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文档简介

动物细胞融合一、 实验目的了解溶血现象及其发生机制。了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。二、 实验原理细胞膜是细胞与环境进行物质的选择通透性屏障，是一种半透膜，可选择性地控制物质进出细胞。将红细胞放在低渗溶液中，水分子大量渗透到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，溶液有不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血(hemolysis)。由于溶质渗透入细胞的速度不同，溶血时间不同，因此，发生溶血现象所需的时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。本实验选用红细胞作为细胞膜渗透性德实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。有时在某些等渗溶液中，由于细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的通透性发生改变，发生溶血。溶血后，膜发生皱缩，体积变为1/3。TritonX-100抽提膜蛋白，改变细胞膜活性。P=KD/t三、 实验材料材料：鸡血试剂：0.85%氯化钠溶液，0.0085%氯化钠溶液，0.8mol/L甲醇，0.8mol/L丙三醇，6%葡萄糖溶液，2%TritonX-100器材：小试管9只，试管架，胶头滴管，显微镜，载玻片，盖玻片，离心机四、 实验步骤取鸡血6ml，加0.85%氯化钠溶液4ml，在1000r/min条件下离心5min(RBC压积量应不少于0.6ml，否则应补加鸡血)将上述离心的红细胞按沉淀量配成50%浓度，总体积应不少于1.2ml每组取6支试管分别加入如下溶液各3ml0.85%氯化钠溶液0.0085%氯化钠溶液0.8mol/L甲醇0.8mol/L丙三醇6%葡萄糖溶液2%TritonX-100向上述6试管中分别加入50%红细胞悬液1滴，用吸管吹吸均匀。观察各管是否有溶血现象发生(观察时间一小时)。记录溶血时间并于显微镜下观察各溶液中细胞。五、 实验结果显微镜下(10*40)；宏观对比(本组试剂与0.85%氯化钠溶液)(2)0.0085%氯化钠溶液(3)0.8mol/L甲醇(4)0.8mol/L丙三醇(6)2%TritonX-100编号溶液类型是否溶血溶血时间结果分析10.85%氯化钠溶液不溶血颜色暗红，浑浊，不透明，细胞部分仍存活，在运动状态20.0085%氯化钠完全溶血3s溶液变为鲜红透明，细胞完全溶血速度较快30.8mol/L甲醇完全溶血5s细胞发生溶血，体积缩小40.8mol/L丙三醇部分溶血1min细胞溶血速度较慢，细胞形状变化较小56%葡萄糖部分溶血30min细胞变化较小，基本维持正常形溶液态66%TritonX-100完全溶血20s细胞溶血，颜色鲜艳，有一定浑浊，细胞形态变化较大七、讨论与结论1、 先做溶血速度较慢的组别，再做速度较快的组别利于节约时间。2、 细胞通透性与溶血时间成反比，所以通透性由大到小为：0.0085%氯

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