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文档简介

第二课时基因工程目录基因的结构基因工程概论及其基本步骤目的基因的获取重组载体的构建导入受体细胞表达与检测基因工程的应用1.基因的结构1.原核基因的结构编码区非编码区非编码区启动子区终止子区2.基因工程概论及其基本步骤2.基因工程概论及其操作步骤主要目的：使得目的基因表达，最终获得目的蛋白或者是优良的新性状2.基因工程概论及其操作步骤基本操作步骤：1.获取目的基因2.构建表达重组载体3.导入受体细胞4.表达与检测3.目的基因的获取3.目的基因的获取从基因文库中分离目的基因1.基因组文库（鸟枪法构建）2.cDNA文库（逆转录法构建）其中涉及到基因在细胞中的选择性表达，所以cDNA文库不是一个完整的文库3.目的基因的获取人工合成（化学合成）条件：1.序列已知

2.序列短4.重组载体的构建4.重组载体的构建限制性内切酶获取相同粘性末端DNA链接酶链接目的基因和载体4.重组表达载体的构建限制性内切酶来源：原核细胞特点：特异性的识别专一序列，并得到唯一的粘性末端（少数是平末端）GAATTCGCTTAAAATTCGCTTAAG

要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？两个切口，四个黏性末端。例题限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。4.重组表达载体的构建在核酸中涉及到的酶总结：DNA解旋酶解开双链DNA，破坏氢键DNA聚合酶催化DNA磷酸二酯键形成RNA聚合酶催化RNA磷酸二酯键形成DNA链接酶催化两个DNA片段之间的磷酸二酯键限制性内切酶切断DNA链上磷酸二酯键4.重组载体的构建载体的特点：1.能够稳定存在并且可以自主复制2.具有多个限制性酶切位点3.具有标记基因4.重组载体的构建5.导入受体细胞5.导入受体细胞微生物细胞易于培养和繁殖快是首选的受体细胞方法：Ca2+转化法原理：制成感受态细胞，使得重组载体进入细胞5.导入受体细胞动物细胞主要目的在于获得转基因动物方法：显微注射5.导入受体细胞植物细胞基因枪法花粉管通道法农杆菌转化发5.导入受体细胞农杆菌转化法例题6.表达与检测6.表达与检测重组子的筛选6.表达与检测检测是否是目的基因存在DNA探针DNA分子杂交技术原理：碱基互补配对6.表达与检测6.表达与检测检测是否转录：RNA

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