倒提壶药材的质量控制标准研究

倒提壶药材的质量控制标准研究

提壶来自紫草科植物的官方机密草。本品在新疆地区资源较丰富,民间应用广泛。据《维吾尔药志》记载,倒提壶性平、清热解毒、降压清脑。用于头痛头晕、高血压、记忆力差、痰喘咳嗽、神经衰弱等症。本品虽已收载于《新疆药用植物志》、《新疆中草药》、《新疆植物志》、《中国植物志》等多种书籍,但目前尚无药材质量标准,很难保证其在临床使用中的安全性和有效性。为此,本文对倒提壶药材的质量标准进行研究,并建立其质量标准草案。1仪器、试剂和仪器Waters2695高效液相色谱仪(美国Waters公司),AG-135电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司),SK3300LH超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司),Direct-QTM5超纯水仪(Millipore公司),YOKO-ZS紫外线分析摄影仪(武汉药科新技术开发公司),YOKO-DF薄层电动涂敷器(武汉药科新技术开发公司),ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。β-谷甾醇对照品(购自中国生物制品检定所,批号为110851-200504),其它试剂均为分析纯。倒提壶样品分别于2007～2008年采自新疆乌鲁木齐市燕儿窝、乌拉泊、南山、奇台等地,经新疆医科大学附属中医医院中药鉴定室李永和主任药师鉴定均为紫草科植物药用琉璃草(CynoglossumofficinaleL.)的全草。2方法和结果2.1药用莲子草属不同形态特征的植物分类倒提壶药材为紫草科植物药用琉璃草(CynoglossumofficinaleL.)的全草。新疆地区与药用琉璃草同属植物还有大果琉璃草(C.divaricatumSteph.exLehm.)、大萼琉璃草(C.macrocalycinumRiedl.)、绿花琉璃草(C.viridifiortunPall.exLehm),相近的植物还有紫草科长柱琉璃草属植物长柱琉璃草[Lindelofiastylosa(Kar.etKir.)Brand.]和长蕊琉璃草属植物长蕊琉璃草(SolenanthuscircinnatusLdb.),各植物形态特征的主要区别见表1,药用琉璃草的形态特征较易与相近种属植物区分。2.2对照品溶液的制备对供试品前处理方法和展开剂进行反复试验后,确定本品薄层色谱鉴别方法为:取本品粉末2g,捣碎,加三氯甲烷20ml,超声提取15min,滤过,滤液挥干,残渣加三氯甲烷1ml使溶解,作为供试品溶液。另取β-谷甾醇对照品,加三氯甲烷制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷∶乙醚∶乙酸乙酯(40∶11∶5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,加热至斑点显色清晰,检测不同产地的2个批号倒提壶药材供试品色谱中,与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,β-谷甾醇Rf值为0.38,对照药材和供试药材共有4个主斑点,斑点均可对应一致,经实验验证重现性好,结果见图1。2.3郑和提取物2.3.1著录h和著录k水分测定法、总灰分测定法、酸不溶性灰分测定参照《中国药典》2010年版(一部)附录ⅨH和附录ⅨK。根据测定结果,暂定5批倒提壶药材水分不得过15%,总灰分不得过18%,酸不溶性灰分不得过1.5%(表2)。2.3.2水溶液浸出物测定预试验分别参照《中国药典》2010年版(一部)附录ⅩA,采用水溶性浸出物热浸法和冷浸法以及75%醇溶性浸出物热浸法和冷浸法测定,结果水溶性浸出物测定中药液过滤困难,以75%醇溶性浸出物热浸法结果重现性较好,故采用此法进行浸出物测定。根据检测结果,暂定倒提壶药材浸出物不得少于18.00%(表2)。3薄层色谱鉴别试验3.1倒提壶含有生物碱类成分天芥菜品(倒提壶碱、海蓼苏品)、天芥菜定、天芥菜碱、毛果天芥菜碱等。由于中国生物制品检定所未提供上述成分的对照品,所以本试验先采用经鉴定为正品的原植物对照药材为对照,分别采用以下条件进行实验:(1)取本品粉末2g,加浓氨试液2ml与苯20ml,放置过夜,滤过,取滤液蒸干,残渣加三氯甲烷1ml使溶解,作为供试品溶液,以乙酸乙酯∶甲醇∶浓氨试液(17∶2∶1)为展开剂,结果供试品色谱斑点显色不清晰。(2)取本品粉末2g,加乙醇20ml,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加稀盐酸10ml,搅拌使溶解,滤过,滤液用40%氢氧化钠溶液调节pH值至10以上,用三氯甲烷振摇提取2次,每次10ml,合并三氯甲烷液,蒸干,残渣加无水乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液,以苯∶乙酸乙酯∶二乙胺(15∶10∶2)为展开剂,结果供试品色谱中,斑点显色仍不清晰。故又选择倒提壶的另一成分β-谷甾醇为对照品,再次调整供试品前处理方法:(3)取本品粉末2g共4份,捣碎,分别加乙醇20ml,超声提取15min、30min和回流提取15min、30min,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。(4)取本品粉末2g共4份,捣碎,分别加三氯甲烷20ml,超声提取15min、30min和回流提取15min、30min,滤过,滤液挥干,残渣加三氯甲烷1ml使溶解,作为供试品溶液。经试验,按(4)法制备供试品溶液进行薄层色谱鉴别试验效果较好。又因药用琉璃草含有的天芥菜品属于叔胺型生物碱,其碱性仅次于季胺碱,又对展开系统的研究:分别以(1)石油醚(30～60℃)∶乙酸乙酯∶甲醇(20∶5∶1);(2)环己烷∶乙醚∶乙酸乙酯(40∶11∶5)为展开剂,经试验结果表明,以(2)展开系统展开,薄层斑点清晰,分离好。最终确定了倒提壶药材的薄层色谱方法,结果表明采用此法鉴别倒提壶中β-谷甾醇和对照药材操作简便,专属性强,主斑点清晰,分离度高,为倒提壶的鉴别提供了一种准确、有效的新方法。3.2经测定5批倒提壶药材的总灰分(生理性灰分)最高可达16.35%,较一般全草类植物高(大多全草类植物多在10%以下)