复方莪术油抗菌作用的初步研究 中药学专业

复方莪术油抗菌作用的初步研究目录摘要 Ⅰ-Ⅱ1前言 前言莪术为姜科植物蓬莪术（CurcumaphaeocaulisVal.）、广西莪术(CurcumakwangsiensisS.G.LeeetC.F.Liang)或温莪术(CurcumawenyujinY.H.ChenetC.Ling)的干燥根茎，味辛、苦，性温，归肝、脾经，具有行气破血，消积止痛的功效[1]。近几年的研究表明，莪术的主要成分为莪术油、姜黄素及多糖类成分[2]。随着对莪术油研究的不断发展,发现其中的主要成分为莪术烯、新莪术二酮、异莪术醇、原莪术醇、去氧莪术酮、呋喃二莪术酮、蒎烯、樟烯、樟脑、异龙脑、龙脑、桉油精、吉马酮、异呋吉马酮等。其中莪术油中的莪术醇和莪术二酮为抗癌有效成分，在《中国药典》2005版一部把吉马酮作为莪术油定量的指标性成分。莪术二酮和吉马酮是莪术油中含量较高的主要有效成分，其具有良好的抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗血栓和镇痛抗炎的作用，常作为莪术药材及莪术油质量控制的指标性成分。另外,莪术油中还含有对甲氧基桂皮酸乙酯,该成分具有抗菌作用。因此莪术油不仅具有治疗肺癌、肝癌、乳腺癌等多种癌症的功效，还具有消炎抗炎、止痛、抗血栓、抗肿瘤、抗菌、抗病毒和抗氧化延缓衰老等功效[3-4]。有关文献表明[5]，蓬莪术、广西莪术、温莪术三个品种的挥发油含量及化学成分大致相同，但不同产地的莪术，成分也有一定的差异，在李瑶[6]的研究中表明，蓬莪术中所提取的挥发油中不含有莪术二酮，温莪术中莪术二酮的含量却最高，而广西莪术挥发油中β-榄香烯的含量相对较高，研究表明广西莪术所含的挥发油均高于其他两者，而本实验选用广西莪术作为提取莪术油的药材。复方精油利用中草药提取物作为日用品的原料，具有药效稳定，药力持久，对皮肤作用温和、刺激性小、安全性高、疗效显著等特点，符合人们生活所需且顺应性好。某些复方精油还能杀死空气中的细菌，防止瘟疫扩散[7]。有研究表明以中药植物精油为原料研发成为空气消毒剂，可以应用于医院、炉管、饭店、家庭居室以及人群密集的公共场所消毒，其效果与家庭紫外消毒法、过氧乙酸熏蒸法相当[8]。中草药挥发油目前广泛应用于医药行业，比如用于跌打损伤的白花油、红花油，用于治疗痤疮的茶树精油等。近年来学术界对莪术油的研究较多，试图多方面地开发莪术油的新剂型以最大化地发挥莪术油的药用价值，但莪术油本身是混合物，其制剂的稳定性、载药量及其毒性到目前为止都未能完全研究清楚，有待作进一步探究和完善。有研究表明大剂量莪术煎液能在短时间内使实验大鼠的体重降低，造成肝损伤加重[9]；倘若每天给予足够量大的莪术高蛋白粉末，在一周内大鼠死亡率达100%。为了安全有效地发挥药物的药用价值，减少未知副作用的影响，可以把莪术油与其他稀释剂混合制备成其他剂型或和其他精油复方配伍使用，一方面可以减少单方精油因浓度过高而对皮肤产生刺激性、减少毒副作用，另一方面通过挥发油与稀释剂、辅助剂等相互混合使制剂相辅相成、相互作用、增强疗效、增加适用性。为此，本次实验把莪术油与其他固定比例的多种精油按一定的配比复方使用，探究复方莪术油的抗菌作用。目前市场上的复方莪术油品种稀少且以进口药品居多，如：星加坡金波士万应莪术油、茂隆万应莪术油、茂隆莪术油、印尼蜂标莪术油等，价格昂贵，货源难求，难以满足国内庞大的市场需求，本实验在分析市面上常见的几类复方莪术油处方及组方药材的药理研究文献后，确定了以莪术、藿香、茶树、迷迭香、尤加利、欧薄荷、天竺葵、柠檬草8种药材的挥发油与基础油橄榄油按一定的比例和组合方式进行混合，配置成若干个不同莪术比例的复方莪术油样品，对其进行质量分析、稳定性评价和药效评价，考察不同组方对细菌活性的影响及消肿、止痒等疗效，以研发疗效好，副作用少，质量标准明确的复方莪术油应用于日常生活中。本实验研究的复方莪术油是一种能够杀菌止痒、消炎消肿、活血祛瘀、抗炎镇痛、驱风化湿的外用制剂，可用于筋骨扭伤、跌打损伤、蚊虫咬伤、感冒头痛等症状，具有用途广泛，药效显著，对皮肤作用温和、刺激性小、安全性高等特点，作为一种家居必备生活用品仍有很大的发展空间。2材料与仪器2.1材料表2-1实验材料明细表材料规格生产厂家广西莪术-广西玉林市中药材专业市场橄榄油250mL唯你油脂商铺藿香油10mL阿芙精油官方旗舰店茶树油10mL阿芙精油官方旗舰店迷迭香精油10mL重庆高岛化妆品商行精油尤加利精油10mL阿芙精油官方旗舰店柠檬草精油10mL重庆高岛化妆品商行精油欧薄荷精油10mL重庆高岛化妆品商行精油天竺葵精油10mL重庆高岛化妆品商行精油金黄色葡萄球菌-广东药科大学微生物实验室大肠埃希氏菌-广东药科大学微生物实验室曲霉菌-广东药科大学微生物实验室营养琼脂原料-杭州微生物试剂有限公司营养肉汤原料-杭州微生物试剂有限公司2.2试验仪器与设备表2-2实验仪器与设备仪器型号生产厂家紫外分光光度计UV754N上海佑科仪器仪表有限公司摇摆式高速万能粉碎机DFY-300C温岭市林大机械有限公司水浴恒温振荡器SHA-BA金坛市宏华仪器厂立式压力蒸汽灭菌器LDZX-50FAS上海申安医疗器械厂数显电热培养箱HPX-9162MBE上海博迅实业有限公司电子天平YP502N上海精密科学仪器有限公司3实验方法3.1莪术鉴别与检查3.1.1性状鉴别在挑选购买广西莪术时，观察广西莪术的性状特征、闻气、尝味并对其进行一定的描述。3.1.2定性鉴别荧光鉴别法是根据中药的某些成分在紫外光灯下能产生特定的荧光鉴别来鉴别中药的一种方法。对于鉴别人员、鉴别环境及设备均无特殊要求，操作方法简便易行。将莪术横切面置于紫外光灯（365nm）下观察其荧光颜色[10]；分别将5g莪术粉末置于水中、2mol/LNaOH、2mol/LHCL溶液中浸泡适当时间，蘸取适量的莪术水浸液、2mol/LNaOH浸液、2mol/LHCL浸液于滤纸上，在紫外光灯（254nm和365nm）下观察其荧光颜色。3.1.3吸光度检查依据《中国药典》2015年版中对莪术的检查：取本品中粉30mg，精密测定，置具塞锥形瓶中，加氯仿10mL，浸泡24h，滤过，滤液移置10mL的量瓶中，补加氯仿至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法测定在242nm波长处的吸光度值，记录数据。3.2莪术油的制备及优化3.2.1粒径的优化本实验把适量的莪术用摇摆式高速万能粉碎机研磨成粗粉，过10、20、30、40目筛，取70g粉置于1000mL圆底烧瓶中，加入3~4粒沸石，加入8倍水量，按照《中国药典》挥发油测定法甲法项下测定，（如图3-1装置所示）调节电热套到最高温度至沸腾状态后降低温度，保持微沸状态蒸馏足够时间至挥发油量不再增加，放置0.5h后读取挥发油量，同时计算提取率。将提取的莪术油收集于棕色小瓶中，加入适量无水硫酸钠除去残余水分，备用。莪术油提取率见公式(3-1)：QUOTEY=vm×100%(公式3-1)式中Y为挥发油提取率；v为挥发油体积，mL；m为样品质量，g。图3-1水蒸气蒸馏提取装置3.2.2料液比的优化将莪术粉碎过30目筛，取50g粉置于1000mL的圆底烧瓶中，分别加6、8、10、12倍水量，如上操作，调节温度保持微沸状态蒸馏足够时间至挥发油量不再增加，放置0.5h后读取挥发油量，同时计算提取率。将提取的莪术油收集于棕色小瓶中，加入适量无水硫酸钠除去残余水分，备用。3.2.3加热温度的优化本实验主要采用水蒸气蒸馏法提取莪术油，但由于水蒸气蒸馏法受热温度较高，物料与水接触时间较长，有可能使挥发油的某些成分发生化学分解，如莪术二酮会不可逆地分解为莪术内脂，降低挥发油的质量，导致提取率较低，对其药理作用产生一定的影响，故控制好电热套的加热温度对莪术挥发油的提取至关重要。将莪术粉碎过30目筛，取70g粉置于1000mL的圆底烧瓶中，加入8倍水量，分别维持电热套的加热温度为100℃、110℃、120℃、130℃如上操作，保持微沸状态蒸馏足够时间至挥发油量不再增加，放置0.5h后读取挥发油量，同时计算提取率，并观察挥发油的颜色。将提取的莪术油收集于棕色小瓶中，加入适量无水硫酸钠除去残余水分，备用。3.3复方精油抗菌实验方法3.3.1复方精油的组方成分参考市场上几种复方莪术油的配比及经文献调研初步固定部分精油的配比为藿香油（2%）茶树油（2%）欧薄荷油（2%）迷迭香油（1%）尤加利油（1%）天竺葵油（1%）柠檬草油（1%），在配置过程中，仅改变莪术油和橄榄油的含量，橄榄油作为基础油视为无关变量，随莪术油含量的改变而改变，最终使所有精油含量和为100%。当复方精油复合后，应用强力搅拌机搅拌以混合均匀，备用。表3-1所用植物精油基本情况种Species科Family属Cenus主要有效成分主要作用莪术姜科姜黄属莪术油、姜黄素及多糖类成分抗菌抗炎、抗病毒、抗肿瘤、益智和延缓衰老Curcumazedoaria(Christm.)RoscgingiberifamiliaTurmeric广藿香唇形科-黄酮类成分、广藿香醇、广藿香酮抗炎镇痛解热、抗病原微生物，保护胃肠运动[11-12]PogostemoncablinLabiatae-橄榄橄榄科橄榄属单不饱和脂肪酸对皮肤无刺激性，有利于伤口愈合创面恢复，防止皮肤粗糙[13]Canariumalbum(Lour.)RaeuschRamusoliueuirentisCanariumindicum茶树桃金娘科白千层属挥发油、三萜、鞣质、脂肪酸等抗菌、抗炎、除螨、

镇咳、抗氧化、抗肿瘤[14]Camelliasinensis(L.)O.Ktze.MyrtaceaeMelaleuca迷迭香唇形科-萜烯类、二萜酚类酚酸类和黄酮类抗氧化、抗病毒、抗菌抗炎、抗血栓[15]RosmarinusofficinalisLabiatae-尤加利桃金娘科-桉油醇、芳香烯、樟脑、茴香萜、柚油萜促进新组织构建、降低体温、抗病毒、改善偏头痛[16]EucalyptusMyrtaceae-柠檬草禾本科香茅属柠檬醛、香叶醛、橙花醛、香叶醇抗炎、止痛、杀菌、防虫以及调节消化系统、循环系统和中枢神经系统的作用[17]Cymbopogoncitratus(DC.)Stapf.

ApiaceaeLemongrassgenus欧薄荷唇形科薄荷属胡薄荷醇、薄荷脑和薄荷酮镇痛、止痒作用、抗病毒、杀菌、利胆、止咳作用[18]PeppermintLabiataeMenthaspicata天竺葵牻牛儿苗科天竺葵属香茅醇,a一旅烯,芳樟醇抗菌、驱蚊、对螨虫有驱避作用[19]PelargoniumhortorumGeraniaceaePelargoniumappendiculatum3.3.2抗菌实验准备仪器准备将培养皿、试管、移液管、枪头、滤纸片（5mm）、玻璃棒、接种环、涂布棒、镊子等用牛皮纸包裹后放置于立式压力蒸汽灭菌器中进行湿热高压灭菌（121℃，30min）后备用。培养基准备在本实验中应用的主要培养基为：营养琼脂培养基和营养肉汤培养基。营养琼脂培养基用于血琼脂基础和传代；营养肉汤培养基用于一般细菌培养、转种、复壮、增菌等。具体成分和配制方法见表3-2。表3-2培养基的分类和配制方法名称成分使用方法营养琼脂培养基蛋白胨10.0g；牛肉3.0g；粉：5.0g；氯化钠5.0g；琼脂15.0g；PH值7.3±0.1称取本品3.3克，加热搅拌溶解于100mL蒸馏水中，用牛皮纸封口，121℃高压灭菌15min，待温度降至70℃以下装置高温灭菌的培养皿和试管中，经冷却后作为固体培养基和斜面培养基用。营养肉汤培养基蛋白胨10.0g；牛肉浸粉3.0g；氯化钠5.0g；pH值7.2±0.2称取本品18.0g,加热溶解于1000mL蒸馏水中,分别装于三角瓶或试管,用牛皮纸封口，121℃高压灭菌15min后装置高温灭菌的试管中密封待用。注：配置好的培养基应用两层牛皮纸封口包好，以避免杂菌的污染。菌悬液准备金黄色葡萄球菌：为革兰氏阳性细菌，金黄色，球型，直径0.8µm左右，显微镜下排列成葡萄串状。是儿童中最常见的致病菌，是毛囊炎、烫伤样皮肤综合症、蜂窝组织炎及外科创伤感染的病因[20]。大肠埃希氏菌：为革兰氏阴性菌，短杆状且为兼性厌氧菌，直径1µm左右，周身鞭毛，能运动，无芽孢。大肠杆菌常会引起腹泻、痢疾、头痛，发烧、恶心、呕吐等症状[21-22]。曲霉菌：常见的为黄曲霉菌，其菌落生长较快，结构疏松，不同的曲霉菌有不同的形状和颜色，大多为表面灰绿色，背面无色或略呈褐色，曲霉菌常导致角膜炎和眼内炎，偶见引起巩膜炎、结膜炎及泪囊炎[23-24]。本实验所用到的细菌或真菌的菌种，已经采用平板分区划线法分离培养保存于微生物实验室中。制作菌悬液时，首先配置好营养肉汤培养基，121℃高压蒸汽灭菌30min，其余玻璃器皿等121℃干热灭菌30min。灭菌完毕，取出营养肉汤，待稍冷后，于超净工作台中，点燃酒精灯，用已经高温灭菌的接种环于酒精灯上灼烧2~3s，待冷却后，在相应细菌的培养基中挑取2~3个单个菌落放入营养肉汤中，稍振摇，瓶口在酒精灯外焰处旋转一圈，密塞，于恒温水浴振荡器中37℃振荡培养24h，即得大肠杆菌菌悬液，金黄色葡萄球菌菌悬液，曲霉菌悬液。放入冰箱中于4℃保存备用。3.3.3抑菌圈实验涂布棒、玻璃培养皿、枪头、烧杯、试管等用牛皮纸包好，高温灭菌。灭菌完毕后，于超净工作台中，点燃酒精灯（注：接种环必须经过酒精灯高温灼烧待冷却后方可接触菌液，避免温度过高使供试菌失活）。配置少量营养肉汤供稀释菌液使用，用微量移液枪吸取定量菌悬液于试管中，再加入营养肉汤将菌液稀释10倍，摇匀，吸取100µL稀释液置于营养琼脂培养基中央，并用涂布棒均匀涂布于培养基四周以确保细菌能均匀生长；然后用镊子夹取5mm的圆形滤纸片平整地贴放于培养基中，一个培养基中贴放4~5片滤纸片；再用移液枪移取若干已配置好的不同比例的复方莪术油样品或各种单方精油5µL滴加在滤纸片上，待精油被滤纸充分吸收后，将培养基倒平板移至37℃的恒温箱中培养24h后观察实验结果，并用游标卡尺测量抑菌圈的大小。抑菌圈大小与抑菌活性、敏感程度的关系如表3-3。每种单方精油以及每份不同比例的复方莪主油重复试验3次，记录数据。表3-3抑菌圈大小与抑菌活性敏感程度的关系抑菌圈直径(mm)抑菌活性敏感程度≤7.0-无菌作用7.0~9.0+低度敏感10.0~15.0++中度敏感≥15.0+++高度敏感3.4复方莪术油的质量评价3.4.1外观性状取3个批次起最佳抑菌作用的复方莪术油5mL于透明的胶管中，观察并记录其外观性状、黏度等方面，并对其进行描述。3.4.2离心实验取适量复合精油微乳液，分别置于离心管中，3000r/min下离心15min后取出，观察复合精油是否出现分层或浑浊现象。3.4.3体验反馈将复方配置好的莪术精油装于5mL的透明胶管中，邀请20个易被蚊虫叮咬的同学协助，分两组，每组10人，A组为用药组即被咬后涂抹复方莪术油，B组为空白对照组即被咬后涂抹蒸馏水，并请求他们配合在使用前用工具尺测出被蚊虫叮咬肿了的部分的直径大小以及使用复方莪术油1min、2min、3min后的直径大小，记录数据。4实验结果4.1莪术鉴别和检查结果4.1.1莪术的性状鉴别经观察本实验使用的莪术呈类圆形或卵形的厚片。外表皮灰黄色至灰棕色，有时可见环节或须根痕。切面黄绿色，偶有黄棕色，内皮层环纹明显，散在“筋脉”小点，对光观察晶莹剔透，有光泽，气微香，味微苦而辛。因此判断本实验使用的莪术为广西莪术。且经我校中药学院王长福教授鉴定为广西莪术。4.1.2莪术的定性鉴别结果莪术横切面在紫外光灯下观察显淡紫色荧光；在紫外光灯下，莪术水浸液显蓝紫色荧光，2mol/LNaOH浸出液显浅黄色荧光，2mol/LHCL浸出显深褐色荧光。4.1.3莪术紫外检查结果表4-1广西莪术的吸光度检查结果广西莪术吸光度A11.05220.94830.93540.97250.998由测定结果可知，广西莪术的吸光度均不低于0.45，符合《中国药典》对莪术吸光度的规定，判断广西莪术为合格品。4.2莪术油的制备及优化结果4.2.1粒径的优化结果表4-2粉碎度对提取率的影响水平（目）得油量（mL）提取率（%）100.761.09201.011.44301.281.83401.251.78实验结果如表4-2所示。实验表明粉碎10目提取率为1.09%，20目提取率为1.44%，30目提取率为1.83%，40目提取率为1.78%，在实验过程发现药材适当的粉碎有利于提到挥发油的提取率，但若粉碎得过细，底部越容易烧焦，且会产生较多的泡沫影响挥发油的质量。故在优化过程中莪术粉碎过筛应选择30目筛。4.2.2料液比的优化结果表4-3投料比对提取率的影响料液比得油量（mL）提取率（%）1:60.450.901:80.891.781:100.881.761:120.871.74注：1:6指1g的莪术粉加入6倍的水量，1:8、1:10、1:12亦如此。实验结果如表4-3所示，实验表明料液比为1:6时的提取率为0.90%，1:8时的提取率为1.78%，1:10时的提取率为1.76%，1:12时的提取率为1.74%，随着料液比的增加，挥发油在水中的的浓度降低，可减少药材粉末对挥发油的吸附，有利于挥发油的提取，使挥发油提取率也增加，但当比例到达1:10时，随着料液比的增加，挥发油提取率增加的幅度并不明显，故为节约资源，在优化提取的过程中我们选择加入8倍水量。4.2.3加热温度的优化结果表4-4温度对提取率的影响温度（℃）得油量（mL）提取率（%）颜色1000.901.29棕黄色1101.281.83棕黄色1201.261.80墨绿色1301.301.86黑褐色实验结果如表4-4所示，实验表明100℃提取率为1.29%，110℃提取率为1.83%，120℃提取率为1.80%，130℃提取率为1.86%；经过多次的调温提取发现：当温度调节在110℃时，所提取的莪术油为棕黄色，气味芳香，醒神通鼻；当温度调节在120℃左右时，所提取的莪术油为墨绿色，微有糊焦味，且圆底烧瓶底部有结块现象；当温度调节在130℃时，所提取的莪术油为黑色，味道刺鼻发臭，且圆底烧瓶底部糊焦，猜测此时挥发油的化学成分发生了一定的变化；而当温度低于100℃，提取率较低，耗时较长，浪费资源。由于温度对挥发油的质量影响较大，使某些成分不可逆地分解转化为其他成分，故在此实验优化提取的过程中我们优先考虑提取温度为110℃，以提取品质良好、化学成分稳定的莪术油。图4-1棕黄色(110℃)图4-2墨绿色(120℃)图4-3黑褐色(130℃)4.3抑菌试验结果单方精油对三种供试菌抑菌作用的实验结果如表4-5所示：表4-5单方精油对供试菌的抑菌圈直径大小供试菌抑菌圈直径（mm）莪术油藿香油茶树油迷迭香尤加利柠檬草欧薄荷天竺葵金葡117.9610.8310.2713.7813.9717.469.599.78金葡217.6810.4310.4815.6414.3217.539.549.82金葡317.7310.6710.4514.9814.2617.549.659.80曲霉111.7815.95--13.576.837.729.63曲霉212.8816.62--13.637.247.819.56曲霉314.9416.55--13.567.257.849.60大肠1大肠2大肠3表4-6单方精油对供试菌的抑菌圈平均直径大小供试精油抑菌圈直径（mm）莪术油金黄色葡萄球菌曲霉菌大肠埃希氏菌莪术油17.79±0.21+++13.20±2.27++-藿香油10.64±0.28++16.37±0.52+++-茶树油10.40±0.16++--迷迭香精油14.80±1.32++--尤加利精油14.18±0.51++13.59±0.05++-柠檬草精油17.51±0.06+++7.11±0.34+-欧薄荷精油9.59±0.08+7.79±0.09+-天竺葵精油9.80±0.03+9.60±0.05+-注：“-”表示为对供试菌不起抑菌作用，“+”“++”“+++”表示精油对细菌的敏感程度。实验表明：(1)所有的单方精油对金黄色葡萄球菌菌均起抑菌作用，其中莪术油和柠檬草精油显高度敏感作用，茶树油、迷迭香精油、尤加利精油显中度敏感作用，而欧薄荷精油和天竺葵精油显低度敏感作用；(2)除了茶树精油和迷迭香精油对曲霉菌不起抑菌作用外，其他精油对曲霉菌均起一定的抑菌作用；其中，莪术油和尤加利精油显中度敏感作用，柠檬草精油、欧薄荷精油、天竺葵精油显低度敏感作用，而藿香精油则显高度敏感作用；(3)所有的单方精油在大肠埃希菌培养基中都不显抑菌圈现象，初步判断所有精油对大肠埃希菌都不起抑菌作用。采用控制变量法探究莪术油含量分别为0%、2%、4%、6%、8%、10%、12%时对金黄色葡萄球菌、曲霉菌两种供试菌抑菌作用的影响。在仅改变莪术油的含量（橄榄油作为该配方中的基础油视为无关变量，其在复方精油中的占比随莪术油含量的改变而改变），在严格控制其他精油的量固定不变情况下，探究莪术油含量的高低对供试菌抑菌作用的影响，实验结果如表4-7所示：表4-7各比例对供试菌的抑菌圈直径大小莪术油含量(%)抑菌圈直径金黄色葡萄球菌曲霉菌12312308.038.127.927.397.527.437.477.517.4648.288.288.227.597.647.5768.398.428.367.797.877.9288.568.578.497.978.127.97109.769.289.378.348.298.32128.068.428.39表4-8各比例对供试菌的抑菌圈平均直径大小莪术油含量抑菌圈平均直径（mm）金黄色葡萄球菌曲霉菌0%8.02±0.14+7.44±0.10+2%8.14±0.01+7.48±0.04+4%8.26±0.05+7.60±0.05+6%8.39±0.04+7.86±0.09+8%8.54±0.06+8.06±0.14+10%9.47±0.60+8.21±0.19+12%8.23±0.26+8.32±0.16+注：其他精油的固定配比参考了市场上几种复方莪术油的成分含量以及文献研究所得。图4-1曲霉菌的抑菌结果图4-2金葡萄球菌的抑菌结果注：标记a为单方莪术精油，b莪术油含量为6%，c莪术油含量为8%,，d莪术油含量为为10%，e莪术油含量为为12%。实验表明：(1)复方精油经过不同比例的配比后对金黄色葡萄球菌和曲霉菌都显低度敏感作用，和各种单方精油对比，其敏感度均有不同程度的下降，对皮肤的刺激性减弱；(2)在保证其他精油不变的情况下改变莪术油的用量，随着莪术油的含量增加，对金黄色葡萄球菌的抑菌作用也增加，当所加的莪术量为12%时，抑菌作用反而有所下降，其抑菌效果显示和4%的用量相当；(3)随着莪术油的含量增加，对曲霉菌的抑菌作用持续增加。4.4复方莪术油的质量评价结果4.4.1外观性状描述结果为复方莪术精油外观澄清透明、微有香气、黏度舒适均匀、为淡黄色的液体。4.4.2离心实验离心结果为：离心后所得复方莪术油外观澄清透明，无分层、絮状物、沉淀、浑浊等现象，表明复方莪术油经高速离心后能保持稳定。4.4.3体验反馈表4-9上药时间对红肿部位的影响组别直径大小(mm)上药前上药1min上药2min上药3minA组0.930.950.920.870.870.900.910.830.490.570.560.521.561.431.010.821.331.41.411.290.530.470.470.430.720.730.670.530.710.640.450.341.481.431.411.032.640.672.420.672.070.511.760.49B组0.961.071.371.370.480.480.460.331.030.450.340.730.730.671.371.381.41.390.910.900.910.921.491.471.471.470.370.370.350.34使用SPSS22数据分析系统处理数据，结果如表4-10所示：表4-10成对样本检验组别成对差分tSig.(双侧)均值标准差均值的标准误差分的95%置信区间下限上限A组上药前–A组上药3min0.294000.310710.098250.071730.516272.992260.01515A组上药1min–A组上药3min0.252000.233370.073800.085060.418943.414700.00769A组上药2min–A组上药3min0.146000.116260.036760.062840.229163.971330.00325在A组中，通过对比上药前与上药后3min叮咬部位的直径大小发现P=0.02<0.05，拒绝原假设，认为使用复方莪术油前与使用后3min存在显著差异；通过对比上药后1min与上药后3min叮咬部位的直径大小发现P=0.01<0.05，拒绝原假设，认为使用复方莪术油1min后和3min后存在显著差异；同理比较上药后2min和3min叮咬部位的直径大小发现P=0.003<0.05,认为使用复方莪术油2min和3min后存在显著差异。而在B组实验中，发现P>0.05，线性相关程度较弱，没有显著的线性变化。5实验结论经实验证明，提取莪术油的最佳条件为：粒径大小过30目，料液比为1:8，加热温度在110℃。在其他精油配比一定的情况下，加入10%的莪术精油配成的复方莪术油配比为橄榄油(80%)莪术油(10%)藿香油(2%)茶树油(2%)欧薄荷油(2%)迷迭香油(1%)尤加利油(1%)天竺葵油(1%)柠檬草油(1%)所得的对金黄色葡萄球菌和曲霉菌的抑菌效果最佳，且稳定性良好。由有效量的莪术油与其他精油复合搭配使用，具有行气活血、消积止痛、活血化瘀、去腐生肌增强机体免疫的功能,且具有良好的杀菌抑菌作用。液体橙黄透明，携带、使用方便,局部无刺激性,不影响皮肤正常生理功能。实验表明，在使用复方莪术油后，对红肿部位的直径大小具有正相关作用，其对叮咬部位的直径大小的影响明显强于蒸馏水组，且数据分析表明用药后3min能有效防止红肿部位的直径大小增大，发挥明显的药效作用，具有消肿止痒的功效，并且在一定程度上能趋蚊虫叮咬，缓解红肿热痛的症状。6实验讨论6.1莪术油的制备及优化本实验研究发现，不同批次、不同季节购买的生药莪术，在同样的提取条件下提取的莪术油的颜色、气味、提取率均有些许差异，市场上部分的药材在加工过程中可能会熏硫、醋制等使药材失去其本身原始的特征、或以其他产地的药材冒充道地药材使得提取的挥发油紫色、混有难闻味道等影响挥发油的质量，故在挑选药材时严格把关，挑选优质的广西莪术。药材的粉碎粒度、浸泡时间、料液比、蒸发量与蒸发速度等都会影响挥发油的提取率，且在大量生产中，挥发油的提取率相对较低，若想大规模生产莪术油，在生产设备及环境允许的条件下，应选用超临界流体萃取(SFC)提取。在王地[24]研究中发现，正交试验提取莪术油最佳的工艺条件为：粉碎度40~80目，加水量40倍，蒸馏时间2h，与本实验的实验结果相差较大，经分析后发现，王地的研究中，其粉碎度幅较小，而加水量增幅相对较大，而本实验粉碎度幅较大，加水量增幅较小，因此得出的实验结果相差相对较大。后期可细化筛选条件，适当地改变粉碎度福和水量增幅，进一步探究最佳的提取工艺。6.2抑菌实验在黄辉锋[25]的研究中表明莪术油对大肠埃希菌也有一定的抑制作用，在经过了反复的实验发现，不仅莪术油对大肠埃希菌没有抑菌作用，而且其他精油对大肠埃希菌也没有预想的实验结果。造成上述的原因可能有二：(1)所接种的大肠埃希菌活性失活，在培养基中根本没有存活的细菌，莪术油乃至其他精油对大肠埃希菌有抑菌作用也无法体现出来；(2)在王影[22]的研究中发现大肠埃希菌极易产生耐药性，可通过重复用药或者基因突变、基因转移产生。但本实验在做了大肠杆菌的产气实验的背景下断定：供试菌仍能产气，并没有失活，故推断此菌种可能经过多代繁衍复制后发生基因突变、产生耐药性，使莪术油等其他精油对其的抑菌作用可能消失。参考文献国家药典委员会.中华人民共和国药典(2015年版一部)[M].北京：中国医药科技出版社,2015:274-275.朱凯.中药广西莪术的化学成分研究[D].沈阳药科大学,2008.展晓日,曾昭武,孟凡莉,等.莪术油药学研究进展[J].杭州师范大学学报(自然科学版),2011,10(05):454-458.王德立.中药莪术研究进展[J].安徽农业科学,2014,42(11):3240-3258.王琰,王慕邹.中药莪术的质量研究[C]全国药物分析优秀论文交流会.1999.李瑶,吴建华,谢艳华.莪术油的研究进展[J].陕西中医药大学学报,2017,40(03):118-121.ShinobuGocho,J.Antibact,AntifungAgents.1988,19(7):329-34.StammatiA,BonsiP,ZuccoF,etal.Toxicityofselectedplantvolatilesinmicrobialandmammalianshort-termassays[J].Food&ChemicalToxicology,1999,37(8):813-823.陈斌,孙克伟,刘明德,等.莪术对免疫性肝纤维化大鼠肝细胞膜功能的影响[J].湖南中医药大学学报,2003,23(1):7-8.刘葆琴,刘雅伶.百种中药不同溶媒浸出液的荧光鉴别[J].医教研究,1991(1):26-28.曾庆钱,蔡岳文,严振,等.广藿香精油的杀虫作用及其活性成分分析[J].植物资源与环境学报,2006,15(3):21-25.成珍.初榨橄榄油中酚醛抗菌、抗氧化和抗炎的研究进展[J].食品科技,2014(2):182-185.吴鹏昌,张伟.茶树油的研究进展[J].中国药业,2009,18(3):61-63.谢阳姣,时显芸,何志鹏.迷迭香研究进展[J].安徽农业科学,2010,38(6):2951-2952.陈彦桦.蓝胶尤加利精油与茉莉花精油对五专女生登阶运动后心率恢复之影响[J].实证自然医学,2013,1(1):5-14.佟棽棽.迷迭香和柠檬草的挥发性成分及其抗抑郁、抑菌作用的研究[D].上海交通大学,2009.刘颖.薄荷有效物质基础研究[D].北京中医药大学,2005.孙伟.香叶天竺葵精油的植物生物学及其药理研究[D].华东师范大学,2005.李毅.金黄色葡萄球菌及其肠毒素研究进展[J].中国卫生检验杂志,2004,14(4):392-395.卫昱君,王紫婷,徐瑗聪,等.致病性大肠杆菌现状分析及检测技术研究进展[J].生物技术通报,2016,32(11):80-92.王影,李欣南,韩镌竹,等.大肠杆菌耐药性产生与传播机制研究现状[J].现代畜牧兽医,2016(1):32-37.孔华忠.介绍几种曲霉菌[J].植物杂志,1986(4):1-4+40-41.曾秋琼,王逢源,张征,等.曲霉病诊疗进展[J].皮肤科学通报,2017(5):594-603.王地,关怀,于萍,等.莪术细粉提取挥发油的工艺研究[J].时珍国医国药,2007,18(6):1437-1438.黄辉锋,郑彩娟,陈光英,等.莪术油与药渣残油的化学成分和抗菌活性比较[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(20):67-71.

综述植物精油的研究进展中药挥发油又称为精油，是一类在常温下能挥发的、可随水蒸气蒸馏的、与水不相混的油状液体的总称，广泛存在于植物药的各个部位。近年人们对挥发油的药理活性进行了更多的研究，发现挥发油具有抗过敏活性、酶抑制活性、抗炎活性、抗突变和抗癌活、，抗微生物活性、抗病毒活性、驱虫活性、抗氧化活性及镇静中枢神经等诸多药理活性和用途[1]。如篙子油、丁香烯、梓檬草油对GST具有抑制作用;也有学者发现挥发油具有抗肿瘤、抗病毒、杀虫抗菌、降压、消炎、平喘、止咳等作用[2]；对皮肤和结缔组织、神经系统、淋巴循环、动静脉循环系统、脑脊髓神经组织、脏腑及内外分泌腺及心理健康均有医疗保健功效[3]，广泛应用于医药行业，比如大家都比较熟悉的用于跌打损伤的白花油、红花油，用于治疗痤疮的茶树精油等等。而日常生活中，精油多有适宜的香味,作为添香剂、医药中的香料[4]或有效成分添加应用于日用品和化妆品种，最常见的就是香水、花露水等;也会利用其挥发性强的特点，通过鼻腔、呼吸道、皮肤等进入人体，达到舒缓精神，消肿祛痛的功效，医学之父希波克拉底曾在古雅典遭受瘟疫袭击时，让民众在街头燃烧有香味的植物，利用植物的挥发性成分，杀死空气中的细菌，防止瘟疫扩散[5]。我国国地大物博、植物药种类繁多，植物药精油资源相当丰富，为植物精油的开发利用提供了有利的条件。但是，精油作为植物精华提取物，浓度较高，直接使用多少存在皮肤刺激性，造成精油在日常中应用的限制，且功效单一，所含成分复杂，张丽艳[6]等人对此还创新性地提出了利用中药配伍的原理对具有这一类作用的植物进行复配以达到增效减毒的目的。利用多种精油复合配比，制得用途广泛，既天然低刺激，又外观适宜、性质稳定的精油成分的复方莪术油，具有相当市场前景且满足广大人群需求，与市面上出现的莪术油有一定的竞争力。1精油的提取方法提取植物精油的方法有很多，目前主要采用水蒸气蒸馏法、浸取法和冷压法进行提取[7]。采用浸取法提取是，根据溶媒不同，又分为油脂吸附法、溶剂萃取法和超临界流体萃取法[8]。在对植物精油成分及活性进行研究时，常采用水蒸气蒸馏法、溶剂萃取法及超临界流体萃取法提取精油。其中尤以水蒸气蒸馏和超临界流体萃取为最佳，所获精油提取率和纯度均较其他方法高。但由于超临界流体萃取法设备属高压设备，投资较大，在实验室中广泛使用仍有一定的局限，故在实验室中我们多用水蒸气蒸馏法提取。水蒸气蒸馏法提取植物精油的基本原理是油水共沸。植物精油中有许多成分，沸点各不相同，其中多数成分的沸点在100℃左右。水蒸汽蒸馏法就是利用了精油的这一特点，使与植物汁液混合的水在化成水蒸汽时带着精油分子一起蒸发出植物表面，然后经冷却回流到油水分离器中，精油与水自然分层，精油浮于水层上。圆底烧瓶中损失的水分也会随着冷凝回流的过程而得到补充，如此循环操作以提取药材中大部分的挥发油，但最大的缺点就是温度过高，油水接触时间较长，挥发油成分容易遭到破坏。2精油的抑菌研究概述近几年的研究表明，许多植物精油杀菌谱广，对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、病原真菌等均有一定的杀菌活性。其杀菌广谱性以及强杀菌活性使其能够开发层为消毒杀菌药剂。侯华民、张兴等人研究了植物精油的熏蒸杀菌效果[9]，发现植物精油具有开发成为消毒剂的潜力。广州浩盈贸易有限公司以几种中药植物精油为原料研发成功空气消毒剂[10]，可以应用于医院、炉管、饭店、家庭居室以及人群密集的公共场所消毒，其效果与家庭紫外小消毒法、过氧乙酸熏蒸法相当。相比其他消毒方法和消毒药剂，植物精油气味芳香，对皮肤和粘膜刺激性小，具有很好的发展前景。再者，植物精油无论是一单种植物精油还是以多种植物精油混合物作为制剂，它们都具有良好的抑菌活性。另外，许多植物精油具有多种生物活性，即具有杀虫活性，也具有抑菌活性。植物精油的这些特点为其开发利用提供了有利的条件。但植物精油中化学成分复杂多样，而真正具有抑菌作用的化合物可能仅为其中一种或其中，各化合物间也可能存在复杂的拮抗或增效作用，这就需要对精油中的活性化合物进行分离并鉴定其结构，为复合精油的开发提供必要的资源。抑菌实验用于测定抑菌剂在体外抑制微生物生长的效能。虽然已报道的抑菌方法有很多,但是由于操作中的影响因素很多如植物的类型、精油提取方法的多样性、菌体的差异性、培养基的差异性及培养条件的不同等等,因此现在还没有一个统一的实验操作标准。目前,精油体外抑菌的实验方法大体上分为琼脂扩散法和稀释法两种。琼脂扩散法是抑菌实验中最常用的方法[9]。琼脂扩散法就是利用化合物可以在琼脂中扩散,使化合物扩散到的地方的微生物生长受到抑制,从而出现透明圈,初步判断该化合物有无抗菌活性.原理相同只是化合物载体不同.大致分为三种：滤纸片法、牛津杯法和琼脂炔法。2.1滤纸片法将化合物溶剂滴加到滤纸片上,然后将滤纸片贴到涂有微生物的固体培养基上,使化合物扩散。2.2牛津杯法先在平皿底部倒一薄层水琼脂,等凝结后放上牛津杯,再倒入混有微生物的培养基,凝固后将牛津杯取出,是培养基上形成孔,然后将化合物溶解加入到孔中,使之扩散。2.3琼脂块法待微生物在固体培养基上生长好后,将具体下方的琼脂切块取下,放到涂有微生物的固体培养基上,使化合物扩散.3植物精油的发展前景很多学者在植物精油的理化性质、生物活性、作用机理等方面已做了不少工作,今后植物精油产业化的发展不应仅仅局限于传统的医药、食品、日用化学等某一领域或某一方向应用,应走多学科、多方向