酱腌菜咸胚中亚硝酸盐的测定 顶空-气相色谱法

酱腌菜咸胚中亚硝酸盐的测定顶空-气相色谱法范围本文件规定了酱腌菜咸胚中亚硝酸盐的测定方法。本文件适用于顶空-气相色谱法测定酱腌菜咸胚中亚硝酸盐。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5009.33食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。原理在酸性条件下，环已基氨基磺酸钠和亚硝酸钠在酸性条件下反应生成环己醇，环己醇在酸性条件下又继续与亚硝酸钠发生酯化反应生成环己烯，环己烯在常温下成气态，采用顶空气相进样系统进行定量检测。根据环己烯色谱响应值与亚硝酸盐浓度成正比，计算出酱腌菜咸胚中亚硝酸盐含量。试剂与材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1亚铁氰化钾[K4Fe（CN）6·3H2O]。5.1.2乙酸锌[Zn（CH3COO）2·2H2O]。5.1.3冰乙酸（CH3COOH）。5.1.4硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）。5.1.5环己基氨基磺酸钠（C6H11NHSO3Na）。5.1.6浓硫酸（H₂SO₄）。5.2试剂配制5.2.1亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1000mL。5.2.2乙酸锌溶液（220g/L）：称取220.0g乙酸锌，先加30mL冰乙酸溶解，用水稀释至1000mL。饱和硼砂溶液（50g/L）：称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷却后备用。环己基氨基磺酸钠溶液（10mg/mL）：称取5.0g环己基氨基磺酸钠，用水溶解，并稀释至500mL。硫酸溶液（100g/L）：量取27mL浓硫酸小心缓缓加入400mL水中，后加水至500mL。5.3标准品亚硝酸钠（NaNO2，CAS号:7632-00-0）：基准试剂，或采用具有标准物质证书的亚硝酸盐标准溶液。5.4标准溶液配制5.4.1亚硝酸钠标准储备溶液（200ug/ml）：以亚硝酸钠计）:准确称取0.1000g于110℃~120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解，移入500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。亚硝酸钠标准使用液A（1.0ug/mL）：临用前，吸取2.50mL亚硝酸钠标准储备溶液，置于500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。亚硝酸钠标准使用液B（0.05ug/mL）：临用前，吸取5.00mL亚硝酸钠标准溶液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。仪器和设备6.1气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID）。6.2自动顶空进样器。6.3顶空进样瓶：20ml。6.4分析天平：感量0.1mg。6.5涡旋仪。6.6容量瓶：10mL、50mL和100mL6.7恒温水浴锅。6.8恒温干燥箱。6.9移液器或移液管：1mL和5mL。7分析步骤7.1样品制备取适量的样品研磨成均匀的匀浆状。为避免水分损失，研磨过程中应避免产生过多的热量。7.2提取称取3g（精确至0.001g）匀浆试样，置于250mL具塞锥形瓶中，加5mL50g/L饱和硼砂溶液，加入70℃左右的水约60mL，混匀，于沸水浴中加热15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。定量转移上述提取液至100mL容量瓶中，加入2mL106g/L亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL220g/L乙酸锌溶液，摇匀，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。7.3测定条件7.3.1顶空进样器条件顶空进样器测定参考条件如下：恒温炉温度50.0℃，样品流路温度90.0℃，传输线温度150.0℃。GC循环时间14min，样品瓶恒温时间30min。7.3.2气相色谱参考条件a）色谱柱：石英毛细管柱（10%二甲基聚硅氧烷）：（30m×0.32mm×0.50um）或等效柱。b）柱温升温程序：初温80℃保持1min，40℃/min升温至100℃保持2min，40℃/min升温至200℃保持4min，共10min。c）进样口：色谱柱流量2.0mL/min，分流比20∶1。d）检测器温度：300℃。e）载气：高纯氮气，尾吹气流量30mL/min。f）氢气：40mL/min；空气：200mL/min。7.4标准工作曲线绘制向10个顶空瓶中分别加入0.00mL、0.30mL、0.40mL、1.00mL、2.00mL标准使用液B和0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL标准使用液A（相当于0、0.015、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.0、2.0、3.0亚硝酸钠）补齐水至5mL，加入1.0mL10mg/mL环己基氨基磺酸钠溶液，混匀，放置2min，加入1.0mL100g/L硫酸溶液，迅速压紧瓶盖，涡旋仪充分混匀（混匀过程中溶液不能接触到密封垫，如果有接触，需重新配置），上机。以亚硝酸钠与环己基氨基磺酸钠的衍生产物环己烯，作为目标物质，绘制标准曲线。亚硝酸钠标准品的气相色谱图参见附录A中的图A.1.7.5测定吸取5.00mL上述滤液于20mL顶空进样瓶中，以下按7.4自“向10个顶空瓶中分别加入0.00mL、0.30mL、0.40mL、1.00mL、2.00mL……”起操作。7.6空白试验除不称取试样外，均按照上述步骤进行。8分析结果的表述试样中亚硝酸盐的含量按式（1）计算：X=Cx100mx5式中：X———试样中亚硝酸钠含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C———测定用样液中亚硝酸钠含量，单位为微克（ug）；m———试样质量，单位为克（g）；5———测定用样液体积，单位为毫升（mL）；100———试样处理液