核酸化学-核酸的性质

4.分子杂交1.在变性的DNA溶液中加入外源DNA单链分子或RNA单链分子（与原DNA具有同源性），去掉变性条件后复性形成双螺旋结构的过程。2.这样形成的新分子称为杂交DNA分子。3.利用核酸杂交可检测特定的核苷酸片段或研究同源性等。分子杂交探针：用于杂交的异源DNA或RNA序列，其核苷酸序列是人工特定的、已知的，经放射性标记的一条链。核酸的变性、复性和杂交变性（加热）探针杂交（缓慢冷却）复性（缓慢冷却）分子杂交的种类SouthernBlot：DNA-DNA杂交NorthernBlot：DNA-RNA杂交WesternBlot：抗原-抗体进行杂交原位杂交：活体组织上进行杂交，显出荧光DNA芯片技术DNA分子限制片段限制性酶切割琼脂糖电泳转移至硝酸纤维素膜上与放射性标记DNA探针杂交放射自显影带有DNA片段的凝胶凝胶滤膜用缓冲液转移DNA吸附有DNA片段的膜DNA芯片技术简介

DNA芯片(DNAchip)技术是采用寡核苷酸原位合成或显微打印手段，将数以万计的DNA探针片段有序地固化于支持物表面上，产生二维DNA探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品的快速、并行、高效地检测或诊断。由于常用硅芯片作为固相支持物，且在制备过程中运用了计算机芯片的制备技术，所以称为DNA芯片技术。沉降特性蔗糖密度梯度超速离心是制备RNA的常用方法之一，利用物质在不同梯度溶液中的沉降速度差别进行分离，属于区带超速离心法。氯化铯密度梯度离心是分别DNA常用的方法，它在离心场中可自行调节形成浓度梯度，并能保持稳定。此法称为等密度梯度离心。沉降系数（S）

生物大分子在单位离心力场作用下的沉降速度称为沉降系数。即沉降系数是微颗粒在离心力场的作用下，从静止状态到达极限速度所需要的时间。其单位用Svedberg，即s表示，s=1×10-13秒。

沉降系数（S）与分子量（M）的关系M=RTsD(1-

)Svederg方程:第六节核酸的性质及提取一、一般物理性质二、核酸的水解三、两性解离四、紫外吸收性质五、稳定性六、变性七、复性与杂交八、沉降特性及沉降系数九、核酸的提取一、一般物理性质1.DNA白色纤维状固体，RNA白色粉末状固体，都微溶于水，不溶于乙醇，因此常用乙醇来沉淀DNA；DNA溶液黏度大于RNA。2.DNA难溶于0.14mol/L的NaCl溶液，可溶于1—2mol/L的NaCl溶液，RNA则相反，可据此分离二者。3.加热条件下，

D－核糖＋浓盐酸＋苔黑酚绿色670nm

D－2－脱氧核糖＋酸＋二苯胺蓝紫色595nm二、核酸的水解核酸分子中的磷酸二酯键可在酸或碱性条件下水解切断。DNA和RNA对酸或碱的耐受程度有很大差别。室温条件下，DNA在碱中变性，但不水解，RNA水解。在细胞内核酸分子受DNA酶作用。三、两性解离核酸含酸性的磷酸基团，又含弱碱性的碱基，为两性电解质，可发生两性解离；核酸相当于多元酸，pH大于4时，呈阴离子状态；等电点五、DNA的稳定性1.DNA的溶液呈粘稠状，但实际上DNA的双螺旋结构僵直而有刚性，易断成碎片，这也是