苦瓜汁对四种细菌的抑菌活性研究

苦瓜汁对四种细菌的抑菌活性研究

杏仁是科黄瓜科的一种植物。因为它起着特殊的味道。它也被称为洋甘菊、荔枝和糊状草。苦瓜喜温怕寒,在我国南方栽培历史悠久。其营养价值高,嫩果中含有丰富的矿物质、氨基酸和多种维生素。近年来大量研究证明,苦瓜具有降血糖、抗癌、抗病毒等功效,已成为国内外众多学者的研究热点。本文研究了苦瓜汁对四种常见细菌的抑菌活性及苦瓜汁抑菌活性的热稳定性,为苦瓜的深加工及其天然防腐剂的开发和研制提供理论参考。1材料和方法1.1材料和实验设备鲜苦瓜市售;大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、枯草杆菌(Bacillussabtilis)、沙门氏菌(Salmonella)均由实验室提供;牛肉膏蛋白胨培养基。LX-C35L自动电热压力蒸汽灭菌器合肥华泰医疗设备有限公司;SW-CJ-1F超净工作台苏州安泰空气技术有限公司;pHS-25酸度计上海虹益仪器仪表有限公司;HW12电热恒温水浴锅上海一恒科技有限公司;BL600A电子天平常熟双杰测试仪器厂;HR1704搅拌机珠海经济特区飞利浦家庭电器有限公司;GZX-9070ME数显鼓风干燥箱上海博迅实业有限公司;LRH-250A生化培养箱广东省医疗器械厂;LXJ-ⅡB离心机上海安亭科学仪器厂。1.2实验方法1.2.1打浆机打浆将新鲜苦瓜切成小块,加入35%的蒸馏水,放进打浆机内打浆。浸泡24h后,3500r/min离心15min,取上层淡绿色透明浸出汁,作为原液,放入冰箱低温保存备用。1.2.2活化次数及时间将所有供测试的菌种分别接种到试管斜面,37℃下活化24h,活化2~3次。将上述活化好的指示菌分别接种到灭菌好的液体肉汤培养基中,37℃恒温培养7h,使其达到含菌量为106~108CFU/mL的菌悬液,备用。1.2.3抑菌圈直径测定将灭菌的琼脂培养基冷却到50℃左右,接入10%的含菌量为106~108CFU/mL的上述菌悬液,混匀。将混有指示菌的培养基15mL倒入培养皿内,每个培养皿中均匀放置三个牛津杯,加入苦瓜汁(空白组加入无菌水)。把平板放置于37℃恒温培养箱中培养24h后,用尺子测量抑菌圈直径。每种指示菌做三个平板,即9个重复。以上操作均在超净工作台中完成。1.2.4热测试1.3结果不符合方差齐性应用SPSS进行方差齐性检验,如果不符合方差齐性则进行秩和检验。符合方差齐性者则进行F检验,F检验显著则再用S-N-K法进行两两比较。2结果与分析2.1s-n-k法测定培养模式对四种指示菌的抑菌圈平均直径和生物测定结果通过测定苦瓜汁抑菌圈的直径来评价其对四种指示菌的抑制状况,结果如表1所示。对四种指示菌的抑菌圈大小做方差齐性检验,结果如表2所示。由表2可知,P=0.929,远大于0.05,可知抑菌圈大小分布满足方差齐性,可以做方差分析,方差分析结果如表3所示。由P<0.001,可知苦瓜对四种菌体抑菌效果差异非常显著,利用S-N-K法对实验数据进行两两比较,分析结果如表4所示。苦瓜汁对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草杆菌均能形成明显的抑菌圈,四种指示菌形成的抑菌圈平均直径分别为:9.93、9.00、10.00、9.36mm,说明苦瓜汁对四种指示菌都具有明显的抑制效果。通过方差分析可知,苦瓜汁对四种指示菌的抑制效果存在显著区别。利用S-N-K法对四种指示菌进行一对一比较分析,结果将四种菌分成了两个亚组,金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌在一个亚组,组内的P值为0.141,表明苦瓜汁对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用区别并不显著;大肠杆菌和沙门氏菌在一个亚组,组内的P值为0.763,表明苦瓜汁对大肠杆菌和沙门氏菌抑制作用区别也不显著。两个亚组之间的P值大于0.05,表明苦瓜汁对大肠杆菌和沙门氏菌这两种革兰氏阴性菌的抑制能力显著区别于苦瓜汁对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌这两种革兰氏阳性菌的抑菌能力。但是苦瓜汁对革兰氏阴性细菌的抑制作用是否均大于对革兰氏阳性细菌的抑制作用,有待进一步实验验证。2.2苦艾酒的稳态研究2.2.1抑菌圈大小分布方差齐性分析将苦瓜汁分别于70℃和100℃下处理10min,做大肠杆菌的抗菌实验,同时作未经热处理的对照,实验结果如表5所示。对大肠杆菌的抑菌圈大小做方差齐性分析,结果如表6所示。由表6可知,P=0.521,远大于0.05,表明抑菌圈大小分布满足方差齐性,可以做方差分析,方差分析结果如表7所示。结果表明,未经热处理、70℃加热处理和100℃加热处理后的苦瓜汁对大肠杆菌均能形成明显的抑菌圈,其抑菌圈平均直径分别为:9.67、9.67、9.5mm。方差分析所得P值为0.758,远大于0.05,表明加热温度对苦瓜汁的大肠杆菌抑菌能力没有显著差别。2.2.2热处理对苦瓜汁抑菌圈的影响将苦瓜汁于100℃下分别处理10、20、30、40min,做大肠杆菌的抗菌实验,同时作未经热处理的对照,实验结果如表8所示。对大肠杆菌的抑菌圈大小做方差齐性分析,结果如表9所示。由表9可知,P=0.837,远大于0.05,表明抑菌圈大小分布满足方差齐性,可以做方差分析,方差分析结果如表10所示。结果表明,100℃下加热处理10、20、30、40min和未经热处理的苦瓜汁均能对大肠杆菌形成明显的抑菌圈,其抑菌圈直径分别为9.5、9.7、9.9、9.7mm。方差分析所得P值为0.855,远大于0.05,表明热处理时间对苦瓜汁大肠杆菌的抑菌能力没有显著差别。从2.2.1和2.2.2的实验结果可知,苦瓜汁抗菌活性在100℃以内具有较好的热稳定性。本实验结果和宋宇等人报道的在100℃以内,温度对苦瓜汁抑菌效果影响较明显,温度高于30℃时抑菌效果有减弱的趋势相反,但是和张雁报道的当加热温度不超过100℃,苦瓜水提物具有良好抑菌稳定性相吻合。3膜法菌种的抑菌效果3.1苦瓜汁对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和枯草芽孢杆菌均具有较好的抑菌效果。3.2苦瓜汁对大肠杆菌和沙门氏菌这两种革兰氏阴性菌的抑