009菌落总数检查作业指导书

陕西威水饮品质量治理文件题 目 菌落总数测定作业指导书

编 码WI-ZL-009

51制定制定日期颁发部门分发单位

质量治理部

审 核 批 准审核日期 批准日期颁发数量 3份 生效日期质量治理部、综合治理部、生产供给部目的：规定了菌落总数检测方法。适用范围：适用于固体、液体类样品菌落总数的检测。GB4789.2-2023术语和定义：菌落总数〔如培育基、培育温度和培育时间等〕培育后，g〔mL〕检样中形成的微生物菌落总数。设备和材料：除微生物试验室常规灭菌及培育设备外，其他设备和材料如下：5.1恒温培育箱：36℃±1℃，30℃±1℃5.22℃～5℃5.3恒温水浴箱：46℃±1℃天平：感量为0.1g均质器振荡器无菌吸管：1mL〔0.01mL、10mL〔0.1mL〕或微量移液器及吸头250mL、500mL3.990mmpHpHpH试纸放大镜或/和菌落计数器A中A.1A中A.2A中A.3菌落总数测定作业指导书题目编码：WI-ZL-0095菌落总数测定作业指导书题目编码：WI-ZL-00952检验程序：菌落总数的检验程序见图1。检样25g检样25g〔mL〕样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释2个～3个连续稀释度的样品匀液，1mL分别参加无菌培育皿内15mL～20mL平板计数琼脂培育基，混匀培育计数各平板菌落数计算菌落总数报告1菌落总数的检验程序操作步骤：样品的稀释225mL1min～2min，225mL1min～2min，1:1025mL225mL的无菌锥形瓶〔瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠〕中，充分混匀，制成1:10液。1mL1:101mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中〔留意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面11:1006.1.3操作程序，制备1011mL2～3〔可包括原液101mL1mL空白稀释液参加两个无菌平皿内作空白比照。〔46℃±1℃恒温水浴箱中保温〕倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。培育待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃48h±2h30℃±1℃培育72h±3h。外表掩盖一薄层琼脂培育基〔4mL8.2.1条件进展培育。菌落计数落计数以菌落形成单位〔colony-formingunits，CFU〕表示。30CFU～300CFU30CFU300CFU菌落数应承受两个平板的平均数。平板作为该稀释度的菌落数；假设片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又2，代表一个平板菌落数。数。结果与报告：菌落总数的计算方法g(mL)样品中菌落总数结果。假设有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式〔1〕计算：CN(n0.1n)d1 2

……………〔1〕式中：N——样品中菌落数； C——平板〔含适宜范围菌落数的平板〕菌落数之和；n——第一稀释度〔低稀释倍数〕平板个数；1n——其次稀释度〔高稀释倍数〕平板个数；2〔第一稀释度。例如：稀释度C

1:100〔第一稀释度〕1:1000〔其次稀释度〕232，244 33,35N(n0.1n)d1 22322443335[2(0.12)]102

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247279.2.2250002.5×104300CF其他平板可记录为多不行计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。稀释倍数计算。假设全部稀释度〔包括液体样品原液〕1稀释倍数计算。假设全部稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。菌落总数的报告菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。32位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，承受两位有效数字。假设全部平板上为集中菌落而无法计数，则报告菌落集中。假设空白比照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。A培育基和试剂平板计数琼脂〔platecountagar，PCA〕培育基成分胰蛋白胨 5.0g酵母浸膏 2.5g葡萄糖 1.0g琼脂 15.0g蒸馏水 1000mLpH7.0±0.2制法pH。分装试管或锥形瓶，12115min。磷酸盐缓冲液成分磷酸二氢钾〔KHPO〕 34.0g2 4蒸馏水 500mLpH7.2制法34.0g500mL175mL1mol/L氢氧化钠溶液调整pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。1