调神益肾针法对生殖大鼠雌激素分泌器官形态功能的影响

调神益肾针法对生殖大鼠雌激素分泌器官形态功能的影响

调神益肾法是由天津中医药大学第一附属医院的科学家史学敏为治疗女性更年期综合征而制定的针灸处方。主要穴位为风府、百会、气海和肾阴虚。用于治疗女性更年期综合征。笔者先期研究表明,本法能调节下丘脑—垂体—卵巢轴功能,使雌性更年期大鼠血清原下降的雌二醇(E2)水平上升、上升的卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)水平下降,3者重归稳态。鉴于卵巢、肾上腺是体内雌激素(包括E2、雌酮、雌三醇)及其前体物质合成、分泌的主要器官,本研究应用形态学技术,观察雌性更年期大鼠卵巢、肾上腺衰老性变化及调神益肾针法的干预效应,以进一步明确提高雌性更年期大鼠血清E2水平的机制。1实验动物及分组选用4月龄雌性Wistar大鼠15只,平均体重180g左右;16月龄雌性Wistar大鼠30只,平均体重290g左右,均由天津市劳动职业病卫生研究所动物室提供。喂养在12h光照、12h黑暗的条件下,自由摄食、饮水,室温控制在22～28℃。Reichert-Jung2040旋转式切片机,德国产;OlympusBH-2显微镜,日本产;HPIAS-100高清晰度彩色病理图文分析系统,武汉同济医科大学千屏影像公司提供。室验室常规试剂,分析纯。目前用于更年期综合征研究的大鼠模型有3种:切除卵巢的去势术、X线损伤术、自然老化术。由于前二者均是通过人为切除或损伤卵巢,制造一个雌激素突然降低的环境模拟更年期综合征的发生,与临床实际情况不尽相符,因此,笔者选择与人类更年期综合征病理变化更为近似的后者。购进的动物适应性喂养1周后,30只16月龄雌性Wistar大鼠随机分为模型组15只,针刺组15只,15只4月龄雌性Wistar大鼠作为青年组。针刺组根据华兴邦等制定的大鼠穴位图谱选取风府、百会、气海、肾俞穴。风府缓慢向下直刺0.3cm,百会向后平刺0.5cm,气海直刺0.5cm,均行中等幅度的提插捻转手法,平补平泻;肾俞向脊柱方向斜刺0.5cm,行小幅度高频捻转补法。均留针20min,中间行针2次,加强刺激。每日1次,连续6天,中间休息1天,4周为1疗程。青年组、模型组动物每天只进行抓取刺激,不予针刺。为避免日夜节律对观察指标的影响,标本采集均在上午9:00～11:00进行。待针刺组动物接受针刺刺激满1疗程时,3组动物同时断头处死,摘取卵巢、肾上腺,置10%福尔马林液中固定。再经脱水、包埋、切片、HE染色。图像采用光镜观察、摄片,并经计算机图像分析。数据用均数±标准差(X¯¯¯±S)(X¯±S)表示,借助SPSS统计软件作方差分析。2各组大鼠肝肾组织结构比较青年组15只大鼠30个卵巢,在低镜下,可见到大量原始卵泡及大小、数量不等的初级卵泡、窦状卵泡,间质腺丰富(见照片1);镜下计数,每个卵巢切片原始卵泡数为4.22±0.97,初级卵泡数为4.89±1.27,窦状卵泡数为4.67±1.00(见表1)。模型组15只大鼠30个卵巢,在低倍镜下,可见原始卵泡、初级卵泡和窦状卵泡均较少,间质腺稀疏(见照片2);镜下计数,每个卵巢切片原始卵泡数为2.56±1.07,初级卵泡数为2.73±1.12,窦状卵泡数为2.84±1.21,与青年组比较均显著减少(P<0.01)(见表1)。针刺组15只大鼠30个卵巢。在低倍镜下,可见有数量不等的原始卵泡、初级卵泡和窦状卵泡,间质腺较多(见照片3);镜下计数,原始卵泡数为2.80±1.03;初级卵泡数为3.10±1.25;窦状卵泡数为3.13±1.81;与青年组相比仍均显著减少(P<0.01),与模型组相比均无显著性统计差异(见表1)青年组15只大鼠30个肾上腺,在高倍镜下,可见束状带细胞(因大鼠肾上腺皮质的束状带较厚,细胞较大,所以本次实验以束状带细胞为代表)排列成单行或双行的细胞索,相互平行,与被膜垂直,细胞体较大,呈立方形或矮柱状,细胞质内含有较多、较大的空泡(系HE染色标本上,合成雌激素的前体物质胆固醇等被脂溶剂溶解而形成)(见图4);经高清晰度病理图像分析系统测量(×40),肾上腺皮质总厚度为1137.12±83.97μm,束状带厚度为729.89±107.31μm(见表2)模型组15只大鼠30个肾上腺,在高倍镜下,可见束状带细胞失去相互平行排列的结构特征,交叉呈网,不再与被膜垂直,细胞体较小,呈扁平或多角形,细胞质内空泡较少、较小(见照片5);肾上腺皮质总厚度为800.82±119.06μm,束状带厚度为471.99±57.68μm,均较青年组明显变薄(P<0.01),呈萎缩性改变(见表2)。针刺组15只大鼠30个肾上腺,在高倍镜下,可见束状带细胞排列成单行或双行的细胞索,相互间近似平行,基本与被膜垂直,细胞体较大,呈立方形或球形,细胞质内空泡较多(见照片6);肾上腺皮质总厚度为1106.67±110.56μm,束状带厚681.57±69.04μm,均较模型组明显增厚,接近青年组(见表2)。3调神益肾针法对男性平台大鼠肝肾皮质形态功能的影响卵巢、肾上腺是雌激素及其前体物质合成、分泌的主要器官。卵巢中窦状卵泡的内泡膜细胞在LH的作用下,将具有27碳原子结构的胆固醇衍化为雄烯二酮,后者穿过卵泡基底膜,进入卵泡内的颗粒细胞,颗粒细胞在FSH刺激下,芳香化酶细胞色素P450活化,雄烯二酮受芳香化酶催化,转变为雌酮及E2,这些激素经卵泡周围的微静脉进入体循环,小部分潴留于卵泡液中、。此外,卵巢中间质腺细胞也能分泌一定量的类固醇激素如孕激素、雌激素和雄激素。肾上腺由皮质和髓质组成,前者自外向内分为3个带:球状带、束状带和网状带。近年来研究表明,肾上腺皮质中的类固醇激素合成酶呈区域性分布,如醛固酮生成过程中最终步骤的18-羟基类固醇脱氢酶只存在于球状带,而合成皮质醇、雄激素和雌激素所必需的17-羟化酶仅见于肾上腺皮质的束状带和网状带,因此又对肾上腺皮质作了机能性分区,即球状带为外侧区,联合的束状带—网状带为内侧区。在功能上,肾上腺皮质内侧区只直接合成、分泌少量的雌激素,主要是合成、分泌雄激素,但后者可在脂肪、肝脏、脑、骨髓、肌肉等外周组织转化为雌激素,对卵巢功能起一定补偿作用。本研究发现:(1)模型组大鼠卵巢中原始卵泡数、初级卵泡数、窦状卵泡数均较青年组显著减少,间质腺稀疏;针刺组大鼠卵巢中原始卵泡及初级、窦状卵泡数较模型组略有增加,但无统计学差异,仍明显低于青年组,而间质腺较模型组丰富。提示调神益肾针法可部分改善卵巢形态功能,但最终不能逆转卵巢的自然衰老过程。(2)模型组大鼠肾上腺皮质总厚度、束状带厚度均呈萎缩性改变,且束状带细胞交叉呈网,失去平行排列及与被膜垂直的结构特点,细胞体小而扁平,胞质内合成雌激素的前体物质胆固醇含量减少(HE染色的切片上表现为胞质中空泡少而小);针刺组大鼠的肾上腺皮质总厚度、束状带厚度增加,与模型组相比有显著差异,束状带细胞索近似平行排列,细胞体积增大,胞质中胆固醇含量增多(HE染色的切片上表现为胞质中空泡大而多)。表明调神益肾针法能促使雌性更年期大鼠肾上腺皮质中合成、分泌雌激素及其前体物质的有关形态结构往良性方面转化。由上述可见,调神益肾针法提