毒理学实验一 鱼的急性毒性试验

08100049毒理学实验一、鱼的急性毒性实验背景知识急性毒性实验的主要目的是确定化学物质的毒性程度、剂量―反应关系，根据待测化学物质与其它已知毒性化学物质的相对毒性,推定具体的理化性质，测定其急性毒作用,以及提供毒作用模型方面的资料。此外,这种研究也能指出化学物质可能的靶器官及其特异性毒作用,并对亚慢性毒性试验研究中所用剂量提供指南。外源化合物的毒作用往往通过某一染毒持续时间的半致死量/浓度(LD50/LC50),或化学物质在空气中某一染毒浓度的半致死时间(LT50)，或用半数效应量(ED50或(EC50)来估计表示（注：化学物质在水中浓度对水生生物如无脊椎动物、鱼虾的死亡不易鉴别时使用）。水生生物的急性毒性试验广泛应用于水域环境污染监测工作中,对控制工业废水的排放，保护水域环境，制定水质标准，发展水产品的生产，具有重大意义。受试生物的急性实验有下列四种方式进行暴露试验即静态、循环、更新、动态,但最常用的方法是静态与动态方法。可提供下列的观测指标：①估计产生毒性作用的上限浓度，②估计不同种的水生生物对受试物的相对敏感性，③估计大量受试物的相对毒性，④估计水质对受试物毒性的影响(pH、溶解氧、盐度、硬度、悬浮物)。⑤得出浓度―反应关系曲线及暴露时间的意义,动态实验可提高保持令人满意的实验条件的能力,而且没有时间的限制。因此它能给出暴露时间―反应关系比较完美的估计。水生生物的急性毒性的实验应当设计成为能得到计数标准的反应(有或无,生与死)，受试污染物浓度与暴露生物中受影响生物的百分比之间的关系，可画出浓度―死亡率曲线。急性实验结果可表示每一实验浓度中死亡或不动生物的百分比;从观察内插法或计算中得出LC50，或EC50及相应的95%的置信区间。实验目的本实验通过观察在不同受试物浓度处理下，鱼的急性中毒表现和经过，了解和基本掌握测定毒物的半数致死剂量/浓度（LD50/LC50）的方法，了解受试物剂量和生物反应的关系及计算表示方法。实验原理鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24h、48h．72h、96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度。本实验将经过曝气驯化的鱼（保证其初始状态一致），放入不同浓度的重铬酸钾溶液中进行96hr的观察，记录不同浓度组6、24、48、72和96hr的鱼的死亡率，得出剂量-死亡率曲线，求出不同时间的LC50。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。实验材料与方法1.实验材料：1）待测化学物：使用实验室剂---重铬酸钾溶液K2Cr2O7（Cr6+,2000mg/L）溶液。配制一系列的浓度梯度溶液，本试验的浓度梯度为四个浓度梯度和一个空白对照，即150，100，63、39、0（mg/L）。每组三个同学，自己配制不同浓度系列的重铬酸钾溶液：2)实验动物：野生石纹鱼，金鱼等（从鱼市购买）：用曝气后的自来水驯养3天，补充氧气以保证溶解氧的浓度。2.实验条件及处理：静态方法1） 预试验：一般用3~5个动物,用对数比例形成的系列浓度,如0.01,0.1,1,10,l00ppm,同时做一对照（如受试物为废水,采用体积百分比浓度,如0.01,01,1,10,100%)从中寻找理想的范围.因为时间限制，本实验学生不做预试验。2）正式试验：计算并配制重铬酸钾系列浓度的溶液，选择健康的鱼，放入不同浓度的0、39、63、100和150mg/L的重铬酸钾溶液中，每个浓度的鱼缸里加入10条鱼，设1～3个平行。经过6，24，48，72，96小时后，在24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况。如果没有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动、碰触尾柄后无反应等，即可判断该鱼已死亡，观察并记录死鱼数目后，观察记录死亡鱼的数量并将死亡个体挑出。应在试验开始后6h观察各处理组鱼的状况，并记录试验鱼的异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积等）。（理论上试验开始和结束时要测定pH、溶解氧和温度。试验期间，每天至少测定一次。至少在试验开始和结束时，测定实验容器中试验液的受试物浓度）试验结束时，对照组的死亡率不得超过10％。结果与讨论1．数据处理1）以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率的曲线。用直线内插法或常用统计程序计算出6h、24h、48h、72h、96h的半致死浓度（LC50）值，并计算95％的置信限。如果试验数据不适于计算LC50，可用不引起死亡的最高浓度和引起100％死亡的最低死亡浓度估算LC50的近似值，即这两个浓度的几何平均值。（√Lmax*Dmin）2）实验开始后24h、48h、72h、96h时的LC50的值，并进行毒性分级评价（见附录）。3）实验报告包括实验目的、材料、方法、步骤、结果，并对结果进行讨论。附录鱼类急性毒性实验毒性分级标准鱼起始LC50（mg/L）毒性分级＜1剧毒1～100高毒10