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高压蒸汽杀菌锅使用的注意事项

高压蒸汽灭菌炉是微生物实验中不可或缺的设备。在没有细菌细菌过程的情况下,很难进行微生物实验。我校微生物学实验室目前使用的灭菌器为下排气式蒸汽灭菌锅和脉动真空压力蒸汽灭菌器两种,在操作过程中常常遇到灭菌失败的情况,其原因主要是冷空气没有充分地从高压蒸汽灭菌器内排出,以致影响热能的穿透,降低蒸汽的分压,使之不能升到应有的温度,因而要掌握灭菌锅的正确使用,不仅要了解灭菌锅的构造,而且使用经验也非常重要。笔者多年从事微生物学实验准备工作并经常使用高压锅,本文对高压蒸汽灭菌锅使用过程中的注意事项以及影响因素作一归纳总结,并针对具体情况具体分析,提出自己的对策和见解,为使用高压锅的同行提供参考,提高实验教学质量。1.注意使用氮肥注释(1)在使用反渗透膜时,将待灭菌物品放入锅内之前,一定先检查锅内水位,观察控制面板上的工作灯和水位灯的显示情况,显示低水位应先向锅内加水,当高水位灯亮时应停止加水,当水位过多应开启下排水阀放去内胆中的多余水量。另外,使用高压锅时特别应注意的是锅盖的旋开,如果锅盖旋不到一定高度,当旋紧锅盖时很容易将橡胶封闭圈摩擦变形,时间久了封闭圈就会断裂、漏气,高压锅暂时就没法使用,影响实验进行。高压锅封闭圈一般都是专用的,不仅价格贵而且还要向生产厂家订购,需要很长时间,影响实验的准备。因此,为避免这种情况发生,必须将锅盖旋至一定高度,减少对封闭圈的摩擦,延长其使用寿命。(2)做好层物品的投放和网装为了达到灭菌的目的,锅内待灭菌物品应不要太紧太满,以利于蒸汽流通。体积过大蒸汽就不易穿透物品。最下层物品摆放尽量稀疏,因下层蒸汽量相对少,分压不够,往往造成灭菌不完全。因此摆放时注意上下交错叠放,使留有较多空隙,利于蒸汽穿透。如需要对较小物品灭菌时,应事先装在容器中,所选容器也应尽量小且浅,且有通气孔,若用过大、过深及不带孔的容器,蒸汽不易穿透。同时灭菌物品应尽量垂直放,不要平放,切勿挤压。(3)输送、运输速度过快灭菌锅内装入物品的总量不能超过总容量的85%,否则不能达到灭菌的目的,物品和物品之间应留有一定空隙,还要适当调控好蒸汽进入锅内的速度,若往锅内过快输送蒸汽,极易形成湍流,致使冷空气难于排出,如输送的速度过快时,虽然锅内很快就达到所需的温度,但是蒸汽穿透灭菌物品需要一定的时间,这样灭菌时间就相对减少,从而影响了灭菌效果,故往锅内送气时,进气阀门不能完全开大,必须逐渐开大,使之缓缓进气。但进气速度也不能太慢,太慢锅内冷空气会长时间排不出去,空气的温度也随之增高,使之更难排出。因为容器内的空气要依靠蒸汽的挤压而排除,所以送气速度适宜,有利于热能对物品的穿透和冷空气的排除。(4)冷凝器排尽压力蒸汽灭菌锅内蒸汽的温度不仅与压力有关,而且与蒸汽的饱和度有关。灭菌锅内冷空气未排尽时,即使蒸汽压力达到要求,温度也上不到相应的高度,而且还影响高压蒸汽穿透被灭菌物品的能力。故首先要打开进气阀门,引导外源蒸汽进入夹层,冷空气与冷凝水由夹层的阻气器排出,大约需要10min后,再打开进气阀,蒸汽即进入锅内,如此充分的时间即可排除冷空气。冷空气的排出是灭菌效果可靠的保障,排气时间不能超过25min。如何判断冷空气是否排尽,可观察排气口的气体,若排气口气体呈白色雾状;或在排气口出口处连接一橡皮管,将另一端插入冷水盆中,若管内排出气体在冷水中产生气泡,表示锅内空气尚未排尽,需要继续排气。若不产生气泡,表示锅内空气已基本排尽。当压力表显示锅内达到所需温度时,应尽量关小排气阀以防蒸汽损失,造成锅内缺水,但注意关闭不能太紧,应稍有气体排出,保持温度压力相匹配。2.灭菌锅的清洗和时间(1)水水温极大地影响灭菌锅真空系统的性能,水温过高可能会导致预定的真空水平改变,因此水温应尽量低。灭菌锅使用的水应符合应用水质量,并且温度不超过15℃。水的硬度值在0.7~2.0mmol/L之间,超出该范围的硬度值可能会引起水垢和腐蚀等问题,从而缩短灭菌锅的使用寿命。因此,使用的水需经过过滤和处理,并且应保持锅体清洁。(2)蒸汽的干燥程度灭菌锅应使用干燥程度不小于0.9的饱和蒸汽,即蒸汽含水量不超过10%;金属负载状态下,干燥程度不小于0.95,以保持温度与压力符合线性关系。(3)灭菌时间灭菌时间是指灭菌过程中灭菌室内达到规定温度后灭菌所需时间。它包括:热穿透时间、热死亡时间、安全时间。使用真空压力蒸汽灭菌锅,由于灭菌锅内负压较大,热穿透时间仅为1min。操作中,应注意观察蒸汽的进汽速度和压力,一般保持压力和温度同步上升。3.薄膜中间破裂在实际工作中常常需要对液体进行灭菌,高压灭菌锅说明书中,也表明能够对瓶状的液体进行灭菌处理,但在实验中却遇到了意外的情况:用敞口的玻璃瓶灭菌,其结果是玻璃瓶中的液体减少了1/3;用塑料薄膜紧紧封住瓶口,其结果封口塑料薄膜中间破裂,玻璃瓶中的液体仍然减少了1/3。造成此现象的原因是在较长的加热和保压过程中,灭菌锅和瓶作为一个系统,处于相对平衡状态,当蒸汽灭菌锅的压力达到0.165MPa,瓶内液体的压力也为0.165MPa,当限压阀开启后,灭菌锅的压力在短时间降到0.14MPa,但玻璃瓶中液体压力仍为0.165MPa,与玻璃瓶外的压力差为ΔP=0.165MPa-0.14MPa=0.025Mpa,即液体内部的压力大于液体表面的压力,符合液体沸腾的条件,从而发生沸腾现象,液体溢出。当ΔP大到一定数量值时,容器中的液体产生喷射现象。在对液态物质进行灭菌时,当灭菌结束注意卸压不能过快,尽量将排气阀关小,保持自然降压,保持系统原有的平衡,以防产生液体减少或喷溅现象。4.高压蒸汽灭菌高压灭菌锅属于强检仪器,必须进行灭菌效果的验证。高压灭菌锅使物品灭菌后达到无菌要求,这是微生物实验成功的一个基本保证。将嗜热芽孢杆菌纸片用无菌镊子放入封闭试管中,化学指示卡和留点温度计放入敞口的试管中,以上两种试管各准备5~10支,分别放置在高压灭菌锅蒸汽口处、底部排气口处及底部出水口处或上下左右中间5处。留点温度计标化合格后可用于验证试验。检测前,需将温度计的水银柱甩至40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应在1℃之间,则说明灭菌锅内的温度分布是均匀的。灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放入灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内,50~60℃培养24~48小时,观察颜色变化。如培养基变为黄色,说明菌片中的嗜热芽孢杆菌尚未完全灭活,细菌仍可在培养基中生长,分解葡萄糖产酸变为黄色。如培养基颜色不变化仍为紫色,则说明芽孢杆菌已灭活。同时要用未经灭菌的纸片放入培养基内作为阳性对照,不加纸片的空白培养基作为阴性对照。化学指示卡上的指示色块,在高压蒸汽灭菌时,由淡黄色变为黑色。随着颜色变化的深浅,并与对照色相比,可判断灭菌效果是否达到要求。化学指示卡应在干燥处保存。遇潮会变色,影响灭菌效果的观测。高压蒸汽灭菌必须使蒸汽顺利进入灭菌锅内,与灭菌物品接触,并将原有的冷空气排出方可达到灭菌的效果。要进行空载热分布和满载热穿透力验证(满载时不超过总体积的2/3)。两种验证各重复三次。5个点六次试验表明温度均在121℃,化学指示卡变黑;程度与对照色一致;培养基均未改变颜色,说明高压蒸汽灭菌效果合格。5.加强操作,保证微生物实验准备工作的实效性为了提高灭菌效果、防止事故发生并延长高压锅的使

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