中国热带农业科学院环境与植物保护研究所柑橘黄龙病检测中心通过CMA资质认定

龙病检测中心通过CMACMA资质认定PCRPCR技术，关键词：柑橘黄龙病；PCRCitrusHuanglongbing(HLB)isaseriousdiseasethatthreatensthecitrusindustryandcausessignificanteconomiclosses.Therefore,establishinganaccurate,rapid,andreliabledetectiontechniqueforHLBisofgreatsignificanceforitspreventionandcontrol.ThispaperintroducesthetechnicalrouteanddetectionmethodsoftheCitrusHuanglongbingDetectionCenteroftheInstituteofEnvironmentandPlantProtectionoftheChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciencesthatpassedtheCMAcertification,includingreal-timefluorescencequantitativePCRtechnologyandtraditionalPCRtechnology,andexperimentalvalidation.Theresultsshowedthatthetechnicalrouteanddetectionmethodhadhighaccuracy,sensitivity,andspecificity,andcouldbeusedfortheearlydiagnosisandmonitoringofCitrusHuanglongbing.Keywords:CitrusHuanglongbing;PCRtechnology;accuracy;sensitivity;specificity柑橘黄龙病是一种由斯里兰卡萎缩杆菌（CandidatusLiberibacter重危害柑橘产业。目前，柑橘黄龙病在世界范围内都已有报道。在中国，柑橘黄龙病也已成为柑橘产业面临的严重问题之一。测技术就显得尤为重要。PCR技术具有灵敏度高、特异性强、快速等优CMA资质认定的技术路线和检测方法，并进行了实验验1713份健康柑橘样品。CTAB法将试验样品中的总核酸提取出来，并进行纯化、定量PCRABI7500PCRHLB特异性引物和探针，按照一般的PCR反应条件进行PCR反应，根据内参基因数量PCRPCRHLB16SrDNA基因HLBPCR反应条件进行PCR反应，并用1.2%琼脂糖凝胶电泳法检测PCR产物。PCR以临界阈值CT值≤35为阳性判断，实时荧光定量PCR技术检测结1717份（100%）均为阳性，13份健康柑橘样品均为阴性（图1A）。PCR以16SrDNA基因片段为目标位点进行PCR扩增，并通过2%琼脂PCR17份柑橘黄龙病感染的样品中，有17份（100%）产生了特异性条带，13份健康柑橘样品均未产生特异性条带（图1B）。PCRPCR技术对柑橘黄龙病进PCR技术均能够准确、快速、特异地检测出HLB样品，且能够避免假阳PCRPCR技术无需人工工作效率。值得注意的是，本研究中使用的扩增引物和探针均符合HLBCMA异性的特点，可用于柑橘黄龙病的早期诊断和监测。该检测方法的建立，为柑橘黄龙病的防控提供了一种可行的技术方案。ZhangM，LinH，ChenJ，etal.Developmentofaloop-mediatedisothermalamplificationassayforrapidandspecificdetectionofcandidatusliberibacterasiaticus,thecausativeagentofcitrushuanglongbing[J].JournalofMicrobiology,2014，52(6):488-495.ZhengZ，HeC，ZhangM，etal.Molecularanalysisrevealsdiverseandnewcandidatusliberibacterspeciesincitrus[J].JournalofAppliedMicrobiology,2014，117(1):113-122.SuH，ZhangL，LiW，etal.Developmentandapplicationofloop-mediatedisothermalamplificationfordetectingthecitrushuanglongbingbacterium,candidatusliberibacterasiaticus[J].JournalofMicrobiologyandBiotechnology,2011，21(5):470-477.LiW，HartungJS，LevyL，etal.Quantitativereal-timePCRfordetectionandidentificationofcandidatusliberibacterspeciesassociatedwithcitrushuanglongbing[J].JournalofMicrobiologyMethods,2006，66(1):104-115.LiW，HartungJS，LevyL，etal.Quantitativereal-timePCRfordetectionandidentifi