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实验二微生物的分离、纯化和接种

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。接种是微生物实验及科研的一项最基本的操作技术，是将一种微生物移接到灭过菌的新培养基的过程。接种方法有斜面接种、液体接种、平板接种、穿刺接种等。在接种过程中，为了确保纯种不被杂菌污染，必须采用严格的无菌操作。微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单菌落可用稀释平板法、划线分离法等。一、接种环的使用

接种环是用铂丝或细电炉丝制成的，使用前后都要用酒精灯外焰严格灭菌。二、斜面接种法

1、将菌种管（若是液体菌种应先摇匀）与空白斜面培养基管握在左手大拇指和其他四指之间，菌种管位于上侧，培养基管位于下侧，斜面均向上。

2、右手持接种环火焰灭菌。以右手掌心、小指和无名指同时夹取两管口的棉塞，将两试管口迅速通过火焰灭菌。

3、在火焰附近，用灭菌的接种环从菌种管挑取少量菌苔或一环菌液，伸进待接种的培养基管斜面底部，向上“Z”形划线。接种时不要划破培养基表面，沾菌的接种环进出试管时不应触及试管口。

4、接种完后灼烧管口，塞上棉塞。灼烧接种环，放回原处。

5、将接种好的试管斜面放到37℃培养箱中培养24h后观察结果。三、平板划线接种法平板划线接种法是最常用的分离培养细菌的方法,通过平板划线后,可使细菌分散生长,形成单个菌落,有利于从含有多种细菌的标本中分离出目标菌。常用的平板划线接种法有以下两种：1、分区划线法：先将接种环灭菌后,沾取标本均匀涂布于平板培养基边缘一小部分(第1区域),将接种环火焰灭菌,待冷却后只通过第1区域3～4次后连续划线(第2区域),依次可共划线3～5区域,每一区域细菌数可逐渐减少,直到分离出单个菌落为止。最后将平皿倒置于37℃培养箱中培养24h后观察结果。

2、连续划线法：灭菌接种环，冷却后取适量混匀的菌液，然后在培养基表面连续“之”字形划线，直至划完整个平板表面。四、平板倾注接种法平板倾注法是将待检原液或经适当稀释的标本1ml,置于直径9cm无菌平皿内,倾入已融化并冷至50℃左右的培养基约15ml,立即混匀待凝固后倒置于37℃培养18～24小时,做菌落计数。五、穿刺接种法穿刺接种是把菌种接种到固体深层培养基中（由培养基中央直刺到距管底约0.3～0.5cm处）的方法，也叫穿刺培养。接种完毕后，静置培养，然后可根据穿刺部分菌落的生长和扩散状况来判断该微生物的运动性能和对氧气的需求状况。要保证穿刺接种的成功，主要

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