第五章 连锁遗传分析(第5、6节)

第五节连锁与交换5.1基因连锁的发现

1905年,W.Bateson和R.C.Punnet研究了香豌豆两对性状的遗传。一对是花的颜色,紫花对红花为显性，一对是花粉粒形状，长形对圆形为显性。

紫长紫圆红长红圆

P_L_P_llppL_ppll观察数284212155按孟德尔理论数215717124紫长PPLL×红圆ppll紫长PpLl花色和花粉形状分离比符合3:1，表明都是由单基因控制的，但不符合两对因子的分离比9:3:3:1X2＝3371.58

紫长紫圆红长红圆

P_L_P_llppL_ppll

观察数22695971按孟德尔理论数235.878.578.526.2紫圆PPll×红长ppLL紫长PpLl结果和前次的相近，仍不符合孟德尔定律，亲本组合比理论数多，重组组合比理论数少。X2＝32.40Punnet认为似乎两对基因在杂交子代中的组合并不是随机的，而是原来属于同一亲本的两个基因更倾向于进入同一配子，此叫做相引(coupling)，原来属于不同亲本的两个基因之间在形成配子时相互排斥，称为相斥(repulsion)。当两个非等位基因a和b处在一个染色体上，而在其同源染色体上带有野生型A、B时，这些基因被称为处于相引相(couplingphase)(AB/ab)；若每个同源染色体上各有一个突变基因和一个野生型基因，则称为相斥相(repulsionphase)(Ab/aB)。!1910年,Morgan和Bridges用果蝇进行了大量的杂交实验，提出了连锁交换定律，被后人誉为遗传的第三定律。♀红长

×♂紫残

PPVVppvv红长PpVv×♂紫残

ppvv红长

紫残红残紫长PpVvppvvPpvvppVv13391195151154果蝇红眼对紫眼为显性，长翅对残翅为显性♀红残

×♂紫长

PPvvppVV红长PpVv×♂紫残

ppvv红长

紫残红残紫长PpVvppvvPpvvppVv157146965

1067

结果同Bateson等一样，都是亲本组合多于理论数，重组组合少于理论数，存在相引和相斥的现象。pvpvPPVVPpvPV配子PVpvF1两对位于同一染色体上等位基因的简单遗传摩尔根的解释却与Bateson等不同：pvPVPVpvpPvV减数分裂中染色体的交换亲代染色体减数分裂交换的染色体染色体交换他们的假设归纳起来主要有三个论点：①相引是两个基因位于同一条染色体上，相斥则反之。其实按现代的概念，相引就是顺式(cis)，相斥就是反式(trans)。②同源染色体在减数分裂时发生交换(cross-over)重组(1910年)；③1911年摩尔根又补充了一点：位置相近的因子相互连锁。连锁和交换的重组称为染色体内重组，因染色体自由组合而产生的重组称为染色体间重组。(孟德尔遗传的随机分离与相引Science,1911,34,384)

连锁交换定律：处在同一染色体的两个或两个以上的基因遗传时，联合在一起的频率大于重新组合的频率。重组类型的产生是由于配子形成过程中，同源染色体的非姐妹染色单体间发生了局部交换的结果。连锁和交换的重组称为染色体内重组(intra-chromosomalrecombination)，因染色体自由组合而产生的重组称为染色体间重组(inter-chromosomalrecombination)。*115.2基因重组与染色体交换的证实1909年Janssens提出交换型假说。5.2基因重组与染色体交换的证实1931年,McClintock和她的女博士生B.Creighton以玉米为材料进行了一项试验，为染色体交换导致遗传重组提供了第一个有力的证据。BarbaraMcclintock(1902-92)HarrietB.Creighton(1909-)9号染色体，色素基因C有色对c无色，糯Wx对非糯wx为显性cWxCwx纽结(knob)来自第8号染色体的附加片段减数分裂配子cWxcwxCwxCWx×cWxCwxcwxcwxcWxcwxCwxCWxcWxcwxcwxcwxcwxCWxCwxcwxcwx有色糯质无色非糯重组合亲组合5.3

重组率测定玉米籽粒的糊粉层颜色基因C和饱满度基因Sh是连锁的。杂交亲本为相引相时，有如下结果：有色饱满×无色凹陷

CSh/CShcsh/csh×无色凹陷

csh/csh有色饱满

有色凹陷无色饱满无色凹陷

CSh/cshCsh/cshcSh/cshcsh/csh40321491524035有色饱满

CSh/csh重组型重组率RF=301/8368×100%=3.6%5.4基因定位与染色体作图5.4.1基因直线排列原理及相关概念基因定位(genemapping)：根据重组值确定不同基因在染色体上的相对位置和排列顺序的过程。染色体图(chromosomemap)：又称基因连锁图(linkagemap)或遗传图(geneticmap)。依据基因之间的交换值(或重组值)，确定连锁基因在染色体上的相对位置而绘制的一种简单线性示意图。图距(mapdistance)：1%重组值(交换值)去掉其百分率的数值定义为一个图距单位(mapunit,mu)，后人为了纪念现代遗传学的奠基人Morgan，将图距单位称为厘摩(centimorgan,cM)，1cM=1%重组值去掉%的数值。任何3个距离较近的a,b,c连锁基因，若已分别测得a,b和b,c间的距离，那么a,c间的距离，就必然等于前二者距离的和或差。这就是摩尔根学生A.H.Sturtevant第一次提出的基因的直线排列原理。AlfredH.Sturtevant1891-1970abcab+bc=ac在果蝇X染色体上，除白眼(w)、黄体(y)基因外，还有隐性的粗脉翅(bi)基因，经测交得知bi—w的交换值为5.3%(5.3cM)，w—y的距离为1.1cM，那么bi—y的距离究竟是多少？从理论上推测，这取决于w、y、bi这三个基因在X染色体上的排列顺序，它们不外乎下列两种方式:(1)w—y—bi或(2)y—w—bi。决定哪一种是合理的排列就必须测定bi—y的交换值。测交的结果为6.4%(6.4cM)。这样经过3次两点测交(two-pointtestcross)，就可把第(2)种排列关系确定下来。5.4.2

三点测交(three-pointtestcross)与染色体作图为了进行基因定位，摩尔根和他的学生Sturtevant改进了上述两点测交，创造了三点测交方法，即将3个基因包括在同一次交配中。进行这种测交，一次实验就等于3次两点试验。

已知在果蝇中棘眼(ec)、截翅(ct)和横脉缺失(cv)这3个隐性突变基因都是X连锁的。把棘眼、截翅个体与横脉缺失个体交配,得到3个基因的杂合体ecct+/++cv(ec、ct、cv的排列不代表它们在X染色体的真实顺序)，取其中3杂合体雌蝇再与3隐性体ecctcv/Y雄蝇测交，测交后代如下表：序号表型实得数1ecct+2125亲本型2++cv22073ec+cv273单交换I型4+ct+2655ec++217单交换II型6+ctcv2237+++5双交换型8ecctcv3合计5318ecct+/++cv×ecctcv/Y测交后代数据结果分析1、归类2、确定正确的基因顺序用双交换型与亲本类型相比较，发现改变了位置的那个基因一定是处于中央的位置，因为双交换的特点是旁侧基因的相对位置不变，仅中间的基因发生变动。于是可以断定这3个基因正确排列顺序是eccvct。亲本型ecct+++cv双交换型+++ecctcv3、计算重组值，确定图距(1)、计算ct—cv的重组值忽视表中第一列(ec/+)的存在，将它们放在括弧中，比较第二、三列：(ec)ct+2125非重组(+)+cv2207(ec)+cv273非重组(+)ct+265(ec)++217重组(+)ctcv223(+)++5重组(ec)ctcv3ct—cv间重组率=(217+223+5+3)/5318=0.084=8.4%=8.4cM3、计算重组值，确定图距(2)、计算ec—cv的重组值忽视表中第二列(ct/+)的存在，将它们放在括弧中，比较第一、三列：ec(ct)+2125非重组+(+)cv2207ec(+)cv273重组+(ct)+265ec(+)+217非重组+(ct)cv223+(+)+5重组ec(ct)cv3ec—cv间重组率=(273+265+5+3)/5318=10.2%=10.2cM3、计算重组值，确定图距(3)、计算ec—ct的重组值忽视表中第三列(+/cv)的存在，将它们放在括弧中，比较第一、二列：ecct(+)2125非重组++(cv)2207ec+(cv)273重组+ct(+)265ec+(+)217重组+ct(cv)223++(+)5非重组ecct(cv)3ec—ct间重组率=(273+265+217+223)/5318=18.4%=18.4cM4、资料整理表型实得数比例重组发生在ec—cvcv—ctec—ctec+ct212581.5%+cv+2207eccv+27310.1%√√++ct265ec++2178.3%√√+cvct223+++50.1%√√eccvct3总计5318110.2%8.4%18.4%5、绘染色体图eccvct10.28.418.4≠18.6在计算ec—cv和cv—ct的重组值时都利用了双交换值，可是计算ec—ct时没把它计在内，因为它们间双交换的结果并不出现重组。所以ec—ct之间的实际双交换值应当是重组值加2倍双交换值。即18.4%+2×0.1%=18.6%。当三点测交后代出现8种表型时,表明有双交换发生,此时需用2倍双交换值来作校正。若3个基因相距较近，往往不出现双交换类型,后代只有6种表型,无需校正。亲本的基因型为：ec+ctec+ct+cv+×ec+ct+cv+×eccvct0.01.030.733.757.6ywvmrSturtevant在1913年绘制的第一张基因连锁图(果蝇X染色体)(括号内为现在较为精确的数据)y:黄体w:白眼v:辰砂眼m:小翅

r:斜截翅(1.5)(33.0)(36.1)(54.5)染色体作图每个基因的位置是用从一组连锁基因的一端算起的图距来表示。一般以最左端的基因位置为0，其他基因的位置通过它与最邻近的基因间的重组率之和来确定。随着研究的进展，发现有新的基因在更左端时，就把0点的位置让位给新的基因，其余的基因座作相应的移动。重组率在0~50%之间，但在遗传图上，可以出现50个单位以上的图距。因此要从图上数值得知基因间的重组率只限于邻近的基因座间。5.4.3并发(coincidence)和干涉(interference)每发生一次单交换都会影响它邻近发生另一次单交换，这种现象称作干涉(interference，I)或染色体干涉。第一次交换发生后，引起邻近发生第二次交换机会降低的情况称为正干涉(positiveinterference)，引起增加的称为负干涉(negativeinterference)。观察到的双交换率与预期的双交换率的比值称做并发系数(coefficientofcoincidence，C)。一般用并发系数来表示干涉作用的大小。I=1－CC=1，I=0，无干涉存在；C=0，I=1时，完全干涉；

0<C<1，存在正干涉；C>1，I<0，存在干涉。上例中，双交换的预期频率是10.2%×8.4%=0.86%，但观察到的实际双交换值为(5+3)/5318=0.15%，并发系数C=0.15%/0.86%=0.17。I=1－C=0.83。染色单体干涉(chromotidinterference)：是指两条同源染色体的4条染色单体参与多线交换机会的非随机性。如果有染色单体干涉的存在，可以使二线双交换、三线双交换和四线双交换发生的概率不呈1：2：1的比例。正的染色单体干涉提高四线双交换的频率，负的染色单体干涉则可提高二线双交换的频率。12342-3二线双交换1-4四线双交换1-3,2-4三线