白芷香豆素的镇痛机制

白芷香豆素的镇痛机制

《白脸》最早写在《神农本草经》中。它具有加热和收敛、益气、通风解粘液、益气、解脓等功效。用于治疗感冒头痛、目咙痛、鼻干痛、牙齿疼痛、伤口疼痛等。特别是阳明经头痛有明显的镇痛效果。白脸色的有效成分包括白脸色的香豆素和白脸色的作用。聂红等人发现，白脸色的总发芽具有一定的镇痛作用，但对于具有一定抗炎作用的白脸色，经过硫处理，白脸色的含量显著降低。香豆素类成分的含量远高于其他成分的含量，达到1%。本研究组结果表明，白睡莲具有良好的镇痛和抗炎作用，疼痛持续时间长，耐用性和成绩性容易增加。因此，我们必须进一步澄清疼痛的产生机制，为中医镇痛剂的开发奠定良好的基础。1材料和方法1.1材料表面1动物昆明种小鼠,体质量18～22g,雌雄各半,合格证号:医动管字10-5107,由长春高新医学动物实验研究中心提供.2实验用白砂糖的制备白芷香豆素(CoumarinofAngelicaedahuricae,CAD)由北华大学药学院药理教研室配制.实验用白芷购自吉林市江城大药房,经鉴定为伞形科植物杭白芷的干燥根.将白芷粉碎成粗粉,浸泡65%乙醇中,按文献方法提取.盐酸吗啡注射液,沈阳第一制药厂,批号:051108;盐酸纳洛酮,益桥(湖南)制药有限公司,批号:20060203;冰醋酸,沈阳市东兴试剂厂,批号:20060525.3hhs1-ni小鼠热板仪,成都泰盟生物技术有限公司;电热恒温水浴锅HH·S1-Ni,北京长安科学仪器厂生产;微量移液器,法国Glison公司生产;80-1离心机,上海手术器械厂生产;723分光光度仪,上海第三分析仪器厂生产.1.2方法1.2.1各组小鼠痛行为测定预选55℃热板实验痛阈合格的雌性小鼠50只,随机分为5组,对照组腹腔注射生理盐水0.1mL/10g,CAD组腹腔注射CAD60mg/kg,CAD+纳洛酮组腹腔注射CAD60mg/kg后30min腹腔注射纳洛酮5mg/kg,吗啡组腹腔注射吗啡10mg/kg,吗啡+纳洛酮组腹腔注射吗啡10mg/kg后30min腹腔注射纳洛酮5mg/kg,热板法测定给药后30,60,90,120,180,240min小鼠痛阈值.1.2.2cad的镇痛作用预选55℃热板实验痛阈合格的雌性小鼠30只,随机分为3组,对照组腹腔注射生理盐水0.1mL/10g,CAD组腹腔注射CAD60mg/kg,CAD+利血平组腹腔注射利血平4mg/kg后4h腹腔注射CAD60mg/kg,热板法测定给药后30,60,90,120,180,240min小鼠痛阈值.观察CAD的镇痛作用与单胺类神经递质的关系.1.2.3血清no含量检测昆明种小鼠60只,雌雄各半,体质量18～22g,随机分为6组,分别为阴性对照组(生理盐水0.1mL·10g)、吗啡组(10mg/kg)、CAD低剂量组(30mg/kg)、CAD中剂量组(60mg/kg)、CAD高剂量组(120mg/kg),每天分别腹腔注射,连续4d(吗啡组除外),末次给药后(1.5h后阳性组腹腔注射吗啡10mg/kg),每只鼠右后足跖皮下注射2.5%甲醛溶液20μL,2h后将小鼠快速断头取血,分离血清,-20℃冰箱保存.采用硝酸还原酶法测定血清中NO的含量,具体步骤参照NO检测试剂盒使用说明书进行.1.3处理数据实验数据均以均数±标准差(ˉx±s)(x¯±s)表示,两组间差异比较采用t检验,多组间差异比较采用方差分析.2结果2.1cad的镇痛作用与对照组比较,CAD(60mg/kg)一次性给小鼠腹腔注射,30min即显现出镇痛作用,90～120min作用达到最强(P<0.001),可持续到240min以上.同剂量CAD腹腔注射0.5h后,腹腔注射纳洛酮(5mg/kg)可以使CAD的镇痛作用明显减弱,仅在30～60min期间有作用,说明纳洛酮可以部分拮抗CAD的镇痛作用.而吗啡的镇痛作用完全被纳洛酮拮抗(见表1).2.2利血平-cad与cad的联用与对照组比较,利血平(4mg/kg)与CAD(60mg/kg)合用,明显减弱其镇痛作用,说明利血平可以部分拮抗CAD的镇痛作用(见表2).2.3各组小鼠血清中no、no含量的比较与对照组比较,CAD(60mg/kg)连续4d腹腔注射给药,CAD中、高剂量组均使小鼠血清中NO的含量下降,并且呈现明显的剂量效应关系.而吗啡组小鼠血清中NO的含量明显上升(见图1).3利血平对cad的镇痛作用纳洛酮是阿片受体拮抗药,可以阻断吗啡与μ,δ,κ型阿片受体结合,完全拮抗吗啡的镇痛作用.本实验利用纳洛酮观察CAD镇痛作用与阿片受体的关系.结果显示纳洛酮可以部分阻断CAD的镇痛作用.提示CAD的镇痛作用可能与阿片受体之间存在一定的关系.文献报道脑内单胺类神经递质与痛和镇痛有关.去甲肾上腺素能神经末梢兴奋时可释放递质NE,与疼痛有密切关系,利血平属抗去甲肾上腺素能神经末梢药,它主要抑制囊泡膜对递质NE的主动摄取过程,从而使囊泡内贮存的递质逐渐减少,甚至耗竭,当神经冲动到达交感神经末梢时,就没有足够的NE被释放,由于利血平能对抗CAD的镇痛作用,说明CAD的镇痛作用可能依赖于脑内单胺类神经递质.目前,已有大量证据表明NO在中枢及外周的不同痛觉调制中起重要作用.有文献报道,利用福尔马林致痛动物模型,腹腔或脊髓蛛网膜下腔内注射NOS抑制剂L-NAME对第一期反应无明显影响,但显著抑制第二期反应,起到明显的镇痛作用.而预先给予大鼠L-Arg可以明显对抗L-NAME的作用,提示NO参与了外周和脊髓水平的痛觉调制过程,NO具有明显的痛敏效应.本研究