白外用对大鼠和豚鼠疮疡模型的影响

白外用对大鼠和豚鼠疮疡模型的影响

白肉是蔷薇科植物的干燥部位。它的味道又辛又苦，性质也很冷。根据2010年版《中华人民共和国药典》，它具有清热解毒、消肿胀、固定伤口和生长肌肉的功能，主要用于伤口的寄生虫、伤口、伤口和燃烧和冷却。现代研究表明,白蔹主要含多酚、蒽醌类等化学成分;白蔹主要活性为抗菌,并有抑制黑色素形成等作用;此外还有治疗癌性发热、支气管扩张咯血、手足皲裂、骨折等作用。本文观察白蔹外用对大鼠和豚鼠疮疡模型的影响。材料表面1.白水教育SPF级Wistar大鼠100只,体质量180-200g,雌雄各半,由河南省实验动物中心提供,合格证号:0003677;普通级豚鼠100只,体质量200-230g,雌雄各半,由河南省康达实验动物有限公司提供,合格证号:0121163。白蔹,购自安徽省亳州市药材交易公司,经鉴定为葡萄科植物白蔹Ampelopsisjaponica(Thunb.)Makino。除去杂质,洗净,润透,切厚片,晒干;白蔹水煎剂的制备方法:白蔹药材600g加入10倍量的蒸馏水浸泡30min后煎煮,沸腾后改用文火煎煮60min,滤出煎液,再加入8倍量的蒸馏水沸后文火煎煮60min,合并2次滤液,70℃水浴浓缩至浓度为1.5g生药/mL,作为白蔹水煎液大剂量组,用0.9%氯化钠溶液稀释成1.0g生药/mL、0.5g生药/mL,作为中、小剂量组。白蔹油糊制备方法:白蔹药材打粉,过100目筛,麻油调糊,大剂量含药量为0.2g/mL,小剂量为0.1g/mL;麻油淀粉调糊,含淀粉量为0.2g/mL。京万红烫伤膏,天津达仁堂京万红药业有限公司,批号:211646。水合氯醛,天津市科密欧化学试剂开发中心,批号:20071018。一滴香,郑州市春芝调味品有限公司,批号:20090426A。呋喃西林,苏州第五制药厂有限公司,批号:20090406。金黄色葡萄球菌(CMCC260035亿/mL),河南中医学院微生物实验室提供;溶菌酶(LZM)测试盒,南京建成生物工程研究所,批号:20100114;氯化钠注射液,郑州永和制药有限公司,批号:09073105;甲醛,烟台市双双化工有限公司,批号:20090326。WFZUV2000型紫外可见分光光度计,尤尼卡(上海)仪器有限公司生产;微量移液器,上海求精生化试剂仪器有限公司。方法1.大鼠单次给药和大鼠的前药关键因素ames大鼠100只,取10只作为空白组,其余大鼠造疮疡模型:均在右侧背部脱毛,2d后腹腔注射10%水合氯醛(0.3g/kg)麻醉大鼠,用刀片在脱毛部位划一十字切口(1cm×1cm),深达皮下,每个伤口内注入5亿个金黄色葡萄球菌,1次/d,连续3d,至伤口周围出现红、肿、触痛,可见脓性分泌物为止。取疮疡模型成功的80只大鼠,随机分为8组,雌雄各半,每组10只:白蔹水煎液大、中、小剂量组(1.5、1.0、0.5g生药/mL,用消毒药棉吸附相应药液1.2mL后,敷在疮疡局部),白蔹油糊大、小剂量组(0.2、0.1g/mL,厚度2mm,相当于2.4、1.2g/只),京万红组(涂京万红烫伤药膏,厚度2mm,相当于1g/只),麻油淀粉糊组(淀粉0.2g/mL,厚度2mm,相当于2.4g/只),模型组和空白组用消毒药棉吸附0.9%氯化钠溶液1.2mL,敷在疮疡局部;以上各组给药后均以纱布、保鲜膜覆盖胶布固定,每天保持药物与疮疡部位接触时间6h,6h后以0.9%氯化钠溶液清洗用药局部,连续给药12d。每次给药后单笼单只饲养,以避免大鼠相互舔食药物或啃噬伤口。记录从用药起12d内,伤口每天的愈合情况。第12天给药后1h,大鼠眼眶后静脉丛取血,3000r/min离心10min,分离血清,按试剂盒测定血清中溶菌酶的含量。剪取疮疡部位皮肤,固定于10%甲醛溶液中,石蜡包埋切片,HE染色,显微镜下观察比较各组大鼠疮疡皮肤的愈合程度。2.单次给药和大鼠的前药及其他指标豚鼠100只,取10只豚鼠作为空白组,其余豚鼠造疮疡模型:均右侧背部脱毛,2d后腹腔注射10%水合氯醛(0.25g/kg)麻醉豚鼠,用刀片在脱毛部位划一十字切口(1cm×1cm),深达皮下,每个伤口内注入5亿个金黄色葡萄球菌,1次/d,连续3d,至伤口周围出现红、肿、触痛,可见脓性分泌物为止。取造疮疡模型成功的80只豚鼠,随机均分为8组,雌雄各半,每组10只:白蔹水煎液大、中、小剂量组(1.5、1.0、0.5g生药/mL,用消毒药棉吸附相应药液1.2mL后,敷在疮疡局部),白蔹油糊大、小剂量组(0.2、0.1g/mL,厚度2mm,相当于2.4g、1.2g/只),京万红组(涂京万红烫伤药膏,厚度2mm,相当于1g/只),麻油淀粉糊组(淀粉0.2g/mL,厚度2mm,相当于2.4g/只),模型组和空白组用消毒药棉吸附0.9%氯化钠溶液1.2mL,敷在疮疡局部;以上各组给药后均以纱布、保鲜膜覆盖胶布固定,每天保持药物与疮疡部位接触时间6h,6h后以0.9%氯化钠溶液清洗用药局部,连续给药12d。每次给药后单笼单只饲养,以避免豚鼠相互舔食药物或啃噬伤口。记录从用药起12d内,伤口每天的愈合情况。第12天给药后1h,豚鼠心脏取血,3000r/min离心10min,分离血清,按试剂盒测定血清中溶菌酶的含量。剪取疮疡部位皮肤,固定于10%甲醛溶液中,石蜡包埋切片,HE染色,显微镜下观察比较各组豚鼠疮疡皮肤的愈合程度。3.统计学处理数据分析用SPSS13.0forwindows统计软件包进行数据资料的统计学处理,计量资料用表示,等级资料采用Ridit检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果1.各模型组大鼠髓髓炎病理变化的比较见表2。经Ridit检验,与空白组比,模型组出现显著的疮疡病理损伤(P<0.01),说明造模成功;与模型组比,麻油淀粉糊组对疮疡的病理变化改善不明显;京万红组、白蔹水煎液大、中、小剂量组和白蔹油糊大、小剂量组均可显著改善疮疡的病理变化(P<0.01)。说明白蔹水煎液与油糊均可促使疮疡缺口组织修复闭合,减少炎细胞浸润,而麻油淀粉糊组与模型组病理变化基本一致,提示白蔹外用具有很好的敛疮生肌作用。3.不同白水煎液小剂量对血清中溶菌酶含量的影响见表3。豚鼠造疮疡模型后,模型局部出现明显疮疡症状;与空白组比,模型组及麻油淀粉糊组血清溶菌酶含量显著降低(P<0.01),说明造模成功;与模型组比,白蔹水煎液大、中、小剂量组和白蔹油糊大、小剂量组及京万红组均可显著提高血清中溶菌酶的含量(P<0.01)。说明白蔹水煎液与糊剂均可显著改善疮疡的感染程度,促使疮疡面积愈合恢复,提示白蔹外用有敛疮生肌的作用。4.各模型组大鼠髓炎病理变化的比较见表4。经Ridit检验,与空白组比,模型组出现显著的疮疡病理损伤,病理变化显著加重(P<0.01),说明造模成功;与模型组比,麻油淀粉糊组对疮疡的病理变化改善不明显;京万红组、白蔹水煎液中剂量组和白蔹油糊大、小剂量组均可显著改善疮疡的病理变化(P<0.01),白蔹水煎液大剂量组可明显改善疮疡的病理变化(P<0.05)。说明白蔹水煎液与油糊可促使疮疡缺口组织修复闭合,减少炎细胞浸润,而麻油组与模型组病理变化基本一致,提示白蔹外用具有很好的敛疮生肌作用。皮肤组织病理学检测疮疡是中医外科临床的常见病多发病,具有发病迅速,部分病情较重等特点,在面部可引起疔疮走黄(西医成为败血症或脓毒败血症),在手、足易引起伤筋损骨的严重后果。创伤出现感染以后,就形成了疮疡。一般“伤”在皮肤,出现感染后,伤口比较浅,感染也就比较薄,故称为“疡”。“创”在肌肉深处,感染以后脓血郁积较深,同时伴有红肿热痛,故称为“疮”。目前常通过动物人工创伤并用金黄色葡萄球菌感染的方法来造疮疡模型,疮伤感染2d后,均见食量减少,俯卧少动,有触痛,伤口有脓性分泌物,伤口周围出现红、肿、热、痛现象,血清中溶菌酶含量显著降低,动物皮肤各层结构毛囊、皮脂腺消失,创疡具有较大缺口,周围有大量的炎细胞侵润,使血管壁通透性增加,产生红肿等现象。为较好判断白蔹外用对疮疡的疗效,本实验对血清中溶菌酶的含量、疮疡部位皮肤组织病理变化进行评价。溶菌酶的测定更能反映白蔹在疮疡模型治疗过程中的作用,溶菌酶是存在于人体正常体液及组织中的非特异性免疫因素,具有抗菌、抗病毒、消肿的功效,能客观反映白蔹对疮疡的治疗情况。组织病理学变化可以反映受损组织各层皮肤的炎细胞浸润程度和愈合情况,能直接反映药物的疗效。实验结果显示白蔹水煎液大、中、小剂量组和白蔹油糊大、小剂量组均可显著提高血清中溶菌酶的含量和显著改善疮疡的病理变化。在对大鼠和豚鼠疮疡模型血清溶菌酶含量的影响方面,京万红组、白蔹水煎液中剂量组和白蔹油糊大剂量组均略优于白蔹水煎液大、小剂量组和白蔹油糊小剂量组,但无统计学意义。在对大鼠和豚鼠疮疡模型组织病理学的影响方面,京万红组和白蔹油糊大剂量组相差不大,均略优于各给药组;白蔹水煎液中剂量组略优于白蔹水煎液大、小剂量组及白蔹油糊小剂量组;麻油淀粉糊组与模型组溶菌酶含量及病理变化均基本一致,提示白蔹外用具有很好的敛疮生肌作用。本实验中麻油淀粉糊组各项指标与模型组相差不大,提示对疮疡的改善主要不是麻油本身的作用;但麻油气味芳香,其香气有利于维护毛细血管的通透性,改善血液循环,有助于药物的吸收。现代临床常用麻油调糊治疗烧烫伤,增强疗效。现代研究认为,白蔹可促进T淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬功能,而在抗感染免疫中,巨噬细胞发挥着吞噬、杀菌、清除炎症产物和修复组织等重要作用,T淋巴细胞不仅可直接杀伤靶细胞,也可通过释放淋巴因子间接发挥抗感染免疫效应。这表明白蔹可增强动物的免疫功能,因此其外敷应用于治疗疮疡可能具有直接抗菌和调节机体免疫功能双重机制。有研究认为,创面愈合的本质与核心是肉芽组织中表皮细胞生长因子(EGF)的调控及其结果,创面愈合的过程是多种生长因子共同作用的结果,这在一定程度上反映了外用中药在分子水平上的促疮面愈合机制。白蔹的敛疮生肌功能可能会促进动物皮肤在创面愈合早、中期创面EGF总量增多,从而加快创面的愈合。这很可能是外用白蔹促进创面愈合的重要途径之一。本实验为白蔹外用敛疮生肌的功能提供了实验依据,有报道现代临床用白蔹和麻油调糊治疗烧伤创面、多发性毛囊炎、唇疮、疔疮疗效显著,故本实验采用白蔹麻油调糊外用治疗疮疡。2005版《中华人民共和国药典》记载白蔹外用适量,煎汤洗或研成极细粉敷患处,故本实验同时也采用白蔹水煎液外用治疗疮疡,为白蔹敛疮生肌的外用功能提供了实验依据,也为临床疮疡的治疗提供简易有效的救治方法。白蔹敛疮生肌的外用功能也为白蔹的临床外用提供了理论支撑。2.药物和试剂3.各组大鼠白水浆制备和溶菌酶含量见表1。大鼠造疮疡模型后,模