宫衣净酊急性毒性实验研究

宫衣净酊急性毒性实验研究

宫衣净汤是由急性子和中药制成的汤剂。临床上主要用于预防和控制奶牛的胎衣不足，促进子宫收缩，消除不良子宫萎缩。宫衣净酊预防奶牛胎衣不下有效率达95%,治疗总有效率达85.7%。本试验通过对小鼠灌胃给药,研究了宫衣净酊对小鼠灌胃的急性毒性,从小鼠体重、脏器指数、血常规指标和病理变化等方面对其安全性进行了初步评价,为临床安全用药提供理论依据。1材料和方法1.1饲养小鼠产品昆明小鼠40只,体重18~22g,雌、雄各半,购自农业部兰州生物制品研究所。饲养小鼠的室温为20℃左右,自然光照,饲喂小鼠专用料,自由采食和饮水。试验前小鼠饲养7d,观察其健康状况,选择健康、营养状况良好小鼠进行试验。1.2%氯化钠注射液宫衣净酊(1mL相当于原生药0.5g),由本实验室自制;0.9%氯化钠注射液。CELL-DYN1200全自动血细胞分析仪(美国雅培公司)、CP223C电子天平(上海奥豪斯仪器有限公司)、鼠笼、小鼠饲料、一次性注射器等。1.3小鼠的一般情况调查预试验按改良寇氏法设计,测定半数致死量(LD50),结果小鼠全部存活,未能找出最小致死剂量,无法测出LD50,故进行最大给药量试验。参照文献的试验方法,将40只小鼠随机分为2组,每组雌、雄各10只。给药组按每千克体重40g宫衣净酊灌胃,对照组按每千克体重80mL生理盐水灌胃,分2次灌服,2次给药间隔8h。首次灌胃前禁食12h但不禁水,间隔期间不供食。给药后常规饲养,观察7d,每天观察小鼠的采食、饮水、精神、死亡、被毛、粪便和运动等情况,记录小鼠是否出现毒性反应等异常变化。给药第8天上午将所有小鼠称重,摘眼球采血,血液保存于加有抗凝剂的试管,进行血常规分析。主要分析白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)、中间细胞(MID)、粒细胞(GRA)、淋巴细胞百分率(L%)、中间细胞百分率(M%)、粒细胞百分率(G%)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、平均血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度(RDW)、血小板(PLT)等15项指标。随后剖检,观察实质性脏器有无肉眼病理变化,对心、肝、脾、肺、肾称重并计算脏器指数(脏器湿重/体重×100%)。1.4处理数据试验数据以平均数±标准差(x±S)来表示,采用SPSS17.0软件进行统计分析,组间数据比较用单因素方差分析。2结果2.1小鼠口服宫衣净消费小鼠口服宫衣净酊无法测出LD50。进行最大给药量试验期间,未见小鼠死亡,故小鼠口服宫衣净酊的日最大给药量为40g/kg。相当于奶牛临床日用量(0.4g/kg)的100倍,这表明宫衣净酊较为安全。2.2小鼠脏器指数变化小鼠体重变化情况见表1。从表中可以看出,给药组小鼠增重和相对增重略低于对照组,但给药组末重(第8天体重)、增重和相对增重都与对照组无显著差异(P>0.05)。小鼠脏器指数变化见表2。从表中可以看出,给药组心脏、肺脏和脾脏指数略高于对照组,肝脏和肾脏指数略低于对照组,但均与对照组无显著差异(P>0.05)。这表明口服宫衣净酊对小鼠的机体尤其是实质性脏器的生长无明显不良影响。2.3血常规指标检测小鼠主要血常规指标变化见表3和表4。对小鼠的血常规15项指标分析表明,给药组淋巴细胞百分率显著高于对照组(P<0.05),中间细胞百分率和粒细胞百分率显著低于对照组(P<0.05)。给药组其他血常规指标指标与对照组无显著差异。这说明该制剂具有提高免疫的作用。2.4小鼠急性毒性试验总结构及病理组织学观察给药当天,给药组小鼠精神沉郁,采食、饮水和自主活动减少,有些小鼠卧地不起,运动时步态不稳,给药次日逐渐恢复正常。连续观察7d后,所有小鼠被毛有光泽,采食、活动均正常,无小鼠死亡。试验结束时,给药组和对照组小鼠解剖后观察皮下、心、肝、脾、肺、肾和胃肠道等器官无明显肉眼病变。表明宫衣净酊不会引起实质性脏器的病理损伤。3对小鼠口服宫衣净土指标的影响最大给药量试验是指在合理的给药浓度及合理的给药容量的条件下,以允许的最大剂量给予试验动物,观察动物出现的反应。由于许多中药制剂的毒性较小,常常无法测出LD50,多采用最大耐受量或最大给药量来测定其对试验动物的急性毒性。为此,本试验采用最大给药量试验研究了宫衣净酊的毒性。体重是反映动物机体发育、疾病和营养状况的主要指标,内脏器官是其生理功能的物质基础,也是评价脏器生理功能和发育程度的重要指标之一,可以较为宏观地反映动物总的营养状态、脏器的生长状况和内脏器官病变的性质和程度。血细胞是组成血液的主要成分,常分为红细胞、白细胞和血小板三大类,其分类计数结果可以反映动物机体的健康状态,也是毒性试验检测的重要指标之一。试验中对这些指标的测定结果表明,小鼠口服宫衣净酊的日最大给药量相当于临床奶牛日用量的100倍,该制剂对小鼠实质性脏器的生长和体重增加无明显影响,对实质性脏器也无明显病理损伤。对血常规指标,除淋巴细胞百分率