滤,得马铃薯汁,将其补足1L,再加20.0000g琼脂、20.0000g葡萄糖,煮沸,分装,0.1MPa(121℃)高压灭菌20min,备用。③0.85%生理盐水:将8.5000g氯化钠加入1L蒸馏水中,溶解后于0.1MPa(121℃)高压灭菌20min,备用。1.2.2悬浮液的制备取少量已活化的待测菌种于已灭菌的装有生理盐水的试管中,充分混匀,制成菌悬液,备用。1.2.3丁香浸膏的制备将丁香、厚朴粉碎,过40目筛,备用。准确称取50.0000g丁香粉,按料液比1∶12加入95%乙醇,浸提,于85℃水浴锅中回流5h,真空抽滤,浓缩至50ml(每毫升相当于1.0g原料),备用。取丁香提取液10ml,置于125ml分液漏斗中,加入10ml蒸馏水,震荡均匀,用石油醚萃取3次,每次5～10ml,收集、合并3次萃取的上清液;再用乙酸乙酯按相同的方法萃取。分别将丁香蒸馏水相部分、石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液浓缩至浸膏,浓度为0.04g/ml,密封,冷藏保存,备用。厚朴提取物的制备同上。1.2.4含菌培养基的制备将直径为6mm的圆滤纸片灭菌后放入各相提取物中浸泡2h,取出,置于常温下,备用。同时取适量的石油醚、乙酸乙酯、蒸馏水于烧杯中,放入灭菌纸片,作空白对照。将各培养皿中倒入15～20ml培养基,凝固后将各种受试菌菌悬液在相应的固体培养基上均匀涂布,制成含菌培养基。取浸泡过的滤纸片贴在含菌平板上,并放入一片对应的空白滤纸,每皿共贴4片。将细菌置于37℃下培养24h,真菌置于28℃培养箱中培养48h,记录抑菌圈的大小,确定抑菌效果。1.2.5抗逆反应试验1.2.5.dpph自由基清除率测定采用DPPH法测定。精确称取0.0126gN,N-二苯基三硝基苯肼(DPPH)自由基,用无水乙醇溶解定容至50ml容量瓶中,摇匀,低温保存。将DPPH自由基储备液取出,室温下放置,让其自然膨胀至刻度,吸取10ml,用无水乙醇定容至100ml容量瓶中,摇匀,得0.0252mg/ml的DPPH自由基溶液。用无水乙醇为基准在517nm处测其吸光度,按下列公式计算清除率:清除率(%)=1-[(At-A1)/A0]×100。式中,A0为517nm处零时刻DPPH自由基反应液的吸光度值;At为517nm处t时刻DPPH自由基反应液基本稳定时的吸光度值;A1为517nm处样品液的吸光度。1.2.5.油脂氧化稳定性测定将5ml新鲜炼制的猪油放入油脂氧化稳定性测定仪的样品瓶中,再加入1ml丁香萃取液和1ml厚朴萃取液,在743Rancimat油脂氧化稳定测定仪上测定,分别以5ml猪油和1ml水、5ml猪油和1ml乙酸乙酯、5ml猪油和1ml石油醚作空白试验。测定温度110℃,空气流量10L/h。根据记录曲线达到拐点时的诱导时间长短,以判断样品抗氧化性能的强弱。2结果与分析2.1抑菌性和抑菌能力由表1可知,丁香石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液及厚朴石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液抑菌能力较强,而两者的水萃取液抑菌性均较小。丁香石油醚萃取液对真菌的抑菌性较强,对细菌的抑菌性较弱;乙酸乙酯萃取液对细菌的抑菌性较强,对真菌无抑菌性;厚朴石油醚萃取物、厚朴乙酸乙酯萃取液对细菌和真菌的抑菌能力相似。由此可知,丁香石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液、厚朴石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液中防腐活性成分含量较高。2.2不同溶剂的顾问效应2.2.1清除自由基能力由图1可知,试样所用6种萃取液均有一定的清除自由基作用,均达到90%以上,但清除能力差异明显。丁香各溶剂萃取液清除自由基能力较强;而厚朴各萃取液清除自由基能力相对较弱,各萃取液清除自由基能力的强弱依次为:丁香石油醚萃取液>丁香水萃取液>丁香乙酸乙酯萃取液>厚朴石油醚萃取液>厚朴乙酸乙酯萃取液>厚朴水萃取液。2.2.2抗氧化能力的比较图2显示,丁香和厚朴的不同溶剂萃取液加入到猪油中,都对猪油有一定的抗氧化效果。其中丁香乙酸乙酯萃取液、厚朴乙酸乙酯萃取液、石油醚萃取液的抗氧化能力较强,丁香石油醚萃取液次之,丁香水萃取液、厚朴水萃取液的抗氧化能力相对较弱。各萃取液抗氧化能力的强弱为:厚朴乙酸乙酯萃取液>厚朴石油醚萃取液>丁香乙酸乙酯萃取液>丁香石油醚萃取液次>丁香水萃取液>厚朴水萃取液。3套溶剂萃取液抗氧化能力测定方法(1)丁香石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液、厚朴石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液均有较强的抑菌能力,含有较多防腐活性成分。丁香、厚朴石油醚相萃取液、乙酸乙酯萃取液、水萃取液均有一定的清除自由基的能力,说明各萃取相均含有较强的抗氧化成分,其清除自由基强弱顺序为:丁香石油醚萃取液>丁香水萃取液>丁香乙酸乙酯萃取液>厚朴石油醚萃取液>厚朴乙酸乙酯萃取液>厚朴水萃取液。此外,丁香和厚朴的不同溶剂萃取液对猪油表现出较强的抗氧化能力,各提取液抗氧化能力强弱顺序为:厚朴乙酸乙酯萃取液>厚朴石油醚萃取液>丁香乙酸乙酯萃取液>丁香石油醚萃取液>丁香水萃取液>厚朴水萃取液。(2)长期以来,食品保鲜主要依靠合成防腐剂和